pH值适当
避免污染
8 PCR常见问题与分析
8.1 无扩增产物
现象：正对照有条带，而样品则无
原因：
1. 模板:含有抑制物，含量低
2. Buffer对样品不合适
3. 引物设计不当或者发生降解
4. 反应条件：退火温度太高，延伸时间太短
对策：
1. 纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量
2. 更换Buffer或调整浓度
3. 重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物
4. 降低退火温度、延长延伸时间
8.2 非特异性扩增
现象：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。
原因：
1. 引物特异性差
2. 模板或引物浓度过高
3. 酶量过多
4. Mg2+浓度偏高
5. 退火温度偏低
6. 循环次数过多
对策：
1. 重新设计引物
2. 适当降低模板或引物浓度
3. 适当减少酶量
4. 降低镁离子浓度
5. 适当提高退火温度或使用二阶段温度法
6. 减少循环次数