第一章 血液标本采集和血涂片的制作 1、皮肤采血的法的采血方法
（1）轻轻按摩采血部位（左手无名指指腹内侧或耳垂）使局部自然充血。 （2）消毒皮肤，待其干燥后紧捏采血部位两侧
（3）右手持一次性消毒采血针迅速刺入（深度以2到3cm为宜），第一滴血因混入组织液，一般将其弃之不用。或根据检测项目决定是否
（4）采血结束后用无菌干棉签压住采血部位以止血。
2、负压采血法的的优点：有效保护有效成分，剂量准确，传送方便，封闭无尘，标识醒目，刻度清晰，容易保存，一次进针多管采血等 3、常用添加剂的用途与特点 ①乙二胺四乙酸盐【EDTA】：
作用：与血液中Ga2+结合形成螯合物凝血过程中断与血液中Ga2+结合。 用途：全血细胞计数。离心法HCT的测定。
注意事项：抗凝剂用量和血液的比例，采血后必须立即混匀。 ②枸橼酸钠：
作用：与血液中Ga2+结合
用途：血沉，凝血实验，血液保养液。
注意事项：抗凝能力较弱，抗凝剂浓度，体积和血液的比例非常重要 ③肝素
作用：加强抗凝酶灭活丝氨酸蛋白酶，阻止凝血酶形成。
用途：可用于血浆的生化，免疫项目，如血气分析，肝素锂适用于红细胞渗透脆性试验 注意事项：电极法测血钾与血清结果有差异；不适宜血常规检查。 ④草酸盐
作用：草酸盐与血液中中Ga2+形成草酸钙沉淀 用途：草酸钾干粉常用于血浆标本抗凝
注意事项：容易造成钾离子污染其他检测项目，现用的少。 4、血涂片的染色；
Wright染色的染色原理：物理吸附和化学亲和作用 5、不同PH对血细胞染色结果的影响
①PH ②PH>PI 导致蛋白质所带负电荷增多，易与亚甲蓝或天青结合，染色结果偏蓝 6、Wright染液是由伊红和亚甲蓝溶解于甲醇形成。 其中甲醇的作用为： ①溶解伊红和亚甲蓝 ②具有很强的脱水作用，可以固定红细胞形态，提高对染料的吸附作用。增强染色效果。 7、血涂片染色的方法学评价 ①Wright染色：最常见的染色法，尤其对于胞质成分及中性颗粒等染色，可获得满意的染色效果，但对胞核的染色不如Giemsa染色。 ②Giemsa染色：对胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差 ③Wright-Giemsa染色：广泛使用的方法，所使用的缓冲液与Wright染色法相同，该对血细胞胞核，胞质和胞质内颗粒均着色鲜明。 第二章 血液一般检查 1、红细胞计数的方法有显微镜法和血液分析仪法 2、红细胞计数的检测原理： 显微镜法的检测原理：采用等渗稀释法将血液标本稀释一定倍数（200倍），冲入牛鲍血细胞计数板中，在显微镜下计数一定区域（体积）内的红细胞数量，经换算求出每升血液中红细胞数量。 【 N=5个中方格/HP】RBC/L=N3(25/5)3103106 3201 =N31012 报告方式 X.XX31012 3、血红蛋白【Hb】 4、检测原理以及方法学评价 检测原理： 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定检测原理，血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子被高铁氰化钾氧化为高铁离子，血红蛋白转化成高铁血红蛋白【Hi】，Hi与氰化钾中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm。在特定条件下，HiCN mmol 消光系数为44/(mmol2cm)。 方法学评价： 常用的比色法有：①氰化高铁血红蛋白【HiCN】，（HiCN测定法是WHO和ICSH推荐的参考方法，）十二万基硫酸钠血红蛋白测定法【SDS-Hb】碱羟血红蛋白【AHD575】测定法，叠氮高铁血红蛋白【HiN3】测定法，溴化十六烷基三甲胺【CTAB】等。 