2．1．1．1氢氧化钾。
2．1．1．2高锰酸钾。
2．1．1．3硫酸溶液：6+100。 2．1．1．4硝酸溶液：10+100。
2．1．1．5雷氏盐（二氨基四硫代氰酸铬铵）甲醇溶液：20g/L(称取两克雷氏盐，溶
于100ml甲醇，过滤；该溶液配成48h后即不能使用。)
2．1．1．6碘化汞钾溶液：称取1.36g二氯化汞，加60ml水溶解，另称取5g碘化钾加10ml水溶解，将两种溶液混合，加水稀释至100ml。 2．1．1．7氨水溶液4+10。 2．1．1．8硝酸银溶液：17g/L.
2．1．1．9红色石蕊试纸：变色范围PH4.5~8.0（红-兰） 2．1．1．10淀粉碘化钾试纸。 2．2雷氏盐重量法 2．2．1方法提要
水剂样品用水稀释作为实验溶液；粉剂样品中的氯化胆碱用水在加热的条件下震荡提取，定容并过滤，取适量滤液作为实验溶液；实验溶液中的氯化胆碱与雷氏盐（二氨基四硫代氰酸铬铵）反应，形成晶状沉淀，用重量法测定氯化胆碱含量。 反应方程式如下：
NH4Cr(NH3)2(SCN)4+[(CH3)3NCH2CH2CH2OH]+Cl-＝[(CH3)3NCH2OH]+Cr(NH3)2(SCN)4+NH4Cl
2．2．2试剂
（1）盐酸溶液：1：4。
（2）氢氧化钠溶液：400g/L. （3）雷氏盐（二氨基四硫代氰酸铬铵）甲醇溶液：20g/L(称取两克雷氏盐，溶于100ml甲醇，过滤；该溶液配成48h后即不能使用。)
(4) 甲基红-亚甲基蓝混合指示液：2 g/L甲基红乙醇溶液，1 g/L亚甲基蓝乙醇溶液，等体积混合。
2．2．3 仪器
（1）玻璃砂芯坩埚：滤板孔径（4~7）um.。 （2）电热干燥箱：可控温度再（105±2）℃。 2．2．4 分析步骤 （1）水剂的测定
称取约0.7g实验室样品，精确至0.0002g，置于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇均。移取该溶液10.0ml。于100ml高型烧杯中，加1滴甲基红-亚甲基蓝混合指示液，用盐酸溶液调至紫红色（PH5~PH6）,与冰水浴中冷却至5oC以下，继续保持在冰水浴中，再搅拌下，缓慢滴加15ml雷氏盐甲醇溶液，继续搅拌反应30min再静置陈化30min。降沉淀转移到预先已干（105±2）Oc下干燥至质量恒定的玻璃砂芯坩埚移入（10±52）oC电热干燥箱内，干燥2h，取出，与干燥期内冷却至室温，称量（沉淀质量应在0.1g~0.2g,可适当调整取样量）。 在测定的同时，按与测定相同的步骤，对不加实验室样品而使用相同数量的试剂溶液做空白试验。
（2）粉剂的测定
称取在（80±2）℃下干燥2h的试样约1g，精确至0.0002g，置于250ml具塞三角瓶中，加水70ml，摇均，在约70℃水浴上加热15min，塞紧瓶塞，在振荡器上震荡10min，
将溶液转移至250ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇均，用干燥的滤纸和漏斗过滤，移取该滤液25.0ml,于100ml高型烧杯中，加3ml氢氧化钠溶液，盖上表面皿，在电炉上加热微沸5min，冷却，用水冲洗表面皿及烧杯壁。加一滴甲基红-亚甲基蓝混合指示液，用盐酸溶液调至紫红色（PH5~PH6）,置于冰水浴中冷却至5℃以下，继续保持在冰水浴中，搅拌下，缓慢滴加15ml雷氏盐甲醇溶液，继续搅拌反应30min，静置沉化30min。将沉淀转移到[（105±2）℃下干燥至质量恒重，记号，称重]玻璃砂芯坩埚中。移入（105±2）℃干燥箱内，干燥2h，取出，于干燥器中冷却至室温，称重（沉淀质量应在0.1g~0.2g,可适当调整取样量）。 2．2．5 结果计算
以质量分数表示的氯化胆碱含量w2=(m2-m1)*10*0.33045*100/m
式中：
ｍ2 －沉淀质量的数值，单位为克（g）；
ｍ１－空白氏盐沉淀质量的数值，单位为克（g）；数值为0.0009克 ｍ－试料质量的数值，单位为克（g）；
0.33045－氯化胆碱摩尔质量与雷氏盐－氯化胆碱沉淀产物摩尔质量的比值； １０－试料的稀释倍数。
取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。水剂两次平行测定结果的绝对差值不大于０.５％。粉剂两次平行测定结果的绝对差值不大于０.８％。
第八课 饲料添加剂氨基酸的测定
蛋氨酸含量的测定
1 测定原理:在中性介质中准确加入过量的碘溶液,将两个碘原子加到蛋氨酸的硫原子上,过量的碘溶液用硫代硫酸钠标准液回滴。 2 试剂与溶液：
（1）500 g／L磷酸氢二钾溶液； （2）200 g／L磷酸二氢钾溶液；
（3）200 g／L碘化钾溶液； （4）碘溶液；0.1 mol/L
