(1)假定重捕取样中标记比例与样方总数中标记比例相等，写出样方中种群总数(N)的计算公式 。
(2)该草地布氏田鼠的平均种群密度为 只／hm。事实上田鼠在被捕捉过一次后更难捕捉，上述计算所得的平均种群密度与实际种群密度相比可能会偏 。 (3)综合两次捕获情况，该田鼠种群的性别比例(♀／♂)为 。
(4)在上述调查的同时，还对样方中布氏田鼠的洞口数进行了调查(假设样方中只有这一种鼠)，平均每100m2有3.6个洞口，洞口数与田鼠数的比例关系为 。 答案：(1)N=Mn／m (2)144 高 (3)8／9 (或32／36) (4)2.5 ：1
十七、水质污染对生物的影响
实验目的：认识水质污染对生物体存活的影响。
实验原理：污水中的需氧细菌数量与有机物含量成正比，需氧细菌能氧化分解亚甲 基蓝染料，使它从蓝色变成无色。若水样中需氧细菌越多，亚甲基蓝染液被分解褪色得 越快。
合成洗涤剂是一类普遍使用的生活用品，属低毒有机物。它不易被分解，排入水体或 摄入生物体内可逐步蓄积，当蓄积量超过一定程度时，就会污染水质并影响人体健康。 实验材料：水蚤、放置1天的洗碗水、河水、自来水
仪器试剂：显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、试管、试管架、量杯、吸水纸、秒表、0.01%
亚甲基蓝染液、清水滴瓶、2%洗衣粉溶液
实验步骤：
1．水质有机物污染与需氧细菌数量的关系：
取放置一天的洗碗水、河水、自来水各5mL，分别注入标有1、2、3编号的试管中，在每支试管中各加5滴0.01%亚甲基蓝染液。把试管放在温暖处。30分钟后观察各试管内水样变色情况，并记录结果。 2．合成洗涤剂污染对生物的影响：
取4支试管，分别编号4、5、6、7，按下列顺序加入相应物质和水蚤。然后每隔10 分钟观察1次，连续3次，比较各试管内水蚤活动情况，并记录每支试管内水蚤死亡数目。
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3．无机离子对生物的影响：
(1)取载玻片→滴清水→吸水蚤→镜检(低) →记录(每分心搏数，重复3次，求平均值)—
正常值
(2)滴加1%KCl溶液1-2滴→对侧引流→重复1次→镜检(低) →记录(水蚤活动状况和心
搏变化情况)
实验结果：1.水质有机物与污染与需氧细菌数量的关系： 试管 编号 1 2 3 水样 洗碗水 河水 自来水 水蚤(只) 5 5 5 5 清水(ml) 10 10 10 5 0.01%亚甲基蓝染液(滴) 5 5 5 放置时间(分钟) 30 30 30 实验现象 实验结果及分析 2．合成洗涤剂污染对生物的影响： 试管编号 4 5 6 7 练习：
1．做实验用的水样需放置一天的原因是让水中的细菌充分繁殖。
2．污水中的有机物含量越高，则污水中的好氧细菌数量越多，后者能氧化分解亚甲基蓝染料，使它从蓝色变为无色。
3．用放置太久的洗碗水做水质污染实验时，不能使0.01％亚甲蓝溶液褪色，其合理解释是( )
A 溶解氧太低，好氧细菌已死亡 B 亚甲蓝溶液浓度太低 C 好氧细菌大量繁殖 D 溶解氧太多
十八、培养基的配制与灭菌 仪器和试剂
烧杯(500 ml、50ml)、三角烧瓶(250 ml)、量筒、玻璃棒、玻璃漏斗、酒精灯、培养皿、牛皮纸、纱绳、托盘天平、灭菌锅、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、10％NaOH、10％盐酸、精密pH试纸、超净工作台
加2%洗衣粉溶液数量 0 5滴 25滴 5ml 水蚤存活及活动情况 10分钟后 20分钟后 30分钟后 7
实验方法
1．根据培养基配方称取各种原料成分，加入到500 ml烧杯的少量自来水中溶解(其中牛肉膏可用50 ml烧杯称量，并用少许水加热溶解后再加入到本烧杯中)，定容至200 ml，用酒精灯加热至沸腾后加入琼脂2 g(长条状琼脂需用剪刀剪成小段)，继续加热至琼脂完全熔化(加热过程中要用玻璃棒不断搅拌，以防琼脂沉淀在杯底被烧焦)，然后用热水补足蒸发损失的水，使最后容积为200 ml，用精密pH试纸测试培养基pH，并用滴管吸取1～2滴10％盐酸或10％氢氧化钠调节pH至7.2～7.4。
2．将完全熔化的上述培养基趁热倒入250 ml的三角烧瓶中(注意不要把培养基沾在瓶口上，可通过一个漏斗注入三角烧瓶中)，用两层牛皮纸扎紧瓶口后，置于灭菌锅中于1.05 kg／cm2、l21℃下灭菌15～30 min。与此同时，还需将洗净干燥的培养皿若干套用牛皮纸包扎后一起灭菌。
3．待灭菌后的培养基冷却至50℃左右时(或临用前加热熔化冷至50℃左右时)，在启动的超净工作台上打开三角烧瓶的包装纸，并用酒精灯火焰烧瓶口后，将培养基分别倒入灭过菌的培养皿中备用(如培养皿出现冷凝水，需将培养皿倒置在30～37℃温箱内干燥)。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为通用培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 培养基配制的一般过程：
1．称量 按培养基配方依次准确称取各成分于烧杯中。
2．溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，放石棉网上加热，用玻棒搅匀，待药品完全溶解后再补充水分到所需量。若配制固体培养基，将称好的琼脂加入已溶化的药品中，再加热融化。
