临床检验基础实验指导 - 图文(6)

2019-04-22 10:39

1+=肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。

±=镜下可见数个红细胞凝集在一起.周围有很多游离红细胞。

MF=混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。

一表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。 (7)按下表报告受检者红细胞ABO血型。 2.玻片法

(1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明抗-A、抗-B和抗—A+B分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗—A+B血清1滴于标明的方格内,再各加受检者2%红细胞悬液1滴,混和。

(2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明A细胞、B细胞和O型细胞,用滴管各加受检者血清1滴,再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

(3)将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与细胞充分混匀,连续约15min,以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。如以玻片作试验时,也可用低倍镜观察结果。

表1 ABO血型正反定型结果

分型血清+受检者红细胞 受检者血清+试剂红细胞

受检者血型判断 抗-A 抗-B 抗-A+B A细胞 B细胞 O细胞 + - + A - + - - + + B + - - - - - O + + - + + + AB - - -

注:+:凝集;-:不凝集。

【报告方式】 正定血型(试管法或玻片法) 3型

反定血型(试管法或玻片法) 3型

应说明正反定型结果是否一致,一致才可发报告,否则要认真复查找原因。

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实验二 交叉配血试验

交叉配血试验又称不配合性试验,是确保患者安全输血必不可少的试验,完整的

操作规程应包括:①查阅受血者以前的血型检查记录,如与这次检查结果有所不同,可以及时分析原因:②对收到的受血者血样应作ABO正反定型,必要时作Rh血型和其它血型检查以及血型抗体检测和鉴定;③选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。

交叉配血试验方法很多,重点介绍盐水介质配血法。 (一)盐水介质配血法

本办法是目前最常用的配血方法,可以发现临床上最重要的ABO不配合性。当受血者和供血者细胞经混合并离心后,如有ABO不配合问题,就会很快显示出来,所以常称为“立即离心”(immediate spin)配血试验。

1.抽取受血者静脉血3~4ml,待凝固后分离血清,并将红细胞配成2%盐水悬液。

2.将供血者血样以同样方法分离血清,并配制2%红细胞悬液。

3.取洁净小试管(10mm360mm)2支,1支标明受血者血清(PS)十供血者细胞(DC);另1支标明供血清(DS)十受血者细胞(PC)。

4.按标记主侧管放受血者血清1滴,加供血者红细胞悬液1滴。次侧管放供血者血清1滴,加受血者红细胞悬液1滴。混匀,以1000r/min离心lmin,轻轻侧动试管,观察结果。冬季室温较低,应将试管保温,以防冷凝集素引起的凝集反应。 结果判断

ABO同型配血,主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌,可以输血。如急需输血但一时无同型血液,作异型配血时(指O型血输给A、B或AB型,或A、B型血输给AB型时),主侧无溶血及凝集,但次侧必然有凝集或溶血。故实际上不必再做次侧交叉配血试验,如发现次侧无凝集,应进一步分析原因。如因故急需进行异型输血,应检查供血者血清中抗A(B)效价,如效价<200、无溶血者,可给予少量输血。 【报告方式】

1、受血者333(3型)血清 + 供血者333(3型)红细胞 有或无 溶血及凝聚

2、供血者333(3型)血清 + 受血者333(3型)红细胞 有或无 溶血及凝聚

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3、受血者333 与 供血者333 盐水介质配血是否相合

(二)聚凝胺介质配血法 【原理】

红细胞表面带有大量的负电荷,以避免其产生自发性聚集,当红细胞旋悬浮在电解质时,阳离子会被红细胞的负电荷所吸引,此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕,而形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

聚凝胺技术首先利用低离子介质(LIM),降低介质的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞和血清(血浆)中的抗体结合。

其后,加入聚凝胺(Polybrene)试剂,它是一种高阶阳离子多聚物,是肝素中和剂,溶解后能产生很多正电荷,可以中和红细胞表面带有的负电荷,使红细胞Zeta电位降低,缩短红细胞之间的距离,使红细胞产生非特异性的凝聚。

