表13 农药对藻类的毒性等级划分标准 毒性等级 高毒 中毒 低毒
96h-EC50 (mg/L) EC50≤0.3 0.3＜EC50≤3.0 EC50＞3.0
（6）试验报告
① 受试样品名称、来源、纯度和。
② 试验生物名称、来源、培养基及培养方法。
③ 试验条件：试验期和持续时间、温度、光强和光质、试验容器（容量、型号、密闭方法）、静置、振荡或通气方式、测试液体积、pH、溶剂及其浓度、藻类生长的测定方法等。
④ 受试样品的浓度与抑制曲线图，得出的EC50值并注明计算方法。 ⑤ 观察到的效应：细胞颜色、形态和大小变化；粘连或聚结情况；死亡情况、抑藻或杀藻效应等。
⑥ 试验结果与毒性评价。
2.2.7蚯蚓毒性试验
蚯蚓是土壤生态系统中一个重要的组成部分，在生态食物链中，它是陆生生物与土壤生物之间物质传递的桥梁。通过测定农药对蚯蚓的LC50，评价农药对蚯蚓的急性毒性，提供农药对生态环境影响的资料。供试土壤的种类不同，导致农药对蚯蚓的毒性程度也有差别。试验可采用有代表性的耕地土壤或用人工配制的标准土壤作为试验材料。
（1） 试验材料
试验动物：推荐选用赤子爱胜蚯蚓（Eisenia foeLide）
试验用土：采用有代表性的耕地土壤或用人工配制的标准土壤，土壤经风干磨细，过5mm筛。
主要仪器设备：培养箱、标本瓶。
试验条件：培养箱内温度20?1?C、湿度80~85％。 （2）试验方法
供试农药用制剂或纯品，对难溶于水的农药，可用丙酮助溶。采用耕地土壤时须用酸性、中性、偏碱性的三种土壤。按正式试验方法先做预试，求出农药对
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蚯蚓全致死的最低浓度和全存活的最高浓度，正式试验在此范围内按浓度级差设置5~7处理组，并设一组不加农药的空白对照，每个处理均设3个重复。在标本瓶中放500g土，加入农药溶液后充分拌匀（如用有机溶剂助溶时，需将有机溶剂挥发净），加适量蒸馏水，调节土壤水分含量达20％。每个处理放入蚯蚓10条，用纱布扎好瓶口，将标本瓶置于20?1?C、湿度80~85％的培养箱中。试验历时二周，于第7天和第14天倒出瓶内土壤，观察记录蚯蚓的中毒症状和死亡数字，及时清除死蚯蚓。根据蚯蚓7天和14天的死亡率，求出农药对蚯蚓的毒性LC50值及95％置信限（mg/kg土壤）。
（3）数据处理
LC50的计算可采用寇氏法、直线内插法或概率单位图解法估算（具体计算方法参见2.2.1数据处理），也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算。 （4）质量控制
① 空白对照组死亡率不超过10%。
② 试验期间，应保持试验室条件正常，如出现各种原因的故障，须重新试
验。 （5）评价标准
按照LC50值的大小将农药对蚯蚓的毒性划分为四个等级（见表14）：
表14 农药对蚯蚓的毒性等级划分标准 毒性等级 剧毒 高毒 中毒 低毒
LC50 (mg/L) LC50≤0.1 0.1＜LC50≤1.0 1.0＜LC50≤10 LC50＞10
（6）试验报告
① 受试样品名称、来源、纯度。
② 试验蚯蚓名称、来源、大小及健康情况。 ③ 试验条件：试验温度、光照等。
④ 试验液的浓度及试验开始后7天及14天的LC50值和95%置信限，并给出所采用的计算方法。
⑤ 对照组蚯蚓的死亡率、行为反应异常的比例。
⑥ 供试土壤采用耕地土壤时，需附上土壤理化性质资料，采用人工土壤时，
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需注明配方与配制方法。
⑦ 试验结果与毒性评价。
2.2.8土壤微生物毒性试验
土壤微生物的活性是土壤肥力的一个重要指标，而农药施用直接影响土壤微生物活性，因此农药对土壤微生物的影响是评价农药对生态环境安全性的重要指标。一般以土壤微生物呼吸作用即CO2的释放量来衡量土壤中微生物的总活性。本准则采用直接吸收法（密闭法）测定CO2的释放量。
（1）试验材料
供试土壤：两种有代表性的新鲜土壤，提供土壤pH、有机质、代换量、土壤机械组成等数据。
试剂：0.1mol/L氢氧化钠溶液，用无CO2的蒸馏水配好后进行标定； 0.05 mol/L盐酸溶液，配好后需标定；
1 mol/L氯化钡溶液，用无CO2的蒸馏水配制，以防止干扰； 1%酚酞指示剂。
供试农药：用制剂，也可用原药或纯品。 主要仪器设备：培养箱、标本瓶及玻璃器皿。 （2）试验方法
