(一) 多肽激素类
1.胸腺激素（thymushormones）
胸腺是一个激素分泌器官，对免疫功能有多方面的影响，如某些免疫缺陷病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤以及老年性退化性病变都与胸腺功能的减退及血中胸腺激素水平的降低有关。胸腺依赖性的淋巴细胞群——T细胞直接参与机体有关免疫反应。胸腺对T细胞发育的控制，主要是通过胸腺所产生的一系列胸腺激素促使T细胞的前身细胞——前T细胞分化、增殖、成熟为T细胞的各种功能亚群，由此控制、调节免疫反应的质与量。目前，国内外关于胸腺激素的制剂已有多种，其中一些重要的胸腺激素制剂如胸腺素组分5，是一族酸性多肽，分子量为1000～15000；胸腺素α1是28个氨基酸残基的多肽，分子量3108，pI=4.2。胸腺激素制剂的生物学功能与调节免疫功能有关。 下面介绍其中的胸腺素的生产： （1）结构与性质
胸腺素是由几十种多肽组成的混合物，相对分子质量在1万以下，等电点在3.5～9.5之间；具有免疫活性；胸腺素对热稳定，短时间内加热至80℃，其生物活性不降低。
临床用于以下方面：（1）原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染等；（2）自身免疫病，如肝炎、肾病、红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力等；（3）变态反应性疾病，如支气管哮喘等；（4）细胞免疫功能减退的中年人和老年人疾病，并可抗衰老；（5）肿瘤的辅助治疗。 （2）生产工艺
1966年Goldstein等首次报道从小牛胸腺中提取了部分纯化的胸腺素(thymosin)，1972年进一步纯化分离得到一组具有免疫活性的多肽，称胸腺素F5（即从小牛胸腺提取得到的第5种组分），在胸腺激素的制剂中，F5的理论基础和临床应用的研究最多。1977年Goldstein等从F5中分离出胸腺素α1为含有28个氨基酸残基的肽，其活性比F5高。下面是提取法生
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产胸腺素。工艺路线如图11-12所示。
胸腺 前处理 胸腺碎块 离心 提取液 加热，离心 上清液 丙酮 沉淀 丙酮粉 磷酸盐 硫酸铵
离心 PepMap 18 胸腺素 干品 层析 脱盐，干燥 SephadexG-25 层析液 离子交换层析 盐析物 硫酸铵 上清液 图11-12 胸腺素生产的工艺路线
工艺过程如下：
① 预处理 将新鲜或冷冻胸腺除脂肪，绞碎。
② 提取 用生理盐水洗涤胸腺2次，再加入3倍量的生理盐水，于组织捣碎机中制成匀浆，14000×g离心，得提取液。
③ 除去杂蛋白 将提取液80℃加热15min，沉淀对热不稳定部分，1500×g离心，取上清液。
④ 丙酮沉淀 上清液冷至4℃，加入5倍体积的冷丙酮（-10℃），过滤，收集沉淀，干燥得丙酮粉。
⑤ 盐析 将丙酮粉溶于pH 7.0磷酸盐缓冲溶液中，加硫酸铵至饱和度为0.25，离心去除沉淀，再用乙酸将上清液调pH值为4.0，加硫酸铵至饱和度为0.50进行盐析，收集盐析物。
⑥ 纯化 将盐析物溶于pH 7.2的10mmol／L Tris-HCl缓冲液中，上DEAE-Sephadex A50 凝胶柱(118 cm ×100 cm) 收集主峰，经Sephadex G-25 脱盐，溶解在0.12 mol/ L的乙腈溶液中，上PepMap C18柱(118 cm ×100 cm) 进行磷酸梯度层析，收集主峰，冷冻干燥得胸腺素(组分5)。
⑦ 活力检测 采用E-玫瑰花环形成试验，按全量法花环形成试验进行，然后按常规固定染色、镜检200个淋巴细胞，每个淋巴细胞3个或3个以上红细胞为一个E-玫瑰花结。E-玫瑰花结升高百分数不得低于10％；相对分子质量15 000以下。
2．肠胃道激素
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以SP 物质为例说明其生产： （1）结构与性质
SP物质是以猪、牛等为原料提取或化学合成的由11个氨基酸组成的多肽，其N端第一位氨基酸为精氨酸。呈淡黄色的粉末，易吸潮，溶于水、甲醇、乙醇，不溶于乙醚。酸性条件下稳定，碱性条件下易逐步失活。
国内外对SP的研究十分活跃，SP具有多种生理和药理作用，可以降低血压扩张血管、增加兔心血冠脉灌流量、镇静、止痛等作用。现研究将SP制成脑素软膏和将其添加到化妆品中制成止痒宁露水。 （2）生产工艺
采用提取法获得SP。SP能在乙醇中溶解，而其它的蛋白质、大肽段在高浓度的乙醇中沉淀析出，SP又在乙醚的溶解度极小从而析出，利用此性质可以提取SP物质，工艺路线如图11-13所示。
