培养基模拟灌装验证 VPZ17001
15.5 对培养基灌装污染情况分析
若在培养基的培养过程中可能发生以下污染的情况，则说明培养基模拟无菌灌装实验失败，及时分析造成污染的原因。
15.5.1当培养基的污染率是这种曲线图时，污染可能来源于液体培养基（培养基贮罐非无菌连接，在此过程中染菌，使培养基溶液在循环管路中受到污染，微生物持续繁殖）。在灌装结束时，要注意保持培养基贮罐处于无菌密闭状态在储罐内取样测试，可以核实这样的假设。
15.5.2当培养基的污染是以这种曲线图时，说明污染仅仅发生在灌装试验的初期，污染可能来自于生产过程中所使用的灌装设备（移动储罐、输液管路、灌装针头、洗塞机），在灌装过程中污染物被培养基溶液冲洗掉，灌装到培养基中，在后续的灌装过程中整个系统中不存在污染物。
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15.5.3当培养基污染率是以这种曲线图时，只出现一个尖峰时，说明只是在短时段的一些灌装培养基被污染，可能与灌装过程中不正确操作或干扰导致的污染有关，必须知道被污染产品灌装的准确时间，以及当时所实施的干扰措施（灌装操作过程的录像是非常有用的），比较容易调查到污染的原因。
15.5.4当培养基污染率是以这种曲线图时，可能是由某个干扰措施造成的，该污染可能是灌装过程中的灌装管线受到了污染，可能是更换灌装针头或重新调试装量引起的污染，导致微生物持续繁殖。
15.6 培养基模拟灌装失效
15.6.1培养基模拟灌装试验结果被认作无效的情况不可以频繁发生。 15.6.2更不能直接将失败的培养基灌装结果视为无效。
15.6.3在符合明确的书面规程要求的情况下才能做出试验无效的判定，此时，要给出支持文件对无效的原因充分说明理由，并且在实际生产中遇到类似情况时也要同样处理。失效不等于无测试。如果有不可接受的情况发生，最好先停止培养基灌装，再判断是否是失效。 15.6.4以下是可能造成培养基模拟灌装失效结果的问题： 15.6.4.1培养基促生长试验失败。
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15.6.4.2在无菌生产区域的物理条件发生问题(例如断电、HEPA发生泄漏)。
15.6.4.3培养基灌装过程中一些违反规程的操作，这些操作可能造成批生产中止/报废。 15.6.4.4培养基灌装可能因为上述的任何一个或所有类似其他原因造成失效, 这些问题可能造成灌装的中止或失效。但是，培养基灌装中止的事件需要有详细的说明记录。 16 环境监控和微生物限度控制
16.1制定培养基灌装过程的微生物负荷的监控计划，便于偏差调查，确定给产品构成最大风险的位置作为关键监控点：产品暴露位置、直接接触表面、人员风险点、瓶子裸露区、灌装区域、塞、盖裸露区。按实际生产选择合适的监测方法：空气浮游菌、沉降菌、接触碟/棉签法，合理制定控制标准，体现全面监控和动态监控。 16.2无菌环境控制与监测 16.2.1浮游菌监测
测试状态：测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。动态监控在生产过程中进行。 16.2.2沉降菌监测
测试状态：测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。动态监控在生产过程中进行。 16.2.3手指菌检测
16.2.3.1净化间操作人员手指菌检测方法是：让被检者伸出左手和右手，分别将手指头与平皿呈30o的角度，轻轻按在平皿培养基上，不得只按指尖。取样后加盖，用记号笔写上姓名。 16.2.3.2手指菌检测时，力求反映真实情况，照顾到各种人员，取样时间定在手消毒后工作20—30min的时间段内取样，不要在操作人员刚刚进行手消毒后取样。 16.2.3.3检验后要对部位消毒处理。 16.2.4洁净服接触检测
16.2.4.1灌装室操作人员洁净服检测方法是：让被检者伸出手臂，分别将衣袖和胸前洁净服轻轻按在平皿培养基上，取样后加盖，用记号笔写上姓名。在生产结束后进行，取样后要对取样部位单独清洗保证没有培养基遗留。
16.2.4.2 洁净服接触检测时，力求反映真实情况，照顾到各种人员，灌装室内的所有工作人员均应取样。
