第七课 大豆制品中脲酶活性的测定(GB)
大豆制品是营养价值很高的蛋白质饲料。饲料中常用的大豆制品主要有大豆饼、粕及膨化大豆粉。但大豆制品中含有对动物有害的胰蛋白酶抑制因子、血球凝集素、皂角苷、甲状腺肿诱发因子以及抗凝固因子等抗营养因子，从而导致其蛋白质适口性下降、生物学价值降低、引起动物腹泻、胰腺肿大，以至影响到动物的正常生长发育，其中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子。这些有害因子来源于生大豆子实，大都不耐热，在生产过程中，只要经适当的加热就可以被灭活，使其再大豆制品中的残留量大大减少。因此残留于大豆制品中的抗营养因子含量与生产加工工艺密切相关。一般利用冷压工艺和萃取工艺生产的大豆饼粕中残留的抗营养因子含量较高，而利用热压工艺生产的则较少。但是，如果加热过度，由会引起一些氨基酸的破坏。大大降低了大豆制品的消化率及生物学价值。因此，再大豆制品的生产加工过程中，保证适宜的加热程度，既可使大部分抗营养因子灭活，又不致使蛋白质变性是非常重要的。大豆制品中的脲酶对单胃动物并非抗营养因子，但其活性与抗胰蛋白酶活性呈高度正相关，而且脲酶活性的测定方法与测定其他抗营养因子相比较有简便、快速和经济的优点。国内外常用脲酶活性作为检验大豆制品加热程度和抗营养因子水平的判断指标。因此，在饲料工业和动物养殖业，为了合理利用大豆制品，提高其饲用价值，严格检测其脲酶活性是非常重要的。脲酶的测定有定性法（酚红法）和定量法（滴定－PH法）
一 滴定－PH法
1 方法：本方法适用于大豆制品及其副产品中脲酶活性的测定，可确认大豆制品的湿热处理程度和抗胰蛋白酶等抗营养因子的水平。
脲素酶活性是指：在30±0.5℃和PH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
2 原理：将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30分钟，尿素酶催化尿素水解，产生氨，用过量的盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准液回滴。根据消耗的氢氧化钠标准液数量，即可计算出脲酶水解放出的氨氮含量，从而计算得出脲酶活性。
3 实验准备：样品筛、酸度计、恒温水浴、电子天平（1／万）、实验室用粉碎机、具塞刻度试管（30ml）、移液管（10 ml）
4 试剂及配制： （1）尿素
（2）磷酸二氢钾 （3）磷酸氢二钠
（4）尿素缓冲液（PH6.9－7.0）：准确称取3.4g经110℃烘干的磷酸二氢钾和4.45g磷酸氢二钠，用蒸馏水溶解后定容至1000 ml；再将30.0g尿素溶解在此缓冲液中，可保存一个月。
（5）0.1 mol/L盐酸溶液：用量筒量取8.4 ml浓盐酸，注入1000 ml水中。 （6）0.1 mol/L氢氧化钠标准溶液：4g氢氧化钠溶于1000 ml水。 5 测定步骤：
（1）样品中脲酶活性的测定：
A 准确称取已粉碎的样品0.2g（精确至0.0001g），置于刻度试管中（如
活性很高，只称0.05g）。
B 移取尿素缓冲液10ml，加入试管，立即盖上塞子。 C 剧烈振荡。
D 马上置于30±0.5℃恒温水浴锅中反应，准确计时30分钟。 E 取下后立即加入10 ml 0.1 mol/L盐酸溶液。
F 迅速冷却至20℃，将试管内容物无损的转移至小烧杯中。 G 再用5 ml蒸馏水冲洗试管2次，转移至小烧杯中。
H 立即用0.1 mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至PH为4.7。记录氢氧化钠
标准液消耗量。
（2）空白测定：