配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。 2.用去离子水溶解并定容至1L
标定：量取35－40 m1配好的碘溶液，置于碘量瓶中，加150 m1水（15℃－20℃），用硫代硫酸钠标准液［C（Na2S2O）=1.000 mol/L］滴定，近终点时加2 m1淀粉指示剂（10g／L）继续滴定至溶液中蓝色消失，即为终点。
同时做水消耗碘的空白试验：取250 m1水（15℃－20℃），加入0.05 m1－0.20 m1配制好的碘溶液及2 m1淀粉指示剂（10g／L），用硫代硫酸钠标准液［C（Na2S2O）=1.000
mol/L］滴定至溶液中蓝色消失，即为终点。
碘标准液浓度［C（1／2I2）］数值以摩尔每升（mol/L）表示， C（1／2I2）＝（V1-V2）＊C1／（V3-V4）
V1――滴定时消耗硫代硫酸钠标准液体积（m1）
V2――滴定空白时消耗硫代硫酸钠标准液体积（m1） C1――硫代硫酸钠标准液浓度（mol/L） V3――试样中碘溶液体积（m1）
V4――空白试验中加入碘溶液体积（m1）
（5）硫代硫酸钠标准液：0.05 mol/L
(6) 10g／L淀粉指示剂
3 测定:称取样品0.3g(准确至0.1mg)移入500 m1碘量瓶中,加入100 m1无离子水,然后分别加入10 m1磷酸氢二钾溶液、10 m1磷酸二氢钾溶液、10 m1碘化钾溶液，待全部溶解后准确加入50.00 m1碘溶液，盖上瓶盖，水封，充分摇匀，于暗处放置30min，用硫代硫酸钠标准液滴定过量的碘，近终点时加入1 m1淀粉指示剂，滴定至无色并保持30s为终点，同时做空白试验。
3 分析结果与计算：样品中的蛋氨酸含量（X）的计算： X=（V0-V）＊C＊0.0764／W
式中C――硫代硫酸钠标准液的浓度（mol/L
V――滴定试样时消耗的硫代硫酸钠标准液的体积（m1）
V0――空白消耗的硫代硫酸钠标准液的体积（m1） W――试样的质量（g）
0.0764――与1.00 m1硫代硫酸钠标准液C［（Na2S2O）=1.000 mol/L］相当的、以克表示的DL－蛋氨酸的质量。
测定结果应为样品的两个平行测定结果的算术平均值，且两次平行测定结果的绝对值不得大于0.1％。所得结果应表示至一位小数。
饲料中氟的测定
（离子选择性电极法）
通常植物性饲料中含氟量较低，在50mg/kg以下，而且除少数几种植物外，绝大多数植物一般不吸收大量的氟，但在氟污染区生产的植物性饲料中氟含量较高，可达几十至几百mg/kg;氟主要沉积于动物骨骼组织和牙齿中，正常动物的骨骼中氟含量可达129mg/kg。 氟 氟的测定方法：有比色法和离子选择性电极法。比色法具有灵敏度高、色泽稳定、重现性好、结果准确等特点。离子选择性电极法测定范围宽，干扰小，简便，是国家规定的标准方法。适于含量较高、变化范围较大和干扰大的饲料测定。（当氟的含量低时，会出现非线性关系，宜选用比色法测定）。
1．测定原理
氟离子选择电极的氟化镧单晶膜对氟离子产生选择性的对数响应，氟电极和饱和甘汞电极在被测试液中，电位差可随溶液中氟离子的活度的变化而变化。电位变化符合能斯特方程式。
E与lgcF-成线性关系。2.303RT/F为该直线的斜率（25℃为59.16）。 与氟离子形成络合物的Fe3+,Al3+及SiO2-3 等干扰测定，其他常见离子无影响。测
量溶液的酸度为pH5—6,用总离子强度调节缓冲液消除干扰离子及酸度的影响。 试剂和溶液
2．试剂与药品
本方法所用试剂均为分析纯，水均为不含氟的去离子水。全部溶液贮于聚乙烯塑料瓶中。
（1）3mol/L乙酸钠溶液 ：称取204g乙酸钠（CH3COONa·3H2O,GB693）,溶于300ml水中，待溶液温度恢复到室温后，以1mol/L乙酸（GB676）调节PH至7.0，移入500ml容量瓶，加水至刻度定容。
（2）0.75 mol/L柠檬酸钠溶液（Na3C6H5O7·2H2O,HG 3-1298）q取110g溶于约300ml水中，加高氯酸（HclO4,GB623）14ml,移入500ml容量瓶，加水至刻度。 （3）总离子强度调节缓冲液：3 mol/L乙酸钠溶液与0.75 mol/L柠檬酸钠溶液等量混合，临用时配制（时间长了失效）。
（4）1 mol/L盐酸溶液：量取10ml盐酸（GB622）, 加水稀释至120ml。(一般配80ml盐酸放入880ml水。)
（5）1 mol/L乙酸溶液：57.2乙酸加到1000ml水中（一般配500ml即可，28.6ml放入500ml 水） （6）氟标准溶液。