3. 调pH 先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值。若偏酸，可用滴管逐滴加入10％NaOH，边加边搅拌，随时用pH试纸检测，直至pH达到所需范围。若偏碱，则用10％HCl进行调节。pH值不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子浓度。
4. 分装 按实验要求将配制好的培养基趁热分装于试管或三角瓶内，不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
5．加棉塞 培养基分装完毕，在试管口或三角瓶口塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等)，以防止外界微生物进人培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
6．包扎 加塞后在三角瓶或试管(试管须先扎成捆)双层报纸，用一道绳扎好，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期等。
7. 灭菌 将包扎好的培养基按各自所需的灭菌时间和温度进行高压蒸汽灭菌或其他方
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法灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放人冰箱内作短期保存。
8 ．无菌检查 将灭菌培养基放人37℃温箱中培养24～28 h，以检查灭菌是否彻底。
灭菌是杀灭物体上所有微生物的过程。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部微生物。
高温蒸汽灭菌法属于热力灭菌中的湿热法，是一种最有效的灭菌方法。它是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅（如右图）内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而
产生高温蒸汽。该方法中灭菌的温度取决于蒸气的压力。在一个大气压下，蒸气的温度是100℃。如果蒸气被限制在密闭的容器中，随着压力升高，蒸气的温度也相应升高。在1.05kg/cm2蒸气压下，温度达到121.3℃，维持15～30min，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。同一温度下湿热的灭菌效力、比干热大得多，可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。
火焰灭菌 直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接
种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。
超净工作台简介： 超净工作台是一种局部净化设备，即利用空气洁净技术使一定操作区内的空间达到相对的无尘、无菌状态。一般用于细胞及微生物培养的接种过程。
练习：1、细菌培养基常在121℃压力锅中灭菌，如果只是在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活 A．大肠杆菌 B．一种青霉 C．枯草芽孢杆菌 D．沙门氏菌
2、不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B．碳源物质也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一
3、某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了4个实验，实验条件除图示外共他均相同。下列各图表示实验结果，据图可得出的初步结论是
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A．污染主要不是培养基灭菌时间短造成的 B．污染主要来源于组织培养所用的离体组织 C．调节培养基pH不能解决污染问题 D．调节培养温度不能解决污染问题
4、氯苯化合物是重要的有机化工原料，因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1.
（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的____________。
（2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是____________。
（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于____________培养基和____________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是____________。 （4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为 ____________。
（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在____________培养条件下最早停止生长，其原因是____________。
解析：本题主要考查微生物相关知识。
⑴固体培养基必须含有适量的琼脂； ⑵配置培养基时应先调PH后灭菌；
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