第二章 应用实时荧光PCR筛选玉米转基因品系
图2.9 4504在viia 7上初筛基因的扩增曲线图 图2.10 4504在7500上初筛基因的扩增曲
Figure 2.9 4504 screening gene amplification Figure 2.10 4504 screening gene
plot on viia 7 amplification plot on 7500
基线上方：从①-⑧依次是 TC1507, NK603, MON810, MON89034，59122 ，MON88017，MIR604，BT11的扩增曲线。基线下方：各品系的阴性对照。
表2.11两种试剂盒提取的DNA在viia7和7500上的Ct值比较
Table 2.11 Both kits extracted DNA Ct values on viia 7 and 7500 Comparison Ct TIANGEN viia7 TIANGEN 7500 Tc1507 34.709 27.4487 NK603 33.780 28.7079 Mon810 MON89034 59122 MON88017 MIR604 BT11
32.507 33.319
34.449 36.967 未检出 未检出
32.7639 30.2115 31.9999 32.5996 30.377 36.9126
通过比较用天根试剂盒提取玉米酒槽粕4504的DNA在两台机器上的扩增曲线图和Ct值，结果显示玉米酒槽粕4504含有Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11、MIR604 等转基因品系。两种实时荧光定量PCR仪全部扩增出Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017等品系，在实时荧光仪7500上的扩增Ct值明显低于实时荧光仪viia 7，且对于特异性品系MIR604 、BT11来说，实时荧光PCR仪viia 7并没有出现扩增，而实时荧光仪7500有扩增曲线，且有Ct值，总结实验结果，我们发现对于深加工产品玉米酒槽粕，宜采用天根实际盒在实时荧光仪7500上进行检测。
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第二章 应用实时荧光PCR筛选玉米转基因品系
2.6 本章小结
经过对以上四种加工产品分析，结果表明对于未加工（玉米颗粒）和粗加工（粉碎玉米粒）的转基因玉米，TAKARA植物组DNA提取试剂盒提取的DNA纯度高于天根植物组DNA提取试剂盒；对于精加工的转基因玉米（玉米粉），两种试剂盒提取的DNA纯度都较高；但是对于深加工转基因玉米（比如玉米酒槽粕），很明显看出天根植物组试剂盒提取的DNA纯度要高于TAKARA植物组提取试剂盒。
接着选取上述玉米的DNA，并用两种实时荧光PCR仪对各DNA进行了品系筛选，结果表明：
对于未加工玉米产品，利用TAKARA植物提取试剂盒在实时荧光PCR仪viia 7上能取得较好的实验结果；
对于粗加工玉米产品，利用TAKARA植物提取试剂盒在实时荧光PCR仪viia 7上能取得较好的实验结果；
对于深加工产品玉米酒槽粕，宜采用天根实际盒在实时荧光仪7500上进行检测；精加工玉米产品宜用天根实际盒进行提取，实时荧光仪7500和viia 7都可进行实时荧光PCR反应；
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第三章应用基因芯片筛选玉米转基因品系
第三章 应用基因芯片筛选玉米转基因品系
基因芯片的出现为分子生物学基础研究提供了一个巨大的技术平台，基因芯片技术发展迅速，在其诞生以来就被广泛应用于各个方面，最早应用在肿瘤研究方面，随着基因工程技术的迅速发展，转基因食品越来越多地展现在人们面前，基因芯片在转基因食品的检测上应用也越来越广泛。由于转基因食品的不可预期性和出于对消费者对所购食品的知情权及选择权的维护，对转基因食品进行严格的―说明标签‖制基本是各个国家通行的办法。因此，这就要求政府或是企业的各检测部门都需要一种准确、高效的转基因食品检测手段。现有的PCR扩增法，无论是单重还是多重PCR检测只能对其中几种转基因成分进行检测，耗费时间长、效率低，不适于对食品中大量不同转基因成分的快速检测。而基因芯片具有快速、高效、高通量检测的优点，仅靠1个实验就能筛选出大量的不同转基因成分，被认为是最具潜力的检测手段之一。本次试验中使用的芯片为ABI公司所生产，包括MON810、Bt1l、Evebtl76、T14/T25、CBH351、GA21、 MIR604、MON88017、MON89034、NK603、TCl507、MON87460、3272、MON863、DAS．59122、DP98140等18个玉米标准体系以及玉米内源基因HMG、adh1和18s在内的真核生物基因。
