③正调控机理：葡萄糖↑、cAMP↓、葡萄糖↓、cAMP↑ 4．其它问题
①P区、O区与蛋白质的结合：O区-７－+28有对称性、对称中点位于+11 P区-67n-52有一对称区：可能是cAMP-CAP复合物结合位点 ②影响乳糖操纵子的因素
a. I-、O-、Z-在局部二倍体中的排列
b. 真正的诱导物是异构乳糖，如细胞中有能清除它的物质 c. lacI的表达是弱启动子永久合成的，如其获得强启动子
d. lac系统酶很稳定，停止诱导mRNA后，其酶活性需通过分裂次数上升而稀
释
e. 当几个降解物敏感型启动子同时出现问题时，很可能是cAMP或CAP的合成
基因出现问题
f. 阻遏物与RNA聚合酶谁先占据位点，则谁发挥作用
g. 相对于Z来说，I的合成速度要慢得多，所以将I+Z+导入I-Z-中去时，Z
会先表达 二．色氨酸操纵子
合成代谢型操纵子的一般策略：外界有则关闭，外界无则打开 １、基本结构
P与O区也有很大重叠，O区20bp中的18bp形成反向重叠的对称结构。 2、阻遏系统
辅阻遏蛋白+trp+操纵区→不表达 辅阻遏蛋白+操纵区→不结合、表达
3、弱化系统：+123—+150缺失造成效率上升，如存在时，很多只转录出140bRNA片断
前导区有AUG与UGA→14个aa多肽→前导肽（未提取到）10、11上连继两个trp
组氨酸：7个， 苯丙氨酸7个
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trpL转录后1、2、3、4区，弱化子有终止子结构，正常1-2、3-4、3-4配对形成终止子（茎环+poly（U））
多trp时，tRNA上带trp多，快速通过两个trp，转录出4时，到达2，2-3无法形成
少trp时，tRNA上带trp少，回忆录出4时，在1，2-3配对，3-4无法形成 4．弱化与阻遏的关系
①可能是粗调与微调的关系，另可能阻遏物的空间结构转变慢 ②当外界有大量trP时，防止140b前导RNA合成，防止浪费 三．原核生物的SOS修复系统 1．SOS机制的RecA、LexA
①SOS修复机制的特点：放松DNA聚合过程中的校正活性，并启动一些修复机制表达 ②RecA与LexA
RecA：在正常重组中起重要作用 a. 重组活性
b. 单链DNA结合活性 c. 蛋白酶活性（需单链DNA）
RecA以依赖单链DNA的蛋白酶活性，作用于极少数蛋白，其中有LexA 有人认为是LexA具有潜在的蛋白酶活性，在RecA的诱导下激活，自体催化裂解
a. 当DNA受重伤时，RecA↑、LexA也拼命合成
（1200分子/C，上升50倍）
b. DNA完好时LexA↑关闭 ③噬菌体的阻遏蛋白 噬菌体的适应性反应 四．魔斑核苷酸水平的调控
大肠杆菌营养缺陷（trp-his-）在缺少任何一种必须氨基酸的培养基上，不仅
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蛋白质合成速度立即下降，RNA合成速度也下降，称为严密控制（基因型rel+）而另一种突变型则RNA合成速度不变，称成松散控制（rel-）,rel+可合成鸟苷四磷酸（PPGPP），鸟苷五磷酸（PPPGPP）rel-则不能合成，因为这两种化合物是在层析谱上检出的斑点，称为魔斑。（GTP+ATP→PPPGPP+AMP→PPGPP）rel+的初始信号是空载tRNA比例的上升，由于将AA-tRNA转运到正在延伸的多肽链上需GTP，也许是大量GTP的积累启动了魔斑合成。PPGPP是多效的，但它是主要作用可能是影响RNA聚合酶与启动子结合的专一性，从而成为严密控制的关键。 SD序列的微小变化，可使表达效率上百倍甚至上千倍改变 SD与AUG之间相距一般以4-10个b为佳，9个b最佳。
第七章 真核生物基因组结构及其基因表达调控
一．真核生物基因的重复序列 1．轻度重复序列
2-10个拷贝，中度重复序列10-几百个，高度重复序列(卫星DAN) 2．卫星DNA的等级结构及起源进化
小鼠卫星DNA234→117（有22个不同）→58bp（4个58bp的差异达40%）→（α亚单位）30bp（β亚单位）→三种9个相似重复单位 3?9(原本相同）→27→58→116 不均等交换： XababababY XabababXababY XababababY
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XababXabababY 二．真核生物的基因表达调控 1．顺式作用元件 ①启动子 ②增强子：
首先发现在SV40病毒中，在真核细胞中可能是通过启动子来增强转录的一种远端调控元件，在真核细胞中一般跨度为100-200bp，其核心常由8-12bp，可以有完整或部分的回文结构，常有数个8-12序列 特征：a.作用于同一条链DNA上 b. 无基因特异
c.许多有细胞或组织特异性 d.可在基因外或基因内 e. 无方向性
f. 可远离转录起始位点，常在1-4kb，多达30kb处 作用机制： a.影响模板附近DNA双螺旋结构 b.帮助RNA聚合酶寻找启动子
c. 增强子区可作为反式作用因子或RNA聚合酶Ⅱ进入染色质结构
的入口。
③沉默子 ④绝缘子
效应无件：位于一组基因前端使该组基因应答同一转录调控因子的DNA序列。 热效应元件（HSE）、血清效应元件（SRE）、糖皮质激素效应元件（GRE） 2．反式作用因子
①类固醇受体：与特定类固醇结合而得到激活 ②锌指结构： Cys2/His2 Cys2/Cys2
锌指本身约23个aa 经常是锌指连锌指
③螺旋-转角-螺旋：（H-T-H）
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这一类蛋白质中至少有2个α螺旋，中间由短侧链aa形成“转折” ④螺旋-环-螺旋：
每种两螺旋一侧有疏水残基表面，另一侧有带电基团形成的亲水表面：二聚体的任何一个无碱性区均缺乏与DNA结合的能力
⑤亮氨酸拉链： 每隔6个aa后出现一个亮aa二聚体
⑥同源域蛋白：同源域指编码60个保守aa序列的DNA片断，可能与有机体
的生长、发育和分化密切有关。
3．金属硫蛋白基因的多重调控（P284） BLE（基础水平元件，组成型表达）
TRE（组成型表达及应答，佛波酯试剂信号）
MRE（负责应答金属）：重金属中毒时表达,与金属结合再排出体外 GRE（应答类固醇信号）:糖皮质激素
第八章 实验技术简介 （详见多媒体课件）
一．限制性核酸内切酶（分子遗传P151） 1．限制-修饰现象：
K B C 2．限制修饰系统： ①Ⅰ：EcoK与EcoB为代表
K 1 10?4B 10?4C 1010?4 1 1 ?41 1 25