A 移取尿素缓冲液10ml，加入试管。 B 加入10 ml 0.1 mol/L盐酸溶液。
C 准确称取与上述试样量相当的样品（精确至0.0001g），迅速加入此试
管中，立即盖上塞子剧烈振荡。
D 马上置于30±0.5℃恒温水浴锅中，准确计时保持30分钟。 E 迅速冷却至20℃，将试管内容物无损的转移至小烧杯中。 F 再用5 ml蒸馏水冲洗试管2次，转移至小烧杯中。
G 立即用0.1 mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至PH为4.7。记录氢氧化钠
标准液消耗量。
6 计算公式：测定结果以每克大豆制品在30℃和PH7的条件下释放出的
氨态氮的毫克数表示。
UA＝（V0-V）*C*0.014*1000/(m*30)
式中：UA为试样的脲酶活性，mgN*(g*min*30℃) C为氢氧化钠标准液的浓度（mol/L）
V0为滴定空白反应液消耗的氢氧化钠溶液的体积（ml） V为滴定试样反应液消耗的氢氧化钠溶液的体积（ml） m为试样质量（g）
0.014为1摩尔质量氢氧化钠相当于0.014 g氮 30为反应时间（min）
二 酚红法（定性法）
1 适用范围：本方法适用于大豆制品中脲酶活性的快速测定，定性地判
断大豆制品的生熟程度，但不能作为仲裁法。
2 原理：酚红指示剂在PH6.4－8.2时由黄变红，大豆制品中所含的脲酶，
在室温下可以将脲酶水解产生氨。释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断脲酶活性的大小。
3 实验准备：实验室用粉碎机、具塞刻度试管（50ml）、天平（0.01g） 4 试剂及配制： （1）尿素
（2）酚红指示剂：1g酚红溶于1000ml乙醇（20％）溶液。 5 测定步骤：称取0.02g试样（准确至0.01g），转入试管中。加入0.02g
结晶尿素及2滴酚红指示剂，加20－30ml蒸馏水，摇动10分钟。观察溶液颜色，并记下呈粉红色的时间。
6 计算和结果表示。
1min呈粉红色为：活性很强；
1－5 min呈粉红色为：活性强； 5－15 min呈粉红色为：有点活性； 15－30 min呈粉红色为：没有活性；
一般认为，10 min以上不显粉红色为或红色的大豆制品，其脲酶活性即认
为合格，生熟度适中。脲酶活性与呈色时间对照表如下：
脲酶活性与呈色时间对照表
时间／min 脲酶活性 时间／min 脲酶活性 0－1 0.9以上 1－2 0.9－0.7 2－3 0.7－0.5 3－4 0.5－0.3 4－5 0.3－0.2 5－6 0.2－0.15 6－7 0.15－0.1 7－9 0.1－0.05 >15无色 0
第八课 配合饲料加工质量检测
衡量配合饲料加工质量的主要指标通常包括配合饲料混合均匀度、配合饲料粉碎粒度、颗粒的硬度、颗粒粉化率、颗粒料的淀粉糊化度等。目前，在我国颁布的猪、鸡配合饲料产品质量标准中规定的加工指标主要包括混合均匀度和粉碎粒度。
一 配合饲料粉碎粒度的测定：粉碎粒度是衡量颗粒大小和颗粒多少的技术指标。不同动物以及同一动物在不同生产时期对配合饲料粉碎粒度有不同的要求。日粮中谷物的粉碎粒度与动物的生产性能密切相关。对于猪，粉碎粒度在700微米左右为宜。
1 适用范围：本方法适用于规定的标准编织筛测定配合饲料成品的粉碎粒度。
2 仪器设备：
（1）标准编织筛。筛目：4，6，8，12，16。净孔边长（mm）：5.00，3.20，2.50，1.60，1.25。 （2）摇筛机
（3）天平：感量为0.01g。
3 测定步骤：从原始样品中称取试样100g，放入规定筛层的标准筛内，开动电动摇筛机10min，筛完后将各层底物筛上物分别称重。 计算公式：