监测项目 检测合格标准 监测点 第 28 页 共 51 页
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A级环境的测试标准＜1个/m3；B级环境空气浮游菌监测 的测试标准≤10个/m3；C级环境的测试标准≤100个/m3； A级环境的测试标准＜1个/皿；B级环境沉降菌监测 的测试标准≤5个/皿；C级环境的测试标准≤50个/皿， A级环境的测试合格标准＜1个；B级环境手指菌检测 的测试合格标准≤5个，为合格。 灌装间 灌装间 灌装间 洁净服接触检测 A级环境的测试合格标准＜1个；B级环境灌装间 的测试合格标准≤5个；为合格。 17 清场与清洁 培养基灌装结束后要进行彻底的清场，以免对环境产生污染，制定清洁规程进行清洁，清洁区域包括：无菌生产区域、管道系统过程中的培养基泄漏处理、培养基的撤出和报废，培养基灌装过程、灌装前不得故意设计不具代表性的大清场，采取措施保证验证不能对生产造成不良影响。 18 培养基灌装过程监控记录
18.1文件记录包括：过程控制检测和实验室检测结果；环境和人员监测结果；设备功能（设备使用记录，过滤器完整性测试）；操作过程记录；人员干扰操作、偏差、中断等发生时间和持续时间；培养基报废记录：生产线清场记录等。
18.2 QA人员观察：整个培养基灌装过程要有质量保证部全程观察；所有培养基按时间顺序进行标记，便于一旦有污染时追逐发生时间段；灌装过程任何的干扰行为，质量监督员要进行详细记录，以便识别可能的污染来源。 19偏差调查
19.1检查所有培养基无菌灌装用物品的灭菌设备的验证资料及灭菌记录。
19.2检查培养基模拟灌装时的环境监控资料，包括空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及操作人员的卫生监测资料。
19.3将培养基中污染菌和环境监测时所监测到的微生物逐一鉴定，并比较各个污染菌彼此间的相关性。
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19.4检查相关产品无菌试验结果呈阳性的历史资料，看其污染菌与培养基模拟灌装验证试验中的污染菌是否一致。
19.5检查以往的培养基模拟灌装资料，看其中的污染菌是否符合常规。 19.6检查培养基灌装滴眼剂瓶、塞、盖的完好性。
19.7检查培养基模拟灌装时控制区的温、湿度和压差记录，是否符合常规。 19.8检查培养基模拟灌装时的维修和清洁记录。
19.9检查培养基模拟灌装时的批生产记录和设备运行记录。 20纠编措施
20.1增加培养基的灌装数量和环境监测数据以查明污染源。 20.2加强无菌生产环境的清洁和消毒措施。
20.3增加灌装前静态下的环境监测数据以检查无菌环境条件的可靠性。
20.4用培养基模拟灌装不合格品的污染菌对消毒剂进行挑战性试验，以检查污染菌是否对消毒剂有耐受性。
20.5分别于灌装前、灌装时及灌装后，增加对操作人员的卫生监控。 20.6增加培养基模拟灌装的批次，以检查所出现的偏差是否具有偶然性。 21异常情况处理程序
培养基无菌灌装确认过程中，严格按照工序标准操作规程、卫生清洁规程、取样规程、检验规程和质量标准基本验证方案进行操作。出现培养基无菌灌装不合格品数量不符合标准的结果时，要按下列程序进行处理：
21.1 培养基无菌灌装失败原因进行分析
21.1.1生产环境的监控数据进行评估，包含环境沉降菌、空气浮游菌、手指菌、洁净服的检测结果进行分析。
21.1.2 对配制过程中使用的注射用水微生物的分析。
21.1.3 消毒剂的配制检查：查看消毒剂的配制及使用记录，对剩余的消毒剂进行消毒效果检测。 21.1.4 对灌装过程中所使用的所有设备：干热灭菌柜、湿热灭菌柜、洗瓶机、洗塞、盖机的灭菌程序和灭菌记录进行分析。
21.1.5 对灌装过程中使用的过滤器的完整性试验进行结果分析。
若不合格原因属厂房设施、设备、灭菌系统和人员操作等方面的原因，及时报验证领导小组，调整或维修系统运行参数或对系统进行处理。
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