第三章 应用基因芯片筛选玉米转基因品系
表3.3 玉米粉应用基因芯片法的Ct值
Table 3.3 Ct value of corn flour method of gene chips
筛选品系 Ct
Tc1507 29.982 NK603 Mon810 MON89034
35.221 30.557 29.224
筛选品系
59122 MON88017 MIR604 BT11
Ct
31.216 31.563 36.284 34.592
应用基因
芯片法检测玉米粉的外源品系基因，证实玉米粉6979检出Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11、MIR604等外源基因品系。 3.2.4 玉米酒槽粕4504的芯片结果
利用基因芯片反应对玉米酒槽粕进行品系筛选，反应图谱见图3.4。
图3.4玉米酒槽粕的应用芯片法的图谱
Figure 3.4 maps corn meal vinasse application chip law
从1-3号依次是18S、HMG、adh1等内源基因的扩增曲线，①-⑥依次是TC1507, NK603, MON810, MON89034，59122 ，MON88017的扩增曲线。基线下方：各品系的阴性对照。
表3.4玉米酒槽粕应用基因芯片法的Ct值
Table 3.4 Ct value of corn meal wine tank gene chip method
Ct 筛选品系 Ct 筛选品系
Tc1507 32.067 59122 30.752 30.996 MON88017 NK603 30.903 Mon810 MON89034 34.270 MIR604 30.2115 B T11
未检出 未检出
应用基因芯片法检测玉米酒槽粕的外源品系基因，证实玉米酒槽粕4504检出Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 等转基因品系。
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第三章 应用基因芯片筛选玉米转基因品系
3.3 基因芯片法和实时荧光PCR反应检测结果对比
为了比较基因芯片法和实时荧光PCR仪的反应检出率，将二者所检出玉米外源基因品系汇成下表，见表3.5。
表3.5两种不同方法的比较
Table 3.5 Comparison of two different methods
品系
TC1507-TC1507_QT-EVE–ZM -010 NK603-NK603_QT-EVE–ZM- 008 MON87460-MON87460_QT- EVE-ZM-005
MON863-MON863_QT-EVE -ZM-009
MON810-MON810_QT-EVE -ZM-020
MIR162-MIR162_QT-EVE- ZM-022
4504 6979 芯片 PCR 芯片 PCR + +
7167 芯片 PCR 6743 芯片 PCR + + + +
+ + +
+ + +
+ + + +
+ + + +
+
+ + +
+ + +
+ + + +
+ +
LY038-LY038_QT-EVE-ZM-017
GA21-GA21_QT-EVE-ZM-007
Bt176-Bt176_QT-EVE-ZM-023
+
+
Bt11-v2-Bt11_QT-EVE-ZM-015 98140-98140_QT-EVE-ZM-021 59122-59122_QT-EVE-ZM-012 3272-3272_QT-EVE-ZM-019
MON89034-v2-MON89034_QT-EVE-ZM-018v3
MIR604_ori-MIR604_ZM -013_ori MON88017_ori-MON88017_ZM-016_ori
59122-59122_QT-EVE-ZM-012
+
+
+ +
+
+
+
+
+
+
+ +
+
+
+
+ +
+
+ +
+
+
+ +
+
+ +
+ +
+
+
+ +
+
+ +
+
+
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第三章 应用基因芯片筛选玉米转基因品系
根据图表所显示的内容，对于深加工产品，用实时荧光PCR方法检测共检出外源基因品系八个，包括Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11，MIR604，而用基因芯片检测时只检出六个品系，BT11，MIR604等并没有检出，说明尽管基因芯片技术一次检测出了大量外源基因，节省了时间、精力，但是对于深加工产品来说，其检测精度还是不如实时荧光PCR反应；对于加工程度比较轻的产品或是未加工产品，例如粉碎玉米粒和玉米颗粒，基因芯片法检出了Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11，MIR604、GA21、T25等外源基因，而实时荧光PCR反应并没有检出GA21、T25，说明对于加工程度比较轻的产品或是未加工产品，用芯片法的检测结果比较好。