试验装置及试验条件：采用容积为2L的标本瓶，标本瓶内放置两只100mL的小烧杯，其中一只盛放土壤，另一只盛放碱液用以吸收土壤微生物呼吸所释放的CO2。本试验在生化培养箱中进行，温度为25?10C，不需光照。
试验操作：每种土壤设三种不同浓度处理，以模拟农药常用量、10倍量、100倍量时土壤表层10cm土壤中的农药含量，同时设不加农药的对照，每组重复三次。难溶于水的农药，可用丙酮助溶，将药液先与少量土混匀，待丙酮挥发净后，再均匀拌入到处理的土壤中。每个处理用土50克，将土壤含水量调节成田间持水量的60%（试验过程中保持土壤含水量一致），装于100mL小烧杯中，与另一个装有标准碱液的小烧杯一起置于2升容积的密闭瓶中，于25±1℃的恒温箱中培养。试验开始后的第1，2，4，7，11，15d时更换出密闭瓶中的碱液测定吸收的CO2含量。当打开密闭瓶更换碱液时，同时更换了密闭瓶中的空气，以保证密闭瓶中的氧压维持在一定水平。将取出的碱液放入100 mL三角瓶中，加入BaCl2溶液，再加入酚酞指示剂，用标准HCl溶液滴定至红色消失。
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（3）数据处理 CO2释放量的计算
CO2释放量（mg/g）=
?V1??C1?V2?/C2??C2?22
m 式中：V1?氢氧化钠吸收液体积，mL； V2?滴定时消耗盐酸的体积，mL； C1?标定盐酸的浓度，mol/L；
C2?标定氢氧化钠的浓度，mol/L；
m?实验土壤质量，g。
影响率计算 影响率（%）=
处理组CO2释放量?对照组CO2释放量?100%
对照组CO2释放量影响率指农药对土壤微生物呼吸强度的影响率。影响率包括抑制率和促进率，农药处理土壤呼吸强度低于对照土壤时，表现为抑制；农药处理土壤呼吸强度高于对照土壤时，表现为促进。
（4）质量控制
① 各处理土壤中，农药的加入量、农药在土壤中的均匀度要保持一致。 ② 培养期间，各标本瓶要保持密闭。
③ 滴定操作时，对滴定终点的判断要准确一致。 （5）评价标准
将农药对土壤微生物的毒性划分成三个等级。土壤中农药加量为常量，在15天内对土壤微生物呼吸强度抑制达50%作为高毒；土壤中农药加量为常量10倍，能达到上述抑制水平的划分为中毒；土壤中农药加量为常量100倍，能达到上述抑制水平的划分为低毒。 （6）试验报告
① 受试样品名称、来源、纯度。
② 试验土壤的来源、理化性质及土壤类型。 ③ 试验条件：采用的稀释水、培养箱温度等。 ④ 试验期间各处理土壤中加水的频率和方法
⑤ 每一浓度受试土壤的量、重复数、溶剂（如果用到）、培养时间
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⑥ 数据分析方法、土壤CO2释放量随时间变化的曲线图、农药对对土壤微生物呼吸强度的影响率。
⑦ 试验结果与毒性评价。
2.2.9天敌赤眼蜂毒性试验
农药田间施用时容易造成对非靶生物天敌的危害，非靶生物天敌种类很多，赤眼蜂在我国分布很广，且已有人工养殖，供试蜂种为稻螟赤眼蜂与欧洲玉米螟赤眼蜂。
（1）试验材料
供试生物：供试蜂种为稻螟赤眼蜂与欧洲玉米螟赤眼蜂。 供试寄主：米蛾卵
试验器皿：直径为9cm的培养皿、指形管
试验条件：试验温度25±2℃、相对湿度70-80%。 （2）试验方法
供试农药按一定浓度级差配制成5~7个处理组，并设溶剂与空白对照，每组用100~200粒寄生卵作试验，赤眼蜂的发育期分为卵、幼虫、预蛹和蛹及成蜂五个阶段。田间施用农药时，各个发育期均有可能遭受危害。试验均以米蛾卵为寄主，对稻螟赤眼蜂接种后24h内为卵期，至96h内为预蛹期，至168h内为蛹期；将接种好的卵置于培养皿内，按上述时间范围内，分别于各发育期定量喷洒农药，晾干后装于指形管中培养，观察记录其羽化率。成蜂的毒性试验，先将农药溶于丙酮中，定量的加入指形管中滚吸成药膜管，然后将蜂放入药膜管中爬行1h后转入无药指形管，封紧管口，并饲喂蜂蜜，24h检查统计管中死亡和存活蜂数。求出LC50值和95%的可信限值。
（3）数据处理
LC50的计算可采用直线内插法或概率单位图解法估算（具体计算方法参见2.2.1数据处理），也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算。
（4）质量控制
① 空白对照组死亡率不超过10%。
② 试验期间，应保持试验室条件正常，如出现各种原因的故障，需重新试验。
（5）评价标准
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