蛋白类药物生产(8)

2019-08-31 21:26

吸收与转运、促进铁质吸收及维持红细胞膜的完整性,维持DNA的生物合成,细胞的生长及细胞免疫等多种功能。

目前,人工已研制开发出了谷胱甘肽药物,广泛应用于临床,利用其巯基以螯合重金属、氟化物、芥子气等毒素,还用于肝脏疾病、肿瘤、溶血性疾病以及角膜炎、辐射防护、白内障疾病等的辅助治疗,此外,谷胱甘肽作为生物活性添加剂及抗氧化剂,在食品和化妆品领域中的应用也越来越广。 (2)生产工艺

谷胱甘肽的生产方法主要有溶剂萃取法、化学合成法、微生物发酵法和酶合成法等4种,其中发酵法是生产谷胱甘肽最具潜力的方法,目前即以酵母发酵法生产为主。生产路线如图11-18所示。

发酵培养 离心 离心液(弃去) 菌体 滤渣(弃去) 滤液(弃去) 提纯 成品 干燥 谷胱甘肽铜盐沉淀 冰冻过夜 冰冻菌体 提取 沉淀 酵母菌种 培养液 滤液 滤渣 (弃去) 沉淀 图11-18 谷胱甘肽生产的工艺路线 工艺过程如下:

Ⅰ. 菌种活化

将酵母斜面菌种接种到250mL装有合成培养基的三角瓶中,置于摇床培养24h,28~30℃,然后转接到3000mL装有合成培养基的三角瓶中,置于28~30℃的摇床上培养24h。

Ⅱ. 菌种扩大培养

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将上述培养液转到300L装有合成培养基的种母罐中,30~32℃的条件下培养24h,再将300L种母罐的培养液转接到3000L种母罐中,30~32℃的条件下培养24h,再将3000L种母罐的培养液转接到7000L种母罐中,30~32℃的条件下培养24h。

Ⅲ. 发酵培养

① 发酵 将以上7000L种母罐的培养液转接到50 000L装有发酵培养基的发酵罐中,在30~32℃的条件下培养39h,即得发酵培养液。

② 收集酵母菌体 将发酵培养液3000r/min离心, 收集酵母菌体,置冰箱过夜。 ③ 提取 将过夜的酵母菌体置于不锈钢锅中,加水,密闭,煮沸10min,速冷,过滤,收集滤液。

④ 沉淀 将滤液置于不锈钢锅中,边搅拌边加0.5mol/L硫酸调节pH。加热至40℃时,边搅拌边加入氧化亚铜的水浊液,静置20min,过滤,用0.5mol/L硫酸和蒸馏水洗涤,收集谷胱甘肽铜盐沉淀。

⑤ 提纯 将上述沉淀置于不锈钢锅中,用硫化氢分解铜盐,过滤,通入氮气,除去滤液中的硫化氢,得无硫化氢的谷胱甘肽液体,加入溶液体积10倍量的冷丙酮以沉淀。另一种纯化方法是离子交换法,可以采用732阳离子交换树脂洗脱获得纯化的GSH。 ⑥ 干燥 将沉淀置于干燥器中干燥,得成品。

谷胱甘肽作为一种生物药物,应用前景广阔,市场需求量日渐增大,为提高发酵法生产谷胱甘肽的产量,还需解决以下几方面的问题:(1)选育谷胱甘肽高产菌株,提高谷胱甘肽合成酶系的表达水平,并使之在胞外大量积累;(2) 谷胱甘肽的合成需要ATP参与,而在反应体系中直接添加ATP是经济上所不允许的,构建一个高效的ATP再生系统,提高谷胱甘肽生物合成系统的运行效率与经济性;(3)充分发挥固定化细胞技术的潜力,实现谷胱甘肽的连续生产。

思 考 题

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1. 简述基因工程技术生产人生长素最新研究进展。 2. 论述白细胞介素-2的生产方法。

2. 简述多肽类药物的分类及其主要的生产方法。 3. 谷胱甘肽的性质有哪些?有哪些生产方法? 4. 简述利用基因工程法生产干扰素的工艺流程。

5. 血浆蛋白类蛋白包括哪些?举例说明其中一种蛋白的工艺路线。 6. 在制备胰岛素时,为提高胰岛素的质量和产量,应注意几个方面的环节?

参 考 文 献

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10.许旭云,徐金宝。提高重组人白细胞介素-2 得率的研究。中国生化药物杂志,2005,26(2):111-112

11.李晓红,朱惠玲,余蓉,李红霞。重组人胰岛素制备工艺。四川大学学报(工程科学版),

2007,39(4):79-83

12.任玉莹,范泉水,邱薇,等。基因工程犬干扰素α的制备及纯化工艺。生物技术通讯

301

2009.01

2

302


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