方法学评价： ①：HiCN测定法： 优点：参考方法，操作简单，反应速度快，可检测除SHb之外的所有Hb，产物稳定，便于质控。 缺点：KCN有剧毒，可是高白细胞高球蛋白血症的标本浑浊，对HbCO的反应慢，不能测定HbS。 ②SDS-Hb 优点：次选方法，操作简单，呈色稳定，试剂无毒，结果准确，重复性好。 缺点：SDS质量差异大，消光系数未定，SDS溶血活力大，易破坏白细胞，不适用于同时进行白细胞计数的血细胞分析仪。 ③AHD575 优点：试剂简易，无毒，呈色稳定，准确性与精密度较高 缺点：575nm波长比色，不便于自动检测，HbF不能转化，氰化血红素纯度不够。 ④HiCN测定法 优点：准确性精密度较高 缺点：试剂仍有毒性（为HiCN的1/7）、HbCO转化慢（20分钟) 5、异常红细胞异常的机制及临床意义 小红细胞 直径<6μm 可能机制：①中央染色过浅；Hb合成障碍；②淡染色区消失（球形红细胞） 临床意义：缺铁性贫血，珠蛋白生成障碍性贫血，遗传性球形红细胞增多症 大红细胞 直径>10μm 中央染色深 可能机制：①早期脱核的年轻RBC②叶酸及维生素B12缺乏③胞膜胆固醇/磷脂酰胆碱比值增高 临床意义：RBC释放加速，巨幼细胞性贫血，溶血性贫血等，肝病，脾切除 靶型红细胞 形状改变：中央染色深门，外围苍白，边缘又深染呈靶状或牛眼状 可能机制：①Hb组成和结构变异 ②脂质异常 临床意义：各种低色素性贫血，尤其珠蛋白生成障碍性贫血，胆汁淤积性黄疸，脾切除后，肝病。 1、红细胞的异常结构和排列有哪些？ ①豪焦小体 ②卡波环 ③嗜碱性点彩红细胞 ④ 有核红细胞 【血细胞比容】：一定条件下全血中的红细胞经离心沉淀压紧的红细胞在全血中所占体积的比值。 2、血细胞比容测定方法的方法学评价 【血细胞比容】一定容积全血中红细胞所占的百分比。又称红细胞比容（比积/压积） 温氏法（wintrobe法）： 优点：应用广泛，无需特殊仪器 缺点：血浆残留量多；需标本量多；耗时；CV2%；淘汰方法。 微量法： 优点：WHO推荐的常规方法，CLSI推荐的参考标准，血浆残留量少，简单快速，标本用量少，相对离心力高，结果准确，快速，重复性好 缺点：仍有残留血浆，但较温氏法少，需微量高速血液离心机 血细胞分析仪 优点：无需单独才学，检查快速，无血浆残留，自动化程度高，简单快速，精密度好 缺点：准确性不及微量离心法，需定期校正仪器。 放射性核素： 优点：ACSH推荐为参考方法，精确性最高 缺点：方法繁琐，特殊，不适用于临床常规检查 PS： 2001年ICSH规定的HCT测定国际参考方法： （1）先以HiCN法测定受检者血Hb浓度； （2）用微量离心法处理血标本，取离心后毛细管中间段的压积红细胞，采用HiCN法测定Hb； （3）按以下公式计算HCT： HCT=离心前全血的Hb / 微量管中间压积红细胞的Hb 3、红细胞平均指数： 红细胞平均容积【MCV】：红细胞群体中单个红细胞体积的平均值 MCV = Hct / RBC ( fl ) 红细胞平均血红蛋白含量【MCH】：细胞群体中单个红细胞血红蛋白含量的平均值 MCH = Hb / RBC ( pg ) 红细胞平均血红蛋白浓度【MCHC】：全部血细胞平均每升红细胞中所含Hb的浓度。 MCHC = Hb / Hct ( g/L ) 临床意义：红细胞平均指数可用于评学形态学分类及提示贫血的可能与原因。 4、网织红细胞 【网织红细胞RET】：晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核（RNA），经煌焦油蓝等活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故称为网织红细胞 。 