1.通常采用样品处理方法为：准确称取粉碎样品5-10g或吸取液体样品5-10ml，置于烧杯中，加入50ml蒸馏水和5g左右活性炭，加热煮沸，过滤，用30-40ml热水洗涤活性炭，收集滤液于100ml容量瓶中，加水至标线，摇匀备测。
2.茚三酮受阳光、空气、温度、湿度等影响而被氧化呈淡红色或深红色，使用前须进行纯化，方法如下：
取10g茚三酮溶于40ml热水中，加入1g活性炭，摇动1min，静置30min，过滤。将滤液放入冰箱中过夜，即出现蓝色结晶，过滤，用2ml冷水洗涤结晶，置干燥器中干燥，装瓶备用。
实验二十二 维生素C含量的测定 (2,6-二氯酚
靛酚法)
一、原理
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（—C═C—），因而具有很强的还原性，氧化失去两个 OHOH
氢原子而转变成脱氢抗坏血酸。其余2,6—二氯酚靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na）染料氧化抗坏血酸而其本身被还原为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
在酸性溶液中氧化型2,6—二氯酚靛酚呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6—二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸尚未全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚立即被还原为无色，抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液呈红色。所以，在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
二、材料、仪器与试剂 （一）材料：水果或蔬菜。
（二）仪器：三角瓶（50ml）、研钵、移液管（10ml）、漏斗、滤纸、 容量瓶（100ml）、微量滴定管（5ml）、分析天平、离心机。 （三）试剂
1．标准抗坏血酸溶液：精确称取抗坏血酸100mg，用适量2%草酸溶液溶解后移入500ml容量瓶中，并以2%草酸溶液定容，振摇混匀，1ml含0.2mg抗坏血酸。
2．0.02% 2,6—二氯酚靛酚溶液：称取2,6—二氯酚靛酚钠盐50mg溶于200ml含52mg
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碳酸氢钠热水中。冷后加水稀释至250ml，过滤后装入棕色瓶于冰箱中保存，临用前按下法标定：取5ml标准抗坏血酸溶液于三角瓶中，加5ml 2%草酸，用2,6—二氯酚靛酚溶液滴定至微红色，15s，不褪色即为终点，并计算出每1ml染料溶液相当的抗坏血酸毫克数。
三、操作步骤
（一）称取捣碎的果蔬样品20g，放在研钵中，加2%草酸溶液少许研碎，再转入200ml容量瓶中，加2%草酸稀释至刻度，过滤备用。如果滤液有颜色，可用白陶土脱色。 （二）吸取样品滤液10ml于烧杯中，用已标定的2,6—二氯酚靛酚溶液滴定至出现微红色，且15s不褪色为止，记下染料用量。同时，以10ml2%草酸溶液作为空白按同上方法进行滴定，作三个重复。 四、计算
（Y-Y1）×A b
W=———————×—×100(mg/100g) B a
式中：W——100g样品中含有的抗坏血酸毫克数
Y1——空白滴定消耗的染料毫升数 Y——样品滴定消耗的染料毫升数
A——1ml染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数 B——滴定时吸取的样品溶液毫升数（10ml） b——样品定容毫升数 a——样品的克数 五、注意事项
a) 标准抗血酸溶液临时配制。
b) 2，6—二氯酚靛酚染料不稳定，每周重新配制，临用前标定。
c) 抗坏血酸溶液很不稳定，易氧化，故操作过程要迅速，夏季应置于冰浴中研磨。
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实验二十三 维生素C含量的测定（紫外快速测定法）
一、原理
维生素C的2，6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。
二、材料、仪器与试剂
（一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。
（二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（10ml, 25ml）、移液管（0.5ml，1.0ml）、吸管、研钵。 （三）试剂
1．10%盐酸：取浓盐酸133ml，加水稀释至500ml。
2．1%盐酸：取浓盐酸22ml，加水稀释至100ml。
3．1mol/L氢氧化钠溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000ml。
三、操作步骤
（一）标准曲线的制作
1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100ug/ml。
2．取带塞刻度试管8支并编号，分别按表内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。
蒸馏水加入体积（ml） 总体积（ml）
抗坏血酸溶液浓度（ug/ml）
1 9.9 10.0 1.0
2 0.2 9.8 10.0 2.0
3 0.3 9.7 10.0 3.0
4 0.4 9.6 10.0 4.0
5 0.5 9.5 10.0 5.0
