①普通光学显微镜计数法
1）破坏红细胞稀释法（溶血法） 2）不破坏红细胞稀释法
②相差显微镜计数法:立体，识别血小板形态 ③血液分析仪法：阻抗法、光散射法
④流式细胞仪法:荧光素标记PLT单克隆抗体 方法学评价：
1.血液分析仪法：常用方法
速度快、重复性好，准确性高、参数多。
激光法（核酸染色）优于阻抗法。不能排除干扰 血小板数量明显异常仍需显微镜计数-复检标准。 2.流式细胞仪法：单克隆抗体标记PLT 血小板计数ICSH推荐参考方法 3.相差显微镜法：易于识别
草酸盐稀释液为手工法的参考方法。 4.普通光学显微镜法
草酸铵稀释液：红细胞破坏力强，血小板形态清楚。首选方法 尿素稀释法：尿素易分解。不能完全溶解红细胞。
高铁氰化钾（赤血盐）法；稳定，但不能完全溶解红细胞 质量保证：
原则：避免血小板激活、破坏和污染。
1.检测前：采血过程是否顺利、抗凝剂(肝素不适用于PLT，EDTA钾盐抗凝1h内不稳定）、 存储时间（过久PLT减低）、温度（室温）。 2.检测中：手工法定期检测试剂质量有无污染 仪器室内、室间质控合格
3.检测后：核对（参考方法、血涂片、2次CV<10%) （1）血涂片—聚集、碎片、体积、8-15/油镜。 血涂片计数PLT=(PLT/视野)3RBC／(200RBC/视野) （2）参考方法
（3）2次计数，误差<10%，取均值。 血小板形态：
正常血小板形态：
两面微凸的圆盘状，直径1.5～3μm。淡蓝或淡红色，中心部分有细小、分布均匀或分散的紫红色颗粒
异常血小板
1.大小异常(生理情况以中和小型为主) 大血小板：
年轻PLT（网织PLT）,直径4～7μm。 见于特发性PLT减少性紫癜、巨大PLT综合症、骨髓异常增生综合征或PLT破坏增加的PLT减少症、骨髓移植。 小血小板： 直径＜1.5μm
缺铁性贫血、再障、特发性血小板减少性紫癜 2.形态异常(不规则和畸形>10%)，正常人<2% 3.聚集性和分布异常
正常情况下非抗凝血，血小板3-5个成簇或成团，聚集与散在比例为20：1 (1)血小板卫星现象：PLT粘附围绕中性粒细胞周围。 (2)血小板片状聚集：特发性血小板增多症呈大片聚集
(3)血小板减少：再障、特发性血小板减少性紫癜PLT减少，PLT聚集减少。 (4)血小板功能异常：血小板无力症无聚集，散在分布 10、血栓和止血一般检查
【出血时间BT】:在特定条件下，皮肤小血管被刺破后，血液自行流出到自然停止的时间。 TBT 推荐，标准测定器。皮肤切口的深度、长度固定重复性好，灵敏度高 临床意义：
1.BT延长 涉及血小板和血管壁的缺陷。血小板数量异常或功能缺陷。某些凝血因子缺乏，如VWF、DIC、低（无）纤维蛋白原血症。 2.BT缩短 严重的血栓性疾病。
【凝血酶原时间测定PT】：是外源性凝血途径的筛检试验，反映外源性凝血途径和共同途径凝血因子是否异常。 检测原理（一步凝固法）
37℃在待测血浆中，加入足够量的组织凝血活酶和适量的钙，满足外源性凝血的全部条件。从加钙到血浆开始凝固所需要的时间。 检测方法：光学法 电流法 磁珠法
3.ISI和INR
国际敏感度指数（international sensitivity index ISI)
组织凝血活酶参考品与每批组织凝血活酶PT校正曲线的斜率。 ISI值越小越接近0，试剂越敏感。
标准品：1967年人脑凝血活酶批号67/40 ISI=1.0 现用参考品BCT/253，RBT/79。 PT试剂应有与检测仪器整合的ISI 报告方式
检测标本和正常对照PT时间（秒） PTR=患者PT/对照PT
口服抗凝剂需报INR。 应建自己的参考值 PTA：PT的百分活动度，评估肝受损程度。 PT的结果审核与复查，结合标本质量 临床意义
1. PT延长；超过对照3秒。
见于先天性FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ减低（<40%)及纤维蛋白缺乏；
获得性凝血因子缺乏（DIC），原发性纤溶，维生素K缺乏，双香豆素抗凝治疗。 2. PT缩短：
见于先天性FⅤ增多，高凝状态，口服避孕药，血栓前状态及血栓性疾病.
