生物化学实验指导110330(2)

2019-02-20 20:41

常用。

下列玻璃仪器应避免烘烤:(1)各种容量分析仪器如量瓶、量筒、吸管、滴定管等。因烘烤时温度较高,容易造成器壁变形而致容量不准。(2)厚壁玻璃皿和器壁厚薄不等、差别较大的器皿。此等仪器容易因壁受热不匀而破裂。(3)烧结玻璃仪器,如烧结的方形比色杯、各种烧结砂芯滤器等,此等仪器也易在烘烤时发生破裂。

容量分析仪器以室温自然干燥或用试液灌洗为宜,如必须使用干燥的可用抽气(强制通风)干燥,实验室中常用流水泵抽气,如需更快的干燥,可先用少量95%乙醇润洗器壁除去水分,倒去乙醇后再用少量乙醚洗内壁,沥干后抽气除去剩余的乙醚蒸气即可得到干燥的仪器,此法常用于干燥吸管之类小型容量分析仪器。

学生对实验中所用的吸管哪些必须干燥的,哪些不一定用干燥的应心中有数。 (三)吸管的作用

吸管是生化实验中最常应用的容量分析仪器,用于准确移取试液,其精密度按不同的容积可达移取量的0.1~1%。操作时以右手拇指和中指夹管身,把吸管的尖端伸入液体中,把液体吸入吸管内至刻度以上,迅速以右手食指按住吸管的上口控制试液的泄放(见图1),不应用拇指控制管口,尽量少用口吸以免管口脱空而把液体吸入口中。吸液手应将吸管持正,保持垂直位置,使右眼与刻度等高,然后稍微放松食指或轻轻转动吸管,使得液面缓慢降落,到管内液面弧线的最低点与刻度线齐(注:将吸管斜持读数的操作是错误的,因可造成很大的读数误差)。如所吸取的试液颜色很深,不易看清液面最低点,则最好选用分刻度吸管放取两个刻度之间的容积的方法。此时可改以液面的边缘与刻度对齐。但在单刻度的吸管一次放出所标明的全量时不能这样做,仍尽可能看清液面弧线的最低点。此外,生化实验中因大多数分析属微量分析,吸取试液的最往往很小,如不除去吸管外壁所沾液体可造成很大误差,一般应用干净的碎滤纸片试净吸管外壁然后放出管内液体。

吸管的类型很多,在使用上也有某些差别,因此应先了解所持吸管的类型,掌握正确用法,现将常用的吸管类型及其特点分述如下:

1、移液吸管:为化学定量分析实验所常用,用作移取吸管所标明数量的试液。常见的有50ml、25ml、10ml、5ml、2ml、1ml等容量规格。试液自管内放出时,管身须直立,管尖靠在受器的内壁上,放松食指,令液体自由流出,等液体不再流出时,还要贴靠15秒钟,最后管的尖端一点残液不应吹出,因该类吸管的刻度一般表示液体的泄出量。

2.分刻度吸管:

分刻度吸管常见的容量有10ml、5ml、2ml、1ml、0.5ml、0.1ml等。通常将管身标明的总容量分刻为100等分,因此10ml总量的此类吸管有0.1ml的分格。有效读数至0.01ml,1ml总量的此类吸管有0.01ml的分格,其余类推。这类吸管常用作移取非整数量的试液,有刻度到尖端和刻度不到尖端的两种,刻度到管尖的最上刻度线与管尖之间的容量为管身所标明的容量,并在这之间100等分。这两类吸管的刻度因生产厂家不同有零点在上和零点在下两种刻法,在使用前应先认明以免发生错误,使用时如系刻度不到尖端的,应用食指控制液体泄放至最下刻度线,如为刻度到尖端的,于液体放出后应将残留管内最后一点试液沿容器壁轻轻吹出(国产年级类吸管有的厂家在管身上刻有“吹”字)。

3、奥氏(Ostward)吸管:此种吸管的管身有一橄榄形玻璃泡,其特点是各种类型的同一容量的吸管中此类吸管的内表面积最小,使用时吸管内壁粘附的试液也最少,因此特别适用于粘稠的液体,如血液、蛋白质溶液及油脂等的吸取,血液化学分析中用于血样的吸取。此种吸管常见的有10ml、5ml、2ml、1ml和0.5ml几种容量的。用时应该注意缓慢将试液放出,最后一点试液要轻轻吹出(国产奥氏吸管口上刻有“吹”字样)。

