扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描，将产生的二次电子用特制的探测器收集，形成电信号运送到显像管，在荧光屏上显示物体。（细胞、组织）表面的立体构像，可摄制成照片。
扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定，经脱水和临界点干燥后,再于样品表面喷镀薄层金膜，以增加二波电子数。扫描电镜能观察较大的组织表面结构，由于它的景深长，1mm左右的凹凸不平面能清所成像，故放样品图像富有立体感。
2、透射电镜
透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像， 投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备更薄的超薄切片（通常为50～100nm）。其制备过程与石蜡切片相似，但要求极严格。要在机体死亡后的数分钟内取材，组织块要小(1立方毫米以内），常用戊二醛和锇酸进行双重固定树脂包埋,用特制的超薄切片机（ultramicrotome）切成超薄切片，再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。
电子束投射到样品时，可随组织构成成分的密度不同而发生相应的电子发射，如电子束投射到质量大的结构时，电子被散射的多，因此投射到荧光屏上的电子少而呈暗像，电子照片上则呈黑色。称电子密度高（electron dense）。反之，则称为电子密度低（electron lucent）。
（三）显微摄影
要拍一张高质量的微生物照片，必须具备图像清晰、分辨率高的显微镜和优良的摄影机，这两者是最为重要的，然后配合以适当的照明和熟练的操作技巧，就可以拍到一张满意的显微照片。
任何一种显微镜都可以用于显微摄影，不属哪一种适用、哪一种不适用的问题，但常用的还是普通的明视野显微镜。如果要拍摄一张高质量的显微照片，最好使用高分辩率的显微镜。
第三节 灭菌与灭菌器
灭菌是专指用化学或物理的方法杀死和除去全部微生物．因此，灭菌后无任何活的微生物。其主要包括一切细菌、芽孢、霉菌、病毒等。
在微生物的实验和研究工作中，不论是培养基，还是所使用的一切器具，都必须经过严格的灭菌后，方能进行工作。
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灭菌的方法很多，常用的有化学法与物理法。物理法中又包括高温灭菌法、辐射灭菌法与过滤除菌法等。这里介绍常用几种灭菌器械：
一、高压灭菌器
高压灭菌器是一个密闭的、可以耐受压力的金属锅，通以蒸汽，蒸汽不能向外扩散，就使灭菌器内压力不断升高，水的沸点也不断升高，这样就可以获得比100℃更高的温度。如在每平方厘米为一个大气压（即15磅／平方英寸）的压力下，温度可达121℃，一般只要维持15～20分钟就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。
高压灭菌器有立式，卧式和手提式等数种类型。
二、干热灭菌箱
干热灭菌箱就是电热烘箱，灭菌时使电热烘箱保持恒温，所以又称热空气灭菌。这种灭菌器适于各种各样的耐热玻璃器皿（如培养皿、试管、移液管等）和某些其它物品（如石蜡油）的灭菌，一般在160℃下，持续1小时，就可以达到灭菌的目的。
三、细菌过滤器
过滤除菌法是将带菌的液体或气体通过一个过滤器，使细菌受到机械阻留而隔留在滤板上，从而达到除菌的目的。
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第二章 微生物实验技术
实验 1 光学显微镜的使用及微生物形态的观察
一、实验目的
1．掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2．学习并掌握油镜的使用技术
3．观察细菌的个体形态，学会生物图的绘制 4. 观察观察酵母菌、霉菌个体形态 二、实验器材
显微镜、盖玻片、载玻片、香柏油、细菌示范片、擦镜纸 细菌示范片；酵母菌示范片；霉菌示范片等 三、显微镜的结构
显微镜分机械装置和光学系统两部分。如图1-1所示。
图1-1 显微镜的结构 1．目镜；2．目镜筒；3．镜臂；4．粗调手轮；5．微调手轮；6．移动尺；7．物镜转换器；8．物镜；9．载物台；10．聚光镜；11． 可变光栏；12．反射镜；13．底座 8 （一）显微镜的机械装置
1．镜筒 镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜筒有单筒和双筒两种。本实验采用的是单筒显微镜。镜筒长度一般是160mm。
