若不能及时检查，应将血清或血浆与细胞分离，进行适当的处理。 11. 一次性器材 只能使用一次，不能反复使用。
四、血红蛋白测定(Hemoglobin简称Hb)
氰化高铁血红蛋白法
【原理】
血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子(CN-)结合生成稳定的氰化高铁血红蛋白，用光电比色法根据标准曲线求得每升血液的血红蛋白克数。 【试剂】 HicN试剂 【操作方法】
取试剂5毫升加入血液20立方毫米混匀置5分钟后用540nm波长，试剂为空白调0点比色，读取光密度，查标准曲线得结果。 【报告方式】 Hb XXX g/L 【参考区间】
男性成人：120—160g／L 女性成人：110—150g／L
新生儿： 170—200g／L
五、红细胞计数(red blood cell简称RBC)
——显微镜直接计数(试管法)
【原理】
一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数。 【血细胞计数板】
血细胞计数板中央有两个刻度平台(即血细胞计数池)，每个平台划分为9个大方格，每个大方格的面积为1平方毫米，加特制盖片的深度为0.1毫米，故每l大方格的容积为0.1立方毫米。四角的四个大方格又等分为16个中方格，作为计数白细胞用。中央大方格又等分为25个中方格，每个中方格又等分为16个小方格，共为400个小方格，作为计数红细胞和血小板之用。计数台之上覆以特制的盖片(厚度0.4mm，
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表面平直，质地较硬)后构成计数室。每个大格方格体积是0.1mm(1mm31mm30.1mm)，参阅图1、2及3。
【操作方法】
l、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。 2、用血红蛋白吸管吸血至l0立方毫米处。
3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，吸上清
液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。
5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。 红细胞计数的区域是中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。计数方法：长城迂回法。计数原则：凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线
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上者不计入。即“数上不数下，数左不数右”的原则进行 。
图4 红细胞计数的方式
【计算】
红细胞数/L=5个中方格内红细胞数3531032013106或 红细胞数/L=5个中方格内红细胞数÷10031012 式中35 5个中方格换算成1个大方格
310 1个大方格容积为0.1ul，换算成1.0 uL。 3201 血液的稀释倍数 3106 由u1换算成L 【报告方式】 RBC XXX 31012/L 【注意事项】
1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采血，同时做血红蛋白测定、红细胞计数、白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。 2、充液前，红细胞悬液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。
3、中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格红细胞数约为80—100个，各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大(超过10个细胞以上的)应重混匀再充填。
【参考区间】 男性成人： (4 —5.5) 31012/L 女性成人： (3.5—5 ) 31012/L
新生儿： ( 6— 7 ) 31012/L
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实验 二
血液一般检验（二）General Examination of Blood
【内容】
1、白细胞计数及分类计数 2、各类白细胞的形态(示教) 【目的要求】
1、掌握白细胞直接计数，分类计数的标本送检要求、方法及参考值，并换算出白细胞绝对值。
2、掌握血液涂片的制作与瑞氏染色方法。
3、熟悉并能识别三类五种白细胞的正常形态及常见异常白细胞的形态。 【器材】
血细胞计数板 、载物片、推片、手揿计数器、染色架、吸耳球、三棱针、酒精棉球及干棉球，血红蛋白吸管，小试管，显微镜。 【试剂】
1、白细胞稀释液，冰醋酸2毫升，蒸馏水加至98ml，l％亚甲兰(或结晶紫)数滴显色借以区别其他稀释液。
2、瑞氏染液、缓冲液或蒸馏水、香柏油。
瑞氏—姬姆萨复合染色液
取瑞氏染粉1g，姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇(分析纯)，研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇继续研磨，再吸出上层染液，如此连续几次，共用甲醇500ml，收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟共5天，以后存放一周即能使用。
【实验】
一、 白细胞计数(White b1ood cell简称WBC)
【原理】
血液经稀酸稀释后，成熟红细胞全部被溶解，注入计数池后，在显微镜下计数白细胞。 【操作方法】
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1、取白细胞稀释液0.38毫升，置于小试管内。
2、用血红蛋白吸管吸血液至20立方毫米处，擦去管尖多余的血液，将血液迅速放入稀释液中再吸上清液冲洗几次，立即混匀。
3、待液体呈褐色后，摇匀用玻棒充填入计数池内(与红细胞计数操作相同)。 4、静置2-3分钟，低倍镜下计数四角四个大方格中白细胞总数。计数原则压边线的白细胞，仍为数上不数下，数左不数右。 【计算】
4个大方格内白细胞总数
白细胞数/L= ————————————3103203106 4
式中 ÷4 为每个大方格(即0.1u1)内白细胞平均数
310 1个大方格容积为0.1ul，换算成lul 320 血液稀释倍数 3106 由lul换算成1L 【报告方式】 WBC XXX 3109/L 【参考区间】
成人： (4—10 ) 3109/L 新生／L (15—20) 3109/L
6个月至2岁： (11—12) 3109/L 【注意事项】
1、与红细胞计数的注意事项相同
2、计数时，两次重复计数误差不得超过10%。
3、在某些病理情况下，血中可出现大量有核红细胞以致影响白细胞计数，此时应通过分类计数将有核红细胞从总数中减去。 【校正公式】
白细胞校正数=X3100／100+Y X=未校正前白细胞数
Y=在分类计数时，计数100个白细胞的同时，计数到的有核细胞数 例：某标本校正前“有核细胞数”为103109/L ，血片分类计数100个白细胞过程中见有核红细胞20％个。则校正后的白细胞数应为：
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