【D-二聚体】：由于继发性纤溶中纤溶酶的主要作用底物是纤维蛋白，生成特异性EDP即为D-D，D-D是继发性纤溶特有带鞋子产物。 PS：外周血中：M>N>E>B>L
溶血素作用：N>M>L【M为中间细胞包括M E B 幼稚细胞】 散射 E>B>N>M>L 第三章 血液分析仪
现代血液分析仪综合应用了【电学】和【光学】两大原理 电学检测原理包括【电阻抗法】和【射频电导法】 光学检测原理包括【激光散射法】和【分光光度法】
必考题一※※※2、体积、电导、光散射（volume conductivity scatter VCS) 在细胞近自然状态下得出检测结果。 V：用阻抗原理测定细胞体积。
C：根据细胞壁能产生高频电流，采用高频电针，测量细胞内部结构（核浆比、颗粒），辨别体积同，性质不同的细胞。
S：激光扫描细胞，产生不同角度的散射光，提供细胞形态、核结构，并鉴别细胞颗粒。
必考题二 血液分析仪
1.0°——反映细胞大小、检测细胞数量
2.7°—— 反映细胞内部结构及核染色质的复杂性
3.90°偏振光——反映细胞内部颗粒及细胞核分叶情况
4.90°去偏振光——“去偏振”是指垂直方向的激光光波运动随光散射结果而改变。嗜酸性粒细胞颗粒丰富，可消除偏振光，以中性粒细胞相鉴别。
6、2005年国际实验室血液学学会【ISLH】提出了显微镜复查的41条建议性标准。 全血计数（1-15） WBC分类和RET（16-23） 可疑报警（24-41）
9、白细胞直方图的原理 ：在计数白细胞时，要加入溶血素使红细胞破坏，此时白细胞膜受到破坏，细胞浆流失，使白细胞体积大小发现变化，因此需要强调的是在白细胞直方图上细胞排列的顺序不是细胞的原始大小，而是经溶血液修饰的细胞大小
【中性粒细胞N 嗜碱性粒细胞B 淋巴细胞 L 单核细胞 M 嗜酸性粒细胞 E】
溶血素作用：N>M>L【M为中间细胞包括M E B 幼稚细胞】
16、尿液分析仪：
仪器组成：机械系统，光学系统，电路系统
.绒制层：含碘酸盐和试剂层，碘酸盐可破坏维生素C等物质的干扰 PS：维生素C影响的参数：
①【葡萄糖GLU】②【BIL胆红素】③【NIT亚硝酸盐】④【LEU白细胞】 ⑤【BLD隐血或红细胞】
信号与意义：
FSC前向散射光强度——颗粒大小，细胞大小
FI荧光强度——从染色细胞发出的荧光，主要反映细胞染色质的强度 向前荧光脉冲宽度——细胞染色质的宽度 向前散射光脉冲宽度——细胞长度 电阻抗——细胞体积成正比。 第五章 尿液的一般检查
【多尿】：指成人24小时尿量超过2.5L，儿童24小时尿量超过3L 少尿：< 0.4 L/24h或 <17ml/h（儿童< 0.8 ml/Kg）
无尿： < 0.1L /24h或12 h无尿（儿童< 30-50ml /24h ） 闭尿：无尿发展至排不出尿称为闭尿。
【血尿】：尿液含有一定量的红细胞时称为血尿。
1、尿比重的测量分为干化学试带法，折射计法，尿比重计法 超声波法 称重法 折射计法：
①CLSI和中国临床实验室标准化委员会推荐参考方法
②易于标准化，标本用量少（1滴尿）可重复测定，尤其适用于少尿患者和儿科患者 ③测定结果通常比尿比重计法低
临床意义：尿比重可以粗略反映肾脏的浓缩于稀释功能 低比重尿：尿比重常低于1.015时称为低比重尿或低渗尿。
等渗尿：尿液比重常维持在1.010±0.003(与肾小球过滤液很接近)称为等渗液 2、尿渗量的临床意义 ①评价肾脏浓缩稀释功能 ②鉴别肾性和肾前性少尿
3、尿液酸碱度检查的临床意义
尿液酸碱度检测主要用于了解机体酸碱平衡和电解质平衡情况，尿液酸碱度是诊断呼吸性或代谢性酸碱中毒的重要指标。
4、正常尿液中蛋白质——30~130mg/24h 随机尿——0~80mg/L 阴性
尿液蛋白质——超过150mg/24h蛋白定性试验为阳性 方法学评价： ①试带法
主要用于尿液分析仪，操作简单快速，易于标准化，适用于健康普查或临床筛检，目前以广泛应用于临床。灵敏度70~100Mg/L，对白蛋白敏感容易遗漏本周蛋白，采用单克隆抗体排除其他蛋白干扰存在干扰因素。 ②磺基水杨酸
操作简单，反应灵敏，结果显示快，与 白蛋白球蛋白等蛋白都可以反应，灵敏度50mg，存在假阳性。CLSI推荐确证实验。存在假阳性，假阴性 ③加热乙酸法
方法经典而准确但操作复杂，特异性强，干扰因素小，灵敏度150mg 【组织性蛋白尿】：组织性蛋白尿是指来源于肾小管代谢产生的组织破坏分解的炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质，进入尿液而形成的蛋白尿。反应肾小管功能。 5、尿糖测定的方法学评价：※※ 1 班氏法：
传统方法；非特异性，可检出多种糖；