三、红细胞沉降率
(Determination of Erythrocyte sedimentation rate简称ESR)
测定(示教)
【原理】
红细胞具有细胞膜的胶体性质，除具有一定的表面张力以外，在红细胞外有一层水化膜使红细胞互相隔离，红细胞表面带阴电荷，因此红细胞互相排斥，而不易粘合下沉。球蛋白与纤维蛋白原带正电荷，因此二者增多或减少，都会使红细胞沉降率发生变化。离体抗凝血液置于特制刻度测定管内，垂直立于室温中，记时1小时观察上层血浆高度以红细胞下沉的毫米数值报告。 【试剂】
109mmol/L(32g/L)枸橼酸钠溶液：取含二分子结晶水枸橼酸钠（分子量294.12）3.2g，用蒸馏水溶解，稀释至100ml。室温保存不能超过2周. 【操作方法】
测定方法很多，现介绍魏(Mestergren)氏法
在13mm3l00mm试管中先加3.8％枸橼酸钠0.4毫升，静脉取血1.6毫升注入上述试管内，立即混匀，用血沉管吸取抗凝血至刻度“0”处，垂直固定于血沉架上，在室温置1小时。
【报告方式】 3 毫米／小时 【参考区间】
男性<15毫米／小时
女性<20毫米／小时 【注意事项】
l、注射器、试管、血沉管均应保持干净干燥，以免溶血。 2、血沉管必须完全垂直，否则血沉加快，影响结果的准确性。
3、血液与抗凝剂的比例应要准确，充分混合，并应在抽血后3小时内测定。
4、测定时温度应在18—250C室温进行，温度过高血沉加快，过低则变慢。
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实 验 四
出血与血栓性疾病的实验室检查
（Laboratory Examination of Hemorrhagic Disorders）
【[内容】
一、血小板计数（Platele count 简称PC） 二、凝血酶原时间(PT)测定
三、活化部分凝血活酶时间(APTT)测定 四、纤维蛋白原含量测定 五、凝血酶时间(TT)测定 【目的要求】
l、掌握血小板计数的原理、操作方法及参考值。
2、掌握凝血四项APTT、PT、TT、Fib试验的原理、方法、结果判断及临床意义。
3、熟悉凝血四项标本送检要求。
4、了解出血性疾病常用的实验室检查方法及其原理。
【实验】
一、血小板计数(P1atelet count
简称PC) (目视计数法)
【原理】
取一定量血液，放于血小板稀释液内按一定倍数稀释，破坏红细胞及白细胞，用直接计数法计数，再算出每升血液中的血小板数。 【器材】
三棱针、玻棒、血红蛋白吸管、小试管、显微镜等。 【试剂】
许汝和氏液：脲素l0g；枸橼酸钠0.5g，40%甲醛0.1毫升，蒸馏水加至100毫升。
将上液混合，待溶解后过滤，放于冰箱内保存。 【操作方法】
(1)取0.38毫升血小板稀释液于清洁试管中。
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(2)从耳垂或指端取血，用血红蛋白吸管吸血至20立方毫米处，擦去管尖外所有沾的血液迅速放人稀释液内，再用上清液冲洗吸管数次，混匀。
(3)取上述混匀的血小板悬液一滴，加至血细胞计数池内，静置10—15分钟，让血小板下沉稳定。
(4)用高倍镜计数血小板，计数中央大方格中的5个中方格内的血小板数，如以P代表，则血小阪计数为：
P35(变为0.1u1) 310(变为1u1) 320(稀释倍数) 3106(将ul换算为L)=P3l09／L
【报告方式】 хх 3l09／L 【参考区间】
血小板计数(100—300) 3l09／L 【注意事项】
(1)血小板要和其它杂质区别，前者为园形折光小点，后者为碎片不折光，如血小板聚集在一起，则不能计数，须另取标本再检。
(2)血液稀释后，应在1小时内计数完毕，如果时间过长，则可使血小板逐渐破坏，以致结果偏低。
(3)混悬液注人计数池后，静置10—15分钟为宜，时间过短，血小板未下沉，时间过长；血小扳被破坏，均使结果偏低。
二、凝血酶原时间(Prothrombin time, PT)测定（一步法）
【原理】