3.4 本章小结
1、对于加工程度比较轻的产品或是未加工产品，基因芯片法的检出率比较高，宜采用基因芯片进行检测。
2、精加工玉米产品可采用天根试剂盒进行提取后，实时荧光仪7500和viia 7都可进行实时荧光PCR反应，或直接用基因芯片法进行检测；
3、对于深加工产品玉米酒槽粕，宜采用天根试剂盒在实时荧光仪7500上进行检测，其检出率更高；
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第四章 薯格、干酵母转基因成分的检测及品系测定
第四章 薯格、干酵母转基因成分的检测以及品系鉴定
第二、三章对四种不同加工程度玉米中转基因成分进行了测定，在这章节里选取了两种具有代表性的样品进行了转基因检测，进口薯格1864，进口干酵母5590，均为在辽宁出入境检验检疫局待检的样品。
4.1进口薯格中转基因成分的检测
近年来随着快餐文化的发展，薯格、薯条等一系列高温油炸食物越来越受到人们的
青睐，如何快速准确地检测其是否含有转基因成分也成为一个热点。在这里我们选择天根植物试剂盒进行DNA的快速提取，用ABI Prime 7500 实时荧光PCR仪进行薯格中转基因成分的初筛和品系的检测。 4.1.1实验方法
取薯格的外裹粉部分进行提取，DNA提取方法同上。
对样品进行CAMV35S、Ubi、NOS、NPTⅡ、PAT、ZEIN等外源基因的初步筛选，荧光PCR方法同上。 4.1.2结果与讨论
4.1.2.1 薯格中转基因成分的初筛
初步筛选基因为: (1)外源基因: 启动子CaMV35S、Ubi, 终止子NOS, 筛选基因NPTⅡ(新霉素磷酸转移酶), PAT(修饰的草丁磷乙酰转移酶)。(2)ZEIN(玉米内源基因), 初筛结果见表2.13。
表4.1薯格样品初筛结果
Table 4.1 The screening results of potato chips
初筛基因结果初筛基因结果
CaMV35S Ubi NOS
+ + +
NPTⅡ PAT ZEIN
+ + +
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第四章 薯格、干酵母转基因成分的检测及品系测定
样品初筛基因的扩增曲线如图4.1所示, ZEIN、 Ubi、35S、NOS、NPTⅡ、PAT等初筛基因均有良好的扩增。且结合待检样品的的Ct值, Zein(Ct:28.688)、Ubi (Ct:31.695)、 35S(Ct:32.551)、NOS(Ct:33.297)、 NPTⅡ(Ct:34.937)、PAT(Ct:34.878), 根据外源基因的判定结果, 证明待检样品中检出这些外源基因。
图4.1薯格样品中初筛基因的扩增曲线图
Fig.4.1Screening gene amplification plot of potato chips
基线上方: 从1~6依次是ZEIN, 35S, NOS, NPTⅡ, Ubi, PAT等阳性对照基因的扩增曲线图; ①~⑥为待检样品中zein, 35S, NOS, NPTⅡ, Ubi, PAT等基因的扩增曲线图; 基线下方: 基线下方为ZEIN, Ubi, 35S, NOS, NPTⅡ, PAT的阴性对照以及空白对照的扩增曲线图
4.1.2.2薯格中转基因品系检测结果
初筛结果表明，薯格样品的外裹玉米粉中含有转基因成分。利用实时荧光PCR方法进行品系鉴定，在对待检样品进行了18种玉米品系3272、DAS．59122、Bt10、LY038、MIR604、MON863、MON88017、MON89034、NK603、TCl507、 MON810、 MIR162、GA21、Bt176、MON87460、Bt11、T25、DP98140的筛选后，结果表明玉米粉共含有5种转基因品系，即转基因玉米TC1507、NK603、MON810、MON89034、59122等，鉴定结果见表4.2。待检样品中玉米粉中的各品系扩增曲线图见图4.2，TC1507、NK603、MON810、MON89034、59122等5个品系均有很好的扩增，且TC1507 (Ct:28.153)、NK603(Ct:30.335，MON810(Ct:31.292)，MON89034 (Ct: 31.566)，59122(Ct:34.710)证明薯格的外裹粉部分含有玉米品系TC1507、NK603、MON810、MON89034、59122等。
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