2．转换器 转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔。不同规格的物镜分别安装在各孔上。
3．载物台 载物台为方形，中央有光孔，孔的两侧各装1个标本夹片，载物台上还有移动器，其上有刻度尺。移动器可纵向和横向移动，其作用是夹住和移动标本。
4．镜臂 镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式两种。本试验所用显微镜的镜臂为活动式。
5．镜座 镜座为马蹄形，支撑整台显微镜，其上有反光镜。
6．调节器 调节器包括大、小螺旋调节器（调焦距）各一个。可调节物镜和所需观察的物体之间的距离。调节器装在镜臂上方，通过升降镜筒来调焦距。
（二）显微镜的光学系统
1．目镜 每台显微镜备有3个不同规格的目镜，其上刻有5×、10×、16×等数字和符号，意指使用时可放大5倍、10倍和16倍。
2．物镜 物镜装在转换器孔上，可分低倍镜、高倍镜和油镜三种，其相应的放大倍数常是10、40（或45）、100（或90）。通常显微镜的放大倍数等于物镜放大倍数与目镜的放大倍数的乘积。例如，用放大40倍的物镜（高倍镜）与放大16倍的目镜时所得的物像的放大倍数为40×16＝640倍。
在使用低倍镜和高倍镜时，标本和物镜之间的介质时空气。油镜的放大倍数通常为100倍，使用油镜时，物镜与标本之间的介质是香柏油，即在标本上滴上一滴油，再将油镜浸没在油中。
3．聚光器 聚光器在载物台的下面，反光镜反射来的光线通过聚光器被聚集成光锥照射到标本上，可增强照明度，提高物镜的分辨率。聚光器可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光线的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或把聚光器向下移动。
4．反光镜 反光镜装在镜座上，有平、凹两面，光源为自然光时用平面镜，光源为灯光时用凹面镜。它可以自由转动方向。反光镜可反射光线到聚光器上。
四、油镜物镜的基本原理
一般在镜头上有一白圈或红圈的，表示为油镜物镜，也有的以“OI”或“HI”字样来表示。使用时，油镜物镜与其它物镜的不同是载玻片与物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n=1.52，与玻璃相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生曲折。如果
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玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系，当光线通过玻片后，受到曲折，发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样就降低了视野的照明度。如图1-2所示。
图1-2 物镜干燥系（a）与油浸系（b）光线通路
利用油镜不但能增加照明度，更主要的是能增加数值孔径（N.A.），因为显微镜的放大效能是由其数值孔径决定的。所谓的数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度
（称为镜口角）的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积，可用下列公式表示：
N.A.=n sinα/2 N.A.=数值孔径 n＝介质折射率
α＝最大入射角，即镜口角。
图1-3 物镜的光线入射角 因此，光线投射到物镜的角度越大，显微镜的效能就越大（图1-3），该角度的大小是由物镜的直径和焦距决定的。n是影响数值孔径的因素，n值越大，数值孔径也越大。如光
线入射角为120°，其半数的正弦为sin60°＝0.87，由图1-4可知，而n＝1.33，n香柏油＝1.52，n玻璃＝1.52，则：
以空气为介质时：N.A.=1×0.87＝0.87 以水为介质时：N.A.＝1.33×0.87＝1.15 以香柏油为介质时：N.A.＝1.52×0.87＝1.32
显微镜的性能还依赖于物镜的分辨率，分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。分辨率用δ表示。
δ＝0.61×λ/N.A. （式中λ为波长） 它与物镜的数值孔径成正比，与光波长度成反比，
图1-4 油浸作用 因此，物镜的数值孔径越大，光波波长越短，则显微镜的分辨率越大，被检物体的细微结构也越能更明晰地区
别出来。事实上可见光的波长（0.38～0.7μm）是不可能缩短的，只有靠增大数值孔径
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空气
＝1，n
水