非水溶剂洗去表面活性剂,4.获得活性中心开启的活性有机相生物印迹酶。水相生物印迹酶的制备过程一般是选择印迹分子然后与酶蛋白分子混合,待起始蛋白在变性条件下与印迹分子充分作用后,用交联剂固定印迹蛋白的构象,经透析去除印迹分子后就得到了具有水解能力的水相生物印迹酶。
6. 固定化酶和游离酶相比有哪些优缺点?
固定化酶是通过物理的或化学的手段,将酶束缚于水不溶的载体上,或将酶柬缚在一定的空间内,限制酶分子的自由流动,但能使酶充分发挥催化作用的酶,它和水溶性酶比较具有以下优点:(1)极易将固定化酶与底物、产物分开;产物溶液中没有酶的残留,简化了提纯工艺.(2)可以在较长时间内反复使用,有利于工艺的连续化、管道化。(3)酶反应过程可以严格控制,有利于工艺自动化和微电脑化。(4)在绝大多数情况下提高了酶的稳定性。(5)较能适应于多酶反应。(6)酶的使用效率提高,产物得率提高,产品质量有保障,成本低等。固定化酶也存在一些缺点:(1)酶固定化时酶的活力有所损失。同时也增加了固定化的成本,使工厂开始投资大。(2)固定化效率低,比较适应水溶性底物和小分子底物。(3)与完整细胞比较,不适于多酶反应,特别是需要辅因子的反应,同时对胞内酶需经分离后,才能固定化等。
7. 酶分子修饰的方法有哪些?酶分子修饰的目的是什么?
酶分子修饰的方法多种多样,主要有1.金属离子置换修饰、2.大分子结合修饰、3.肽链有限水解修饰、4.酶蛋白侧链基团修饰、5.氨基酸置换修饰、6.核苷酸链剪切或置换修饰、7.物理修饰、8.基因水平的修饰等。酶分子修饰的目的是:1.提高酶活力、2.改进酶的稳定性、
3.允许酶在一个变化的环境中起作用、4.改变酶催化的最适pH或温度、5.改变酶的特异性、
6.改变酶催化反应类型、7.提高催化过程的反应速率等。
8. 简述酶的催化特点和催化机理。
酶具有一般催化剂的特征:1.只能进行热力学上允许进行的反应;2.可以缩短化学反应到达平衡的时间,而不改变反应的平衡点;3.通过降低活化能加快化学反应速度。还具有以下特性:1.催化活性易受外界条件影响,对温度、酸碱性、重金属盐等条件敏感。2.高效性,酶的催化活性通常要比化学催化剂高107-1013倍。3.专一性一种酶只能催化一种或一类结构相似的底物进行某类的反应,对其他底物和反应无催化效应。4.催化活性可调控性,生物体内化学反应和酶种类繁多,但酶活性是可以受到调控的,其调控的方式也很多。5.反应条件温和性,酶一般是生物体内的蛋白质或核酸类物质,由于生物体内环境稳定且较为稳定,因此酶的催化条件也具有温和性。
9. 举例说明固定化酶(细胞)的制备过程及原理。
固定化酶(细胞)的制备过程是指将所需要固定的酶或者细胞通过物理吸附、交联作用、键合作用以及包埋作用等过程结合到选择好的一定载体上的过程。以微囊包埋法固定血红蛋白酶为例,其制备过程为先将含有高浓度血红蛋白的酶溶液在与水不互溶的有机相中乳化,在油溶性的表面活性剂存在下形成油包水的微滴,再将溶于有机溶剂的高聚物加入乳化液中,然后加入一种不溶解高聚物的有机溶剂,使高聚物在油-水界面上沉淀、析出,形成膜,将酶包埋,最后在乳化剂的帮助下由有机相转移入水相中通过将微囊固定收集得到微囊包埋固定化血红蛋白酶。该过程的原理是利用将乳化后的酶溶液与溶解的固定膜材料溶液混合后,通过加入不溶解高聚物的有机溶剂使高聚物分子在乳化液界面析出高聚物沉淀层形成高聚物微囊将酶溶液包埋固定得到固定化酶。
10. 简述抗体酶的制备方法及应用
抗体酶的制备过程是通过对生物抗体进行一些特定的处理或修饰后使之具有酶催化某些反应的功能。目前抗体酶的制备方法主要包括:1.细胞融合法、2.抗体结合位点化学修饰法、
3.引入辅助因子法、4.用生物工程方法产生抗体、5.拷贝法等。抗体酶的应用则主要应用于