网织红细胞检测的目的： ①鉴别贫血的类型（增生性，非增生性，增生增高性） ②检查骨髓的功能 ③检测贫血的治疗效果 ④评价骨髓移植后，再生障碍性贫血细胞毒药物诱导治疗后或EPO治疗后的红细胞造血情况 网织红细胞计数方法：Miller窥盘法：普通显微镜法计数时为缩小分布误差，降低劳动强度，ICSH以及我国卫生临床检验中心推荐方法，在A区域计数红细胞，B区域内计数网织红细胞。 网织红细胞计数方法临床意义：是反应骨髓造血功能的重要指标。 5、红细胞沉降率 【红细胞沉降率ESR】离体抗凝血静置后，红细胞在单位时间内沉降的速度。 影响血细胞沉降率的因素 （1）血浆因素 ①血浆中各种蛋白比例改变 促进红细胞形成缗钱状：纤维蛋白原>球蛋白>胆固醇、甘油三脂 抑制红细胞形成缗钱状：清蛋白、糖蛋白、卵磷脂 （2）红细胞因素 ①数量： 数量少，总面积减少，血浆逆阻力减小，血沉加快；反之，血沉减慢。 但红细胞太少，不易形成缗钱状，血沉减慢。 ②红细胞直径和形状： 直径大，血沉快；而球型、镰型不易聚集，则血沉减慢。 （3）其他因素 ①血沉管与血沉架： 符合标准，血沉管应垂直，倾斜时，则血沉加快。血沉管倾斜3度，则血沉可增加30%。 ②温度：校正 第二节 白细胞检查 1、白细胞计数 【中性粒细胞N 嗜碱性粒细胞B 淋巴细胞 L 单核细胞 M 嗜酸性粒细胞 E】 白细胞检查的方法有①显微镜法和②血液分析仪法 检测原理：采用白细胞计数稀释液（如冰乙酸）将血液标本稀释一定倍数，同时破坏红细胞和固定白细胞，充入改良牛鲍血细胞计数板，在低倍镜下计数一定区域（体积内）的白细胞数量，经换算求出每升血液中白细胞总数。 白细胞计数的计算 WBC（/L）= 4个大方格内总数（N）/ 43 10 3106 3 20 = N / 20 3106 2、【中性粒细胞增多症】： Nsg >70%，外周血中中性粒细胞绝对值>7 3109 /L 3、中性粒细胞反应性增多总论： （1）急性感染或炎症： （2）广泛组织损伤或坏死： （3）急性溶血： （4）急性失血： （5）急性中毒： （6）恶性肿瘤： PS：当粒细胞<1.0*109/L时，极易发生感染 当粒细胞<0.5*109/L（急性粒细胞缺乏症）时，严重感染和疾病复发的危险增加 患者出现发热，咽痛，口腔溃疡等感染时，甚至引起败血症 4、骨髓增生性疾病： 临床意义： ①慢性粒细胞白血病。真性红细胞增多症，原发性骨髓纤维化，原发性血小板增多症等，嗜碱性粒细胞轻度增高可作为骨髓增生性疾病的一个早期征象 ②外周血液嗜碱性粒细胞达10%~20%是慢粒的特征之一，若嗜碱性粒细胞突然>20%，预示病情恶化 5、淋巴细胞减少（成人<1.0*109/L） 6、嗜碱性粒细胞计数 检测原理：（显微镜法和血细胞计数仪） 显微镜检测原理：采用嗜酸性粒细胞稀释液（伊红-丙酮）将血液稀释一定倍数后红细胞和大部分其他白细胞被破坏，嗜酸性粒细胞则着色。 在低倍镜下计数两个计数池工10个大方格内的嗜酸性粒细胞，经换算求出每升血液中嗜酸性粒细胞数量【绝对计数】 7、嗜酸性粒细胞计数的各种稀释液的主要作用 ①保护嗜酸性粒细胞（丙醇，乙醇） ②破坏红细胞和中性粒细胞（碳酸钾，草酸铵） ③使嗜酸性粒细胞着色（伊红，溴甲酚紫，固绿） ④甘油——防止乙醇挥发 ⑤抗凝剂——防止血液凝固 8、中性粒细胞的异常形态包括 ①毒性表现 大小不均 中毒颗粒 空泡形成 杜勒小体 退行性病变 ②棒状小体【白细胞胞质中出现的紫红色细杆状物质，主要见于急性粒细胞性白血病，急性单核细胞白血病急性淋巴细胞型白血病无】 ③中性粒细胞的核象变化 【核象】：指粒细胞的分叶状况，分为核左移和核右移，反映了细胞的发育阶段。 核左移 ①【再生性核左移】：核左移伴WBC总数增高。 ②【退行性核左移】：核左移，WBC总数不增高，甚至减低 【核右移】：外周血分叶核中性粒细胞增多，中性粒细胞核分5叶及5叶以上者超过3%。称为核右移。 9、【血小板（PLT）计数】：血小板计数是测定单位容积内的血液中血小板的数量。 检测原理：