乙醇 过滤 沉淀（弃去） 滤液 盐析 滤渣（弃去） 沉淀（弃去） 乙醇 沉淀 滤液 冰醋酸 过滤 盐析物 上清液 （弃去） 预处理 冰冻猪大脑 脑浆 水浸提 离心 上清液 滤渣（弃去） 滤液 乙醚 干燥 滤液（弃去） 沉淀物 成品 图11-13 SP物质生产的工艺路线
工艺流程如下：
① 预处理 处死动物，立即取脑，速冻，-20℃保存备用。用蒸馏水冲洗数次，绞肉机中绞碎制成脑浆。
② 水浸提 将脑浆移入不锈钢锅中，加3倍量的水，搅拌浸提2h，离心（10000r/min），
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30min,收集上清液。
③ 沉淀 将上清液置于搪瓷罐中，边搅拌边加入2倍量的乙醇（95％），静置1h，过滤，弃去沉淀，收集滤液。
④ 盐析 将滤液置于搪瓷罐中，加入硫酸氨，盐析，过夜，过滤，收集盐析物。 ⑤ 溶解 将上述盐析物置于不锈钢桶中，边搅拌边加入5倍量的冰醋酸，搅拌4h，离心，得滤液，滤渣再加入冰醋酸，过滤，得滤液，混合两次所得滤液。
⑥ 乙醇沉淀 将上述滤液置于搪瓷罐中，加入2倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，静置4h，过滤，弃去沉淀，收集滤液。
⑦ 乙醚沉淀 将滤液置于搪瓷罐中，加入4倍量的乙醚，-4℃过夜，过滤，收集沉淀，沉淀物用乙醚洗涤数次，低温真空干燥，得SP精品。 此法的提取率4％～5％。 3．垂体多肽激素
垂体包括腺垂体和神经垂体，可分泌多种激素。下面介绍促皮质素(Adrenocorticotropic hormone，ACTH)的生产： （1）结构与性质
促皮质素是一种从腺垂体前叶提取的多肽激素，由39个氨基酸组成，种属差异表现在第25～33位上，易溶于水，等电点为6，在干燥和酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中易失活；溶于70％的丙酮和乙醇中。
促皮质素能维持肾上腺皮质的正常功能，促进皮质激素的合成和分泌，所以临床上可将其作为诊断垂体和肾上腺功能的药物，还用于胶原病、过敏症等。 (２) 生产工艺
ACTH生产有两种方法，一种是CMC提取法，效价不低于45U/㎎；另一种是酸丙酮法，效价不高于3U/㎎。CMC提取法的工艺流程如图11-14所示。
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猪脑垂体 ACTH 预处理 垂体前叶干粉 解吸液 0.5mol/L醋酸 提取 0.15mol/L盐酸 解吸 提取液 CMC3 CMC 一次吸附 洗涤 CMC１ 0.15mol/L盐酸 解吸 CMC 二次吸附 解吸液 树脂处理 冷冻干燥 缓冲液 CMC2 图11-14 ACTH生产的工艺路线
工艺过程如下：
① 预处理 将新鲜猪脑垂体投入丙酮中，浸泡24 h后更换新丙酮，重复3次以上，至垂体变硬为止，剥离垂体，取前叶，置不锈钢锅中干燥，磨碎，过40目筛，得垂体前叶干粉，含水量低于6％。
② 提取 加垂体前叶干粉20倍的加0.5mol／L醋酸，硫酸调节pH 2.0～2.4，70～75℃保温10min，速冷至-20℃以下，加入用0. 5mol／L醋酸浸泡过夜的硅硅藻土（200g）过滤，滤渣再按上法处理后过滤，合并滤液，冷藏保存。
③ 吸附 调提取液pH为3.1，加40mL聚山梨醇80和投料量20％的CMC(2.2mg当量)，3℃搅拌使其吸附12h，过滤。
④ 解吸 用0.15mol／L的盐酸解吸吸附CMC，收集解吸液，再通过717阴离子交换树脂，过滤，收集洗脱液，调节pH 3.1。
⑤ 二次吸附 加入聚山梨醇和CMC对洗脱液进行二次吸附，1～5℃搅拌使其吸附12h，过滤，收集CMC。
⑥ 二次洗脱 用0.1mol／L醋酸、蒸馏水、0.01mol／L醋酸铵(pH 4.6) 、0.1mol／L醋酸铵(pH 6.7)对CMC依次洗涤，然后用0.15mol／L盐酸解吸。解吸液再通过717阴离子交换树脂及732阳离子交换树脂，收集洗脱液，调节pH 3.1。 ⑦ 干燥 冷冻干燥洗脱液，得ACTH，效价在45U／mg以上。
ACTH冻干制剂有每瓶25U、50U两种规格。还可制成促皮质素锌注射液，为长效制剂。合成的促皮质素类似物有促皮质18肽、24肽、25肽及28肽等。 （３）检验方法
ACTH粗品为1U/mg以上，用小白鼠胸腺萎缩法测定；ACTH精品为45U/ mg以上，
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