第十五节血清总胆红素 (T-BIL)测定
第1 版第1 次修改
生效日期：2012 年1 月1 日
1. 实验原理
血清中的胆红素分为直接（ 结合） 胆红素和间接（ 未结合） 胆红 素。大多数方法是在1883 年Ehrl ich 提出的重氮法胆红素测量法1， 一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素 直接和重氮化合物进行反应， 生成一种有颜色的化合物， 而间接胆红 素需要一种溶剂， 如表面活性剂后才能进行反应。
申能总胆红素试剂是改良的重氮法。使用一种稳定的重氮盐，2,4- 二氯苯胺重氮盐（ DCA）， 与胆红素反应， 形成红色偶氮化合物， 它在 540n m 吸光度最大。在540/ 600 nm 时的吸光度与标本中总胆红素的浓 度成正比。
胆红素+DCA 红色偶氮化合物 表面活性剂 2. 标本：
2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。 2.2 类型： 血清、肝素或EDTA 血浆， 应避光保存。
3. 标本存放： 15～25℃保存可稳定2 天；2～8℃保存可稳定7 天；-20℃保存 可稳定3 个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。 4. 标本运输： 常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标 本。
6. 实验材料
6.1 试剂： 申能总胆红素试剂盒（141 08 171 70 1 试剂1＋ 试剂2）
批准人质量负责人编写人生效日期 王华峰薛坤2012 年1 月1 日
6.1. 1 试剂组成 试剂1： 6× 64 ml 磷酸缓冲液40mm ol/ L 氯化钠9g/L
表面活性剂,稳定剂适量 试剂2： 6× 16 ml
2,4-二氯苯胺重氮盐1m mol /L 盐酸30mm ol/ L 表面活性剂适量
6.1. 2 试剂准备： 试剂为即用式。
6.1. 3 试剂稳定性与贮存
试剂避光保存于2～ 8℃ ， 若无污染， 可稳定至失效期。试剂有效 期为18 个月。试剂2 必需避光保存。试剂不可冰冻。
6.1. 4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 6.1. 5 注意事项： 此试剂为体外诊断用， 不要入口， 毒性还末确定； 警告！ 腐蚀剂！ 不要入口； 避免和眼睛， 皮肤或衣服接触， 如果接触 到， 立即用大量的水冲洗受损害的部位15 分钟， 接触到眼睛或吞服， 立即寻找医疗保护。
6.2 校准品： 使用DiaS ys 公司提供的TruC al U 校准品对自动分析仪 进行校准， 参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件 6.3 质控品： 参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件 7. 仪器： 奥林巴斯AU64 0 生化分析仪
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新疆兵团农二师焉耆医院
文件编号：SH015 第34 页共174 页
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第十五节血清总胆红素 (T-BIL)测定
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8. 操作步骤
8.1 项目基本参数： 参见生化检验奥林巴斯AU64 0 生化分析仪项目测 定参数.SOP 文件。
8.2 仪器操作步骤： 参见生化检验奥林巴斯AU64 0 生化分析仪操作规 程.S OP 文件。
9. 检验结果的判断与分析
10 . 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II 质控做 为未知标本进行分析， 以2S 为质控警告限， 3S 为失控限， 绘制质控 图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。 11 . 计算方法：以TruC al U 复合校准品校准仪器后，在病人结果可报 告范围内， 仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算， 以μ mo l/ L 报告。手工测定计算方法为：
△ Au
总胆红素(μ mo l/L ) = × 校准液浓度 △ As
12 . 参考值范围：
婴儿： 出生24 小时内＜ 15 0μ mol/ L 出生第2 天22-1 93μ mo l/L 出生第3 天12-2 17μ mo l/L
出生第4～ 6 天1.7- 216μ mol/ L 儿童： ＞ 一个月3.4- 17μ mo l/L 成年人： 1.7- 21μ mol/ L
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参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验 室经验， 每个实
验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强，几乎不 溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素 与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。溶血（肝前 黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红 素增高，形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert 综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70% 的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆 红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素 和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。 14 . 操作性能
14.1 线性范围： 1.2～ 513μ mo l/L
14.2 精密度： 精密度的评估是根据NCCL S 推荐的标准方法5， AU 64 0 批内精密度小于3%或SD≤ 0.07， 总精密度小于5%或SD≤ 0.10。用于 分析的质控血清和数据处理符合以上的NC CLS 的规则。
批内精密度 n=20
x
(μmol/L) s
(μmol/L) CV (%)
批间精密度 n=20
x
(μmol/L) s
(μmol/L) CV (%)
样品1 15.22 0.464 3.05 样品1 14.88 0.408 2.74 样品2 17.44 0.405 2.32 样品2 19.66 0.686 3.49 样品3 82.60 0.785 0.95 样品3 79.52 2.274 2.86
14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y )与某商品化试剂盒(x)，同时对 247 个样品进行T-BI L 检测， 将检测结果作方法学比较， 其统计结果 如下： y=1. 00x -0. 00m ol/ L； r=1. 000。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.2μmol/L。
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14.5 病人结果可报告范围： 1. 2～ 513μ mol/ L
15 . 超出范围结果处理：本法线性上限为513μ mol/ L。如样品测定值 超过上限时， 应将样品用0. 9％ 氯化钠溶液作1: 1 稀释， 重新测定， 结果乘以2。
16 . 病危报警值的处理当新生儿血清标本测定结果总胆红素〉340μ mol/ L 时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。 17 . 方法局限性
17.1 本法线性上限为513μ mol/ L。如样品测定值超过上限时， 应将 样品用0.9％ 氯化钠溶液作1:1 稀释， 重新测定， 结果乘以2。
17.2 干扰物质： 当样品中抗坏血酸浓度≤ 1704μ mo l/L， 血红蛋白浓 度≤ 5.00 g/L， 甘油三酯浓度≤ 22.6 mmo l/L 时没有观察到干扰。 18 . 补救措施： 当仪器发生故障时， 迅速联系仪器厂家进行维修。 19 . 参考文献
1. Thom as L ed . Clin ica l Labo rat ory Di agn ost ics . 1st ed. Fran kfu rt: TH- Boo ks Verl ags ges ell sch aft ; 1998 .p. 192 -20 2. 2. Tolm an KG , Rej R. Live r func tio n. In: Bu rti s CA , Ashw ood ER. edit ors . Tiet z Text boo k of Clin ica l Chem ist ry. 3r d ed. Phil ade lph ia: W. B. Sa und ers Co mpa ny; 19 99. P. 112 5-7 7 20 . 其他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科 废物处置管理规定》执行。
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第十六节血清直接胆红素 （D-BIL）测定
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1. 实验原理
直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。 2. 标本：
2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳 定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。 4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。 6. 实验材料
6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒：141 0827170 1 试剂＋试剂2 6.1.1 试剂组成 试剂1：16×64ml EDTA-Na2 0.07mmol/L 氯化钠6.6g/L
氨基磺酸70mmol/L 试剂2：6×16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L 盐酸130mmol/L
EDTA-Na2 0.02mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。 试剂有效期为18个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。
批准人质量负责人编写人生效日期 王华峰薛坤2012 年1 月1 日
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。