1）氟标准储备液：称取经100℃干燥4小时冷却的氟化钠（GB1264）0.2210g，溶于水，移入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱内保存此夜相当于1.0 mg/ml氟。
2）氟标准溶液：临用时准确吸取氟储备液10.0ml于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀。此液相当于100ug/ml氟。
3) 氟标准稀溶液：准确吸取氟标准溶液10.0ml于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀。此液相当于10ug/ml氟。 (7) 0.4mol/L柠檬酸钠（洗电极用）58.7g放入1000ml水中。（一般配置500ml，29.4g放入500ml水）
3.仪器、设备
（1）氟离子选择电极：测量范围10-1~5×10-7mol/L,CSB-F-1型或与之相当的电极。
（2）甘汞电极：232型或与之相当的电极。 （3）磁力搅拌器。
（4）离子计：测量范围0～－1400mV,PHS-2型或与之相当的酸度计或电位差计。
（5）分析天平：感量0.0001g。
（6）纳氏比色管：50ml。
4．试剂选取和制备
采集具有代表性的饲料样品，至少2kg，以四分法缩分至约250g,磨碎，过1mm（20目）孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。
5．测定步骤
（1）氟标准工作液的制备。吸取氟标准稀溶液0，1.0，2.5，5.0，和10.0ml
（相当于0，10，25，50，和100ug氟），再吸取氟标准溶液2.5，5.0，10.0ml和氟标准储备液2.5ml（相当于250，500，1000和2500ug氟），分别置于50ml容量瓶中，于各容量瓶中分别加入1mol/L盐酸溶液10ml，总离子强度调节缓冲液25ml，加水至刻度，混匀。上述两组标准工作液的浓度分别为每毫升相当于0 ，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，和50.0ug氟。
（2）试液制备。称取0.5~1g试样，精确到0.001g置50ml纳氏比色管1中，加入1 mol/L盐酸溶液10ml，密闭提取1h（不时轻轻摇动比色管），应尽量避免试样粘于管壁上。提取后加总离子强度调节缓冲液25ml，加水至刻度，混匀，以滤纸过滤，滤液供测定使用。
（3）测定。将氟电极和甘汞电极与测定仪器的负端和正端连接，将电极插入盛有水（去离子水） 的50ml聚乙烯塑料杯中，并预热仪器，在磁力搅拌器上以恒速搅拌，读取平衡电位值，更换2~3次水，待电位值平衡后，即可进行标准工作液和样液的电位测定。（见注意事项2）
按浓度由低到高的顺序依次测定氟标准工作液的平衡电位。以电动势做纵坐标，氟离子浓度做横坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。同法测定试液的平衡电位，从标准曲线上读取试液的含氟量。
6．计算和结果表示
（1）试样中氟的质量分数计算 w(F)= ρ×V/m
式中：ρ为试液中氟的浓度，ug/ml；m为试样质量，g；V为试样总体积，ml.
（2）结果表示。每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值作为测定结果，结果表示到0.1mg/kg。
（3）重复性。同一分析者对通体式样同时或快速连续地进行2次测定，所得结果之间的差值；
在F-含量〈=50ｍｇ/ｋｇ，不得超过平均值的10％； 在F-含量 〉50ｍｇ/ｋｇ，不得超过平均值的5％。
７．注意事项
（１）此法较快速，也可避免灰化过程引入的误差。但植物性饲料样品中，尚有微量有机氟。如欲测定总氟量时，可将样品灰化后，使有机氟转化为无机氟，再进行测定。
（２）每次氟电极使用前，应在水中浸泡（活化）数小时，至电位为340mV以上（不同生产厂家的氟电极，其要求不一致，请依据产品说明），然后泡在含低浓度氟（0.1或0.5 ｍｇ/ｋｇ）的0.4mol/L柠檬酸钠溶液中适应20min，再洗至320mV后进行测定。以后每次测定均应洗至320mV,再进行下一次测定。经常使用的氟电极应泡在去离子水中，若长期不用，则应干放保存。
（3）电级长期使用后，会发生迟钝现象，可用金相纸擦，以活化表面。 （4）根据Nernst公式可知，当浓度改变10倍，电位值只改变59.16mV（25℃）,也即理论斜率为59.16，据此可知氟电极的性能好坏，一般实际中，电级工作曲线斜率≥57mV时，即可认为电极性能良好，否则需查明原因。
（5）为了保持电位计的稳定性，最好使用电子交流稳压电源，如在夏冬季或在室温波动大时，应在恒温室或空调室进行测量。