最后,加入悬浮液(Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺(Polybrene)的作用,使正常的红细胞非特异性凝集散开,试验结果为阴性;但如果红细胞被相应的抗体致敏,则会被凝聚胺凝结,凝集就不会散开,试验结果为阳性。 临床应用及试验方法: 【操作方法】

1.取试管二支,标主次侧,主侧管加病人血清(血浆)2滴,加供血者3~5%红细胞悬液(洗涤或不涤均可)1滴,次侧管反之。

2.各加LIM0.7ml,混合均匀后,再各加Polybrene溶液2滴,并混合均匀。 3.3400rpm,离心10秒,然后把上清液倒掉,不要沥干,让管底残留0.1ml液体。 4.轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝聚,如无凝集,则必须重作。

5.最后加入Resuspending2滴,轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果在30秒内凝集散开,代表是由Polybrene引起的非特异性聚集,配血结果相合;如凝集不散开,则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应,配血结果不相合。如反应可疑,可进一步倒在玻片上用显微镜观察。 【报告方式】

1、受血者333(3型)血清 + 供血者333(3型)红细胞 有或无 溶血及凝聚

2、供血者333(3型)血清 + 受血者333(3型)红细胞 有或无 溶

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血及凝聚

3、受血者333与 供血者333 聚凝胺介质配血是否相合 【注意事项】

1.可以用含EDTA之血浆代替血清使用。

2.若病人血清(血浆)含肝素,如洗肾患者,须多加4~6滴Polybrene溶液以中和肝素。

3.本试剂合的操作方法也适用于抗体鉴定。 4.试剂使用前请加复室温再操作。

5.加做辅助性抗球蛋白试验,目的是增加检测抗—K的敏感性,对检测其他红细胞抗体无帮助。

6.在冬天气温极低的情况下,操作交叉配血试验,某些病人血清中能含有寒冷凝集素等因素,而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑,建议在最后滴入Resuspending时,将试管立即置入37摄氏度水浴中,轻轻转动试管混合,并在30秒内观察结果。

实验三 Rh血型鉴定(Rhesus monkey blood group typing)

【原理】用含抗RhD单克隆抗体(IgM)的抗血清对红细胞RhD血型抗原进行鉴定,在室温条件下、盐水介质中反应,根据红细胞是否出现凝集来测定受检者红细胞膜上有无RhD抗原。 【器材】

试管、双凹玻片、显微镜、竹签、离心机 【试剂】

抗D血清、5%红细胞盐水悬液 【操作方法】 1、快速测定法

(1)滴加1滴试剂在玻片或平板上。 (2)加等量1滴(被检)全血,混匀。

(3)轻柔地前后震荡,观察凝集,必须在2分钟内观察结果,否则干燥会被错误地看作一个阳性反应。

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【结果判断】

凝集 Rh血型阳性 不凝集 Rh血型阴性

【报告方式】

Rh(D)血型: 阳性 Rh(D)血型: 阴性

实 验 六

——尿液检验(Examination urine)

【内容】

尿液检验

(一)一般检查(理学检验) (二)尿液的化学检验

(三)尿液特殊蛋白检测(本-周氏蛋白) (四)显微镜检查 【目的要求】

1、掌握尿液常规检查内容的原理、方法、参考区间、临床意义及其注意事项。。 2、掌握尿液标本送检,保存的要求。

【器材】 显微镜;尿比重计;量筒;玻片;试管夹:离心机;试管;煮沸缸。

【实验】

一、尿液检验

(一)一般检查(理学检验)(urine physical examination)

1、尿量:正常成人每昼夜尿量常在1000—2000ml之间,平均为1500ml。 2、颜色:正常尿液因含尿色素可呈淡黄色,尿液浓缩时,颜色可呈深黄色。尿的颜色受某些食物或药物的影响,病理情况下因尿内含有各种色素尿液出现各种颜

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