该筛层上留存百分率＝该筛层上留存粉料的质量／试样质量*100% 检验结果计算到小数点后第一位,第二位四舍五入。
过筛的损失量不得超过1％，双试验允许误差不超过1％，求其平均数即为检验结果。 注意事项： （1）测定结果以统一型号的电动摇筛机为准，在该摇筛机未定型与普及前，各地暂用测定面粉粗细度的电动筛筛理（或手工筛5min计算结果）。 （2）筛分时若发现未经粉碎的谷物与种子时，应加以称重并记载。
二 配合饲料混合均匀度的测定：混合均匀度即饲料混合的均匀一致性，食饲料混合工艺质量的一项重要指标。配合饲料的混合均匀度一般要求变异系数不超过10％，预混合饲料的混合均匀度变异系数不超过7％。变异系数越大，则表明饲料的成分在产品种的分布越不均匀。特别是添加到饲料中的微量添加剂成分，如果不能比较均匀分布在产品中，一方面会降低产品的使用效果，另一方面可导致一部分动物食入不足或食入过量，严重时可能导致动物的中毒。因此，保证饲料产品的混合均匀度，对确保饲料产品的质量至关重要。配合饲料混合均匀度的测定方法有两种：氯离子选择电极法和甲基紫法。
1 示踪法（甲基紫法）：通过配合饲料中示踪物或某一组分含量差异的测定反映饲料中各组分分布的均匀性。本方法主要适用于混合机和饲料加工工艺中混合均匀度的测定。
2 实验准备：分光光度计、电子天平、天平、烧杯（250ml）、玻璃漏斗、滤纸、漏斗架、三角瓶（100ml）、量筒（100ml）、表面皿玻璃棒等。
3 试剂及配制：
（1）甲基紫（生物染色剂） （2）无水乙醇 4 测定步骤：
（1）示踪物的制备和添加：将测定用的甲基紫混匀并充分研磨，使其全部通过100μm标准筛。按照配合饲料成品量十万分之一的用量，在加入添加剂的工段投入。充分混匀，以四分法从中分取10g试样进行测定。
（2）样品的采取与制备：每一批样品至少抽取10个有代表性的原始样品，每个原始样品的数量以畜禽的平均日采食量为准。10个有代表性的原始样品必须考虑各方位的深度、袋数和料流的代表性，但每一个原始样品必须由一点集中取，不允许有任何翻动或混合。
（3）将上述原始样品充分混匀，以四分法从中分取10g试样（准确至0.0002g）,放在250ml小烧杯中，加入30ml无水乙醇，不时地加以搅动，盖上表面皿，30min后用滤纸过滤（定性滤纸，中速），以无水乙醇作为空白调零，用分光光度计，以5mm比色皿在590nm的波长下测定滤液的吸光度。
5 计算结果：以各个样品的吸光度值为X1、X2、X3….X10，其平均值为X0。标准差（S）与变异系数（CV）按以下公式算：
X0＝X1+X2+X3+….+X10／10 S=
6 注意事项：
（1）同意批饲料的10个样品测定时应尽量保持操作的一致性，以保证测定值的稳定性和重复性。 （2）测定混合均匀度的甲基紫必须用同一批次的并加以混匀后才能保持同一批饲料中各样品测定值的可比性。
（3）配合饲料中若添加苜蓿粉、槐树叶等含有叶绿素的组份，则不能用甲基紫法测定。
第八课 饲料级氯化胆碱的测定
1． 范围
本标准规定饲料级氯化胆碱的要求、试验方法、检验规则及标签、包装、运输、贮存等。
本标准适用于以三甲胺盐酸水溶液与环氧乙烷反应生成的氯化胆碱水剂和氯化胆碱水剂为原料加入玉米芯粉、脱脂米糠、稻壳粉、麸皮、二氧化硅等适于饲料用的赋形剂制成的氯化胆碱粉剂。 分子式：C5H11NclO
CH3 |
结构式：[HOCH2CH2-N+-CH3]Cl-
| CH3
相对分子质量：139.63（按2001年国际相对原子质量）
2．实验方法
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682三级水。 2．1氯化胆碱的鉴别试验 2．1．1试剂和材料