在待检血浆中加入过量的含钙组织凝血活酶，使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定从加入含钙组织凝血活酶到血浆凝固所需的时间即为凝血酶原时间。此试验可了解受检血浆外源凝血系统凝血因子有无异常的情况。
【器材】 水浴箱、 试管、试管架、 加样抢、吸头、离心机、秒表 【试剂】
冻干含钙凝血活酶 10 2．0ml
稀释液 4~6．0ml
本批号国际敏感指数(1S1)值： 2．20
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【样本收集和保存】
静脉采血，血样与抗凝剂(0.109mol／L枸橼酸三钠)的比例为9：1，轻轻颠倒混匀，以2700g(离心半径18cm约3500转／分)离心10分钟，分离血浆待测。如该血浆不能立即分析，应将其密封放2—8℃保存，最长不超过4小时，或立即置于一20℃以下冻存不超过30天，用时37℃融化，避免反复冻融。 【操作方法】
1、每瓶冻干含钙凝血活酶加2．0ml稀释液复溶即为PT应用试剂。用前置，37℃预热。
lml,~37℃浴分钟。
2、加入PT应用试剂0．2√of~-c，立刻计时，记录凝固时间，即为凝血酶原时间(PT)。采用仪器测定，请参考仪器使用说明书。 【计算】
凝血酶原时间比值(PTR) 国际正常化比值(1NR)=PTRmI 本批试剂盒PT正常对照值：12．3秒
【报告方式】 患者 3 秒，正常对照 3 秒 【参考区间】
1、以PT表示：12—15秒，超过正常对照3秒以上为异常。 2、以PTR表示：0．95—1．24 3、监测口服抗凝药，以INR表示。
建议各实验室使用健康正常血浆，建立自己的参考值范围。 【注意事项】
1、抽血要顺利，抗凝要充分，决不可有凝血块。
2、水浴温度控制在37±0．5℃，过高或过低均会影响结果。 3、样品收集时不宜用EDTA和肝素作抗凝剂。
4、复溶试剂按每天使用量取适量预热，未川完之预热试剂应弃去。复溶试剂请
勿冰冻保存。
5、如果血球压积<20％或>55％，则需调整血样与抗凝剂的比例，方法是0．00185
3血液毫升数3(100一压积)=抗凝剂毫升数。
【贮存】
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试剂2—80C保存有效期为12个月，复溶试剂2—8℃保存有效期3天。
三、 活化部分凝血活酶时间
(Activated partial thromboplastin time,APTT)测定
【原理】
在37℃条件下，以白陶土（激活剂）激活因子Ⅻ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供凝血的催化表面，再加入适量的Ca2+，即可满足内源性凝血的全部条件。测定从加入Ca2+血浆凝固所需的时间即为活化部分凝血活酶时间，此试验可了解受检血浆内源凝血系统凝血因子有无异常的情况。
【器材】 水浴箱、 试管、试管架、 加样抢、吸头、离心机、秒表 【试剂】
冻干部分凝血活酶 10~1．0ml MS溶液 2~6．0ml 0．025mol／氯化钙溶液 【样本收集和保存】
静脉采血，血样与抗凝剂(0.109mol／L枸橼酸三钠)的比例为9：1。轻轻颠倒混匀，以 2700g(离心半径18cm约3500转／分)离心10分钟，分离血浆待测。如该血浆不能立即分 析，应将其密封放2—8℃保存，最长不超过4小时，或立即置于一80℃以下冻存不超过30 天，用时37℃融化，避免反复冻融。 【操作方法】
1、每瓶冻干部分凝血活酶加1．0mlMS溶液复溶即为APTT试剂。
2、取待测血浆0．1 ml，加入APTT试剂0．1ml，混匀，37℃预热5分钟。 3、加入0.025mol／L氯化钙溶液0.lml，立刻计时，记录凝固时间，即为活化
部分凝 血活酶时间(APTT)。如采用仪器测定，请参考仪器使用说明书。
【报告方式】 患者 3 秒，正常对照 3 秒 【参考区间】
30--44秒，超过正常对照10秒以上为异常。
建议各实验室使用健康正常人血浆，建立自己的参考值范围。
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