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4、微量吸管:为吸取小量试液设计的特种毛细吸管,有单刻度也有分刻度的。临床化验室作血球计数的稀释吸管也是一种微量吸管。生化测定中常见的微量吸管的容量有0.2ml(200μl)、0.1ml(100μl)、0.05ml(50μl)、0.02ml(20μl)、0.01ml(10μl)等,此类吸管移取试液时均须缓慢地将试液吹出。

如果移取毒物或具有腐蚀性的药品时,可用橡皮球吸液。使用时,先将橡皮球捏扁,接在吸管上口,然后慢慢放松橡皮球,此时液体即被吸入吸管内,移去橡皮球,如前述方法握待吸管,用食指堵住吸管上口并泄放所需容积。作用时注意橡皮球不能骤然放松,以免试液吸入球内。

附:定性实验中量取试液的方法:定性实验对取量的准确度要求不严,一般在取小量试液时可以滴数估计。可将滴管口锉大或用火焰烧灼使缩小,校正至每滴大致相当于1ml。数毫升的试液可用估计法直接用试管量取,学员可于平时实验中注意锻炼自己以视力估计容器中液量的能力,熟能生巧,尤其是试管中液量的估计更为常用,应该熟练。可在一列试管中用吸管分别量入1ml、2ml、3ml、5ml、10ml水,注意其高度与管径的关系,多次训练不难掌握1~10ml内液量大致准确的估计,定性实验中较大量液体可用量筒量取。取用试剂时应养成瓶塞不离手的习惯,以免盖错。

(四)过滤方法

生化实验室中所作的过滤除与定量分析化学操作相同者外,很多实验中的过滤往往因不可使滤液稀释而使用干滤纸过滤。为了增快过滤速度常把滤纸摺成“菊花形”以增大过滤表面(见图)。并且在漏斗上盖表面皿,以避免滤液蒸发浓缩。除了用滤纸过滤之外,对于粗的过滤也可使用脱脂棉球替代滤纸。有些实验可改用离心沉淀来替代过滤,以节省时间。

(五)试管及离心管中液体的混匀操作

使试管中先后加入的几种试剂充分混匀往往是实验成败的关键之一。由经验得知,不少学生实验的失败其原因是未能在反应前将试管内容物混匀,应引起充分注意。常用于混匀试管及离心管内液体的方法有以下几种:(1)少量液体的混匀可简单地将试管轻轻振摇或摇动即可;(2)较多的液体用振摇、摇动不易混匀时,可一手持试管,另一手轻轻扣击或拨动试管底使管内液体搅动发生漩涡而达到混合的目的;(3)在试管中盛有多量液体以上述方法难于使之混合时,可试用手持试管作圆周转动,使管内液体也作漩涡运动而混合之(见图1);(4)如以上方法均不能使之混合的情况可考虑是否允许用玻璃棒搅拌混匀,或采用管口衬一清洁塑料薄膜,以手掌按住反复颠倒混匀的方法。用拇指直接堵住试管口作颠倒混匀的操

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作是错误的,在任何情况下均不应采用。

图1

(六)离心及离心机

离心法是利用离心力将不同质量的物质进行分离。离心力与转速(每分钟转数)的平方、物质质量及旋转半径成正比。电动离心机转速快,分离效果高可以迅速地使溶液中悬浮物沉积下来,得出上清液及沉淀,供进一步分析。液体粘稠或过少,难以过滤或不适于需时较长过滤的,皆可离心。再有,需要反复沉淀和洗涤以及需要收集最少的沉淀进行分析者,更需要离心。此外,离心法也用于某些液体的分离。

离心作用离心机(Centrifuge)。作用离心机时特别要注意对称位置上离心力的平衡。其次,注意防止离心过程中离心管的破裂及保证离心效果。虽然转速愈快时间愈长,则离心作用愈大,但这也增加仪器负担和打坏离心管的危险。一般实验,常用转速为每分钟5000转(每分钟转数round per minute,常用符号rpm表示)以下,在多数情况下,约2000rpm 5~15分钟即可达到目的。某些实验,按规定的转速及时间作用,转速不可过高,时间不可拖长。

一般电动离心机的作用方法及注意事项如下:

1)检查离心管套管:如有玻璃碎片等异物,必须彻底清除,套管底放好适当的缓冲用棉花或胶垫。

2)平衡对称位置的重量:用粗天平,平衡对称位置上的套管、离心管与内容物的总重。一侧放检品管,向另侧离心管内加水。若二侧均为检品管,则向轻侧套管内加水,直至平衡。

3)套管等放入离心机的对称位置后,离心管不得过高,否则必须重新处理。最后盖上离心机盖。

4)先将调速旋钮转到零位,然后再正确连接电源(注意电压,严防接错)。逐步转动旋钮,渐渐加快转速,待机钮指示或转速指示器的标示达到所需转速时为止,并记时间。

5)到定时间时,逐渐地转回旋钮到零位,拨下电源插销,等待转动自然停止,决不可用手强制地使之突然停转。然后开盖,取出离心管。

注意事项:

1)离心机需放在牢固平衡的台面上,保持水平位置。

2)使用离心机,关键问题是对称位置上的离心力相等,不仅对称的要总重相等,而且重心所在位置也应该对称。只有这样才能保证仪器高速正常运行和得到好的离心效果,否则在高度旋转中产生的离心力会有很大差别,发生震动影响沉降效能,并且容易使离心管破碎。甚至会出伤害事故。

一般使用较低转速时可两侧都放待离心液体,为对称平衡向较轻侧离心管套管之间加水,但使用转速较高时,应当取前述的另侧离心管中加水的方法。向离心管与套管间加水虽

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然两侧可以等重,但旋转后两者重心所在位置不同,即旋转半径不同,高速旋转时仍会产生离心力的不同。等重并不一定离心相等,平衡的原则是要求对称位离心力相等。

3)起动及停机过程都必须是逐渐地,起动时或离心过程中出现异常声响时,要及时停机进行检查处理。

4)注意,切勿使液体流溅于离心机内浸蚀机体应保持机腔内干燥清洁。

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第二部分 实验记录报告及实验设计简介

一、实验记录

要使用专用的实验记录本。实验课前要预习,将实验名称、目的要求、原理、实验内容、操作方法和步骤等简单扼要地写在记录本上。

记录本上不要涂改,更不能撕页,写错时可注明,重写。

实验中所观察到的现象、结果与数据,应及时直接记录。绝对不可用单片纸记录。记录应详尽、准确、简练、清楚。记录应客观,切忌夹杂主观因素。

连续观察过程中的数据,即使相同,也应如实记录。 数据的计算应在记录本中记录,总之,实验过程中的每个结果均要正确无遗漏地做好记录。

实验中所使用的仪器类型,编号,以及试剂的规格、化学式、分子量、准确浓度,均应记录清楚,以便于核对,和作为查找成败原因的参考依据。

总之,记录应如实、及时、准确、无遗漏,在学习阶段就应养成一丝不苟的严谨科学作风。

二、实验报告

实验结束后,应及时整理和总结实验结果,写出实验报告。内容可分为定性和定量实验二大类,下面列举二类报告的格式,供参考。

1、定性实验报告

实验编号 实验名称 日期 (一)目的和要求 (二)原理 (三)操作

(四)结果与讨论(包括实验结果,对观察现象的小结,对实验中遇到的问题和思考题进行探讨或写个人体会等)

(五)试剂与仪器(可略去) 2、定量实验报告

实验编号 实验名称 日期 (一)目的和要求 (二)原理

(三)试剂与仪器(可略去) (四)操作方法

(五)实验结果(包括原始数据及其处理表格,计算过程,标准曲线图及实验组与对照组的结果比较图表,另外还包括针对实验结果进行必要的说明和分析)

(六)讨论(包括关于实验方法或操作技术方面有关问题,如实验的正常结果、临床意义;异常现象解释,推理;针对思考题进行探讨;以及对实验设计的认识体会与建议等。)

对于学生,操作方法一项往往照书抄书,一般情况下,这是不可取的。最好的办法是在预习时将实验操作过程简化成工艺流程图方式,或自行设计的表格来表示,既简单明了,一目了然,又能培养总结,归纳的能力。

当然,以上指的是一般实验报告格式。但绝非千篇一律,我们同样反对墨守成规。只要能说明问题,既全面又准确地反映了实验的全过程,如实地阐述了实验结论和你的观点,都是符合要求的。

三、实验设计简介 科学是实验的科学,如不能掌握科学的基本知识和思维的技巧,很可能阻碍甚至扼杀科

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