6 0.6 9.4 10.0 6.0
7 0.8 9.2 10.0 8.0
8 1.0 9.0 10.0 10.0
标准抗坏血酸溶液加入体积（ml） 0.1
3．消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（ug）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。 （二）样品的测定
1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2-5ml 1%盐酸，匀浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（1 0000g, 10min）来消除。
2．样品的测定：取0.1-0.2ml提取液，放入盛有0.2-0.4ml 10%盐酸的10ml容量瓶中，
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用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。
3．待测碱处理液的制备：分别吸取0.1-0.2ml提取液，2ml蒸馏水和0.6-0.8ml 1mol/L氢氧化钠溶液依次放入10ml容量瓶中，混匀，15min后加入0.6-0.8ml 10%盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其消光值。
4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素C的含量。
5．也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的维生素C的含量。 四、计算
μ×V总 Vc的含量（μg/g）= —————— V1×W总 式中：μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（μg） V1——测消光值时吸取样品溶液的体积（ml） V总——样品定容体积（ml） W总——称样重量（g）
实验二十四 总抗坏血酸含量的测定（荧光法）
一、原理
样品中的还原性抗坏血酸经活性碳处理氧化为脱氢抗坏血酸，然后与邻苯二胺反应生成有荧光的喹喔啉（Quinoxaline）。荧光的强度与脱氢抗坏血酸的浓度成正比。测定时应用荧光计的激发波长为350nm，发射波长为430nm。
食物中的有些成分如丙酮酸与邻苯二胺也能形成荧光物质而造成干扰。脱氢抗坏血酸与硼酸形成复合物后就不能与邻苯二胺产生荧光物质。利用上述反应特点，可在样品中先加入硼酸，然后再加入邻苯二胺，即可作为空白来校正干扰物质所产生的荧光。此法具有较强的专一性。
二、材料、仪器与试剂
（一）材料：各种新鲜水果、蔬菜。
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（二）仪器：荧光分光光度计、具塞三角瓶（100ml）、容量瓶、具塞试管。 （三）试剂
1．偏磷酸—醋酸溶液：称取15g偏磷酸（HPO3）溶于40ml冰醋酸中，加蒸馏水定容至500ml。
2．偏磷酸—醋酸—硫酸溶液：称取30g偏磷酸，溶于80ml冰醋酸中，加入0.06mol/L硫酸定容至1000ml。
3．50%醋酸钠溶液。
4．硼酸—醋酸钠溶液：3.0g 硼酸溶于100ml 50%醋酸钠溶液中，用前配制。 5．邻苯二胺溶液：20mg邻苯二胺溶于100ml水中，用前配制。
6．抗坏血酸标准溶液：准确称取50mg抗坏血酸，用偏磷酸—醋酸溶液溶解并定容至50ml抗坏血酸，用偏磷酸—醋酸溶液溶解并定容至50ml，其含量为1mg/ml。吸取5ml，置50ml容量瓶中，加入偏磷酸—醋酸溶液定容，其含量为100μg/ml。临用前配制。
7．百里酚蓝指示剂：称取0.100g百里酚蓝，溶于10.75ml 0.02mol/L 氢氧化钠中，加水至200ml。（变色范围：pH2时显红色，pH2.8时显黄色，pH4以上显蓝色）。
8．0.02mol/L氢氧化钠溶液。 9. 10%盐酸溶液。
10．活性炭的加工处理，取100g活性炭溶于500ml 10%的盐酸中，加热至沸腾，过滤，用蒸馏水洗涤至无氯离子为止（以亚铁氰化钾检查）。
三、操作步骤
（一）样品处理：称取样品3.00-5.00g置研钵中，加入适量的偏磷酸—醋酸溶液，研磨成匀浆，过滤至100ml容量瓶中，用少量偏磷酸—醋酸液洗涤研钵及滤纸数次，加入1滴百里酚蓝指示剂，如溶液变黄或蓝色，加偏磷酸—醋酸—硫酸至溶液变红色，再用偏磷酸—醋酸定容至刻度。取2个100ml三角瓶，各加入1g活性炭，分别加入50ml抗坏血酸应用液（100μg/ml）和50ml样品提取液，剧烈振荡3min，过滤。
（二）样品测定：取四个100ml容量瓶，分别标为“标准”、“标准空白”、“样品”、“样品空白”，各加入上述滤液5ml，然后向“标准空白”和“样品空白”中各加入5ml硼酸—醋酸钠溶液，15min后加水定容。向“标准”和“样品”中各加入5ml醋酸钠溶液，用水定容。取四支试管，分别加入上述四种溶液2ml，在避光或暗室中，立即向各管加入5ml邻苯二胺，摇匀后放置35min。
调节荧光计激发波长为350nm，荧光波长为430nm，记录各管读数。
四、计算
“样品”读数—“样品空白”读数 V
总抗坏血酸（mg/100g）= ————————————————×C×——×100 “标准”读数—“标准空白”读数 W
式中：C——抗坏血酸标准液浓度（mg/100g） V——提取液的体积（ml） W——样品重量（g）
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