3.1 基因芯片方法
基因芯片技术反应体系:染料 50 ul，模板30 ul，ddH2O水20ul，反应体系共100 ul。具体步骤如下：
（1）将50 ul染料，30 ul模板，20 ulddH2O充分混匀10sec以上，重复一次。 （2）取100 ul样液加入到芯片内，缓慢加入，避免气泡产生。 （3）芯片离心，1200r/min，1min，离心两次 （4）密封，切掉多余部分 （5）上机
反应参数为95℃预变性10min；95℃变性15sec，60℃退火1 min。
3.2利用基因芯片筛选玉米中转基因品系的结果
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第三章 应用基因芯片筛选玉米转基因品系
3.2.1玉米颗粒6743的芯片结果
利用基因芯片对转基因玉米颗粒进行品系筛选，反应图谱见图3.1。
图 3.1未加工玉米粒应用基因芯片的图谱 Figure 3.1 corn chips using gene mapping
从1-3号依次是18S、HMG、adh1等内源基因的扩增曲线，①-⑩依次是TC1507, NK603, MON810, MON89034，59122 ，MON88017，MIR604，BT11，GA21，T25的扩增曲线。基线下方：未检出基因品系。
表3.1转基因玉米粒应用基因芯片法的Ct值
Table 3.1 transgenic corn gene chip method of Ct values
Ct Ct 筛选品系 筛选品系
Tc1507 28.556 59122 27.102
NK603 26.915 MON88017 28.386
Mon810 28.794 MIR604 31.454
MON89034 25.462 BT11 34.592
GA21 23.194 T25 34.132
应用基因芯片法检测玉米粉的外源品系基因，证实玉米颗粒6743检出Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11、MIR604、GA21、T25等外源基因品系。
3.2.2粉碎玉米粒7167的芯片结果
利用基因芯片反应粉碎玉米粒进行品系筛选，反应图谱见图3.2。
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第三章 应用基因芯片筛选玉米转基因品系
图 3.2 粉碎玉米粒应用基因芯片的图谱
Figure 3.2 crushed corn chips using gene mapping
从1-3号依次是18S、HMG、adh1等内源基因的扩增曲线，①-⑨依次是TC1507, NK603, MON810, MON89034，59122 ，MON88017，MIR604，BT11，GA21的扩增曲线。基线下方：各品系的阴性对照。
表3.2 粉碎玉米粒应用基因芯片法的Ct值
Table 3.2 Ct value crushed corn gene chip method
筛选品系 Ct 筛选品系 Tc1507 NK603 Mon810 MON89034 MON87460
应用基因芯片法检测玉米粉的外源品系基因，证实玉米粉检出Tc1507、NK603、
28.356
29.770 29.388 29.224 34.707
59122 MON88017 MIR604 BT11
Ct
25.564 29.359 31.831 34.592
MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11、MIR604、MON87460等外源基
因品系。
3.2.3 玉米粉6979的芯片结果
利用基因芯片反应对玉米粉进行品系筛选，反应图谱见图3.3。
图 3.3 玉米粉应用基因芯片的图谱
Figure 3.3 cornmeal application microarray profiles
从1-3号依次是18S、HMG、adh1等内源基因的扩增曲线，①-⑧依次是TC1507, NK603, MON810, MON89034，59122 ，MON88017，MIR604，BT11的扩增曲线。基线下方：各品系的阴性对照。
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