6 开车与培养
6.1 开车运行准备工作
第一步 第二步 安装上22—回水管堵头，关闭W2-排水排汽阀，打开W1—溢流水阀，打开冷却水源。 关闭G—气路调节阀，连接空气压缩机与发酵罐的进气端。 打开空压机，检查空压机出口端，将压力调整至0.1-0.15MPa。注意：发酵罐内空气压第三步 力必须小于0.1MPa。当发现压力难以调整时，应关闭G—气路调节阀，然后重新进行调整。 第四步 将10—进气过滤器与P1—压力表用硅胶管连接。 先打开G—气路调节阀，然后松开进气、尾气口胶管夹头，将气量调节至工艺所需的流第五步 量。注意：必须检查10—进气过滤器、18—尾气过滤器、19—尾气过滤瓶及气路是否堵塞。玻璃罐内压力必须小于0.1MPa。 第六步 第七步 第八步 第九步 第十一步 安装好搅拌电机和顶盖接地线。 插入12—测温电极(2)。 取下DO、pH电极上的保护盖或防护牛皮纸。 连接11-DO电极、12—测温电极(2)、13—泡沫电极、14-pH电极和电机的插头。 将补料瓶的输液胶管安装在对应蠕动泵上，然后松开补料口胶管夹头。注意：蠕动泵运转方向与胶管安装方向。 第十二步 在非运行状态下，打开总电源开关。设置较低的罐体温度，使罐体温度较快下降。 6.2 控制参数设置与运行
·按工艺要求设置搅拌转速、培养温度、pH、DO参数、消泡加液量，以及相应的报警上、下限参数（方法见有关章节）。灭菌完毕后，由于开始时搅拌轴、机械密封及顶盖的温度较高，水汽不易凝聚到机械密封系统，高速搅拌会造成机械密封尖叫，导致降低机械密封寿命，为此要求在一小时内先进行低速运行（100rpm以下），等顶盖温度降至常温时再设置到要求的速度。 ·投入运行，观察各控制参数显示情况是否正常。 ·按工艺要求调整罐压与空气流量。
注意：在罐内温度、转速、进气量等参数达到发酵工艺所需数值并刚接种后，必须对pH电极进行在
线校正和DO电极的100%满度值调定。
6.3 接种培养
·当各测量参数显示正常稳定时，就可进行接种（接种时应确保实验室空气相对静止，如关掉电扇等。） ·准备好合格的摇床菌种。
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·酒精盘内放入无水酒精或酒精棉，点燃后安放于接种口，适当加大通气量或减小尾气流量。 ·打开接种盖，将其放入干净器皿中。
·将菌种瓶口放在火焰上烧一下，并在火焰上拔下瓶塞将菌种倒入发酵罐。 ·将接种盖放在火焰上烧一下，盖上接种盖。 ·按工艺要求恢复罐压和通气量。
注意：在进行接种时，请佩戴手套以防止烧、烫伤。
6.4 取样与放料（见图6-1）
图6-1 放料取样管 取样瓶 罐盖 软管夹 取样三通 e 取样回气口 d ·夹紧尾气胶管（使罐内适当增压，但罐压不得大于0.10MPa）。
·弯曲夹紧胶管的“ d ”部位；调节“e”部位胶管压板, 放去少量培养液后夹紧胶管.
·把无菌取样瓶置于酒精焰上，拔去瓶塞对准取料口，调节“e”点压板，从取料胶管取出所需样品后再夹紧“e”点夹子，盖上取样瓶盖, 夹紧取样管口的胶管。 ·松开d部位和“e”部位的夹子，放去胶管内的残料。 ·取样前后应用75% 酒精对取料口消毒。 ·放料方法与取料方法类同。
7 发酵罐的清洁保养方法
7.1 清洗工作
注意：培养结束和再次使用前都必须清洗罐体及相关部件，清洗时应注意电器元件、电极接口不能进水、受潮。
清洗前应取出pH、DO电极按其要求保养（见电极保养）。
清洗罐内可配合进水进气、电机搅拌、加温一起进行，如多次换水还不能清洗洁净，则要打开顶盖用软毛刷刷洗罐内部件。方法如下：
1） 关闭控制开关与电源开关，取下顶盖电极、电机及其连线插头，拧下进气胶管、冷凝器接头。 2）拧松罐盖紧固螺丝，小心垂直向上取出罐盖横置于平整桌面，垫好、不要碰撞，刷洗干净罐内部件。
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注意：罐盖搬动清洗时只能抓住轴套或顶盖，不能抓搅拌轴、叶轮和其它易变形部件。 3） 玻璃罐取出，小心清洗干净，轻轻放回原位，注意四周间隙对称。 4） 清洗后安装要注意罐内密封圈、硅胶垫就位情况。
5） 拧紧罐盖四个紧固螺丝，用力要平衡并注意罐与罐座间隙均衡，螺丝不要拧得过紧以免损坏玻璃罐。
7.2 试车
·将电极、电机、电缆、进气胶管、安装就位。
·安装完毕后要对罐体内通气（0.08MPa）作密封性试验。 ·对系统进行2--3小时试运行，一切情况正常方可使用。
7.3 发酵罐待用
· 如果短期内需再次培养发酵，应对其进行灭菌后通入无菌空气，保压待用。
· 如准备长期停用，需放去水箱与罐内存水，放松罐盖紧固螺丝，取出电极保养储存好，关闭电源
及所有阀门，盖上防尘罩。
· 每次培养后应用干净抹布清除罐体上的脏物、水渍。
8 检查维护
为了保证设备的正常运行，除了熟悉设备的工作原理与各部件的结构、功能作用外，还应该加强设备的维护与管理，只有做到精心维护才能保证设备处于最好状态，延长设备的使用年限。
8.1 日常检查维护
设备运行中的监控内容（做好相应记录）。 1）系统压力、罐内压力是否稳定在规定范围。 2）搅拌系统、控温系统、电磁阀响声是否正常。 3）培养液颜色是否正常。
4) 温度、溶氧、pH显示参数是否与设定符合。 5) 罐内液位是否正常。
6) 阀门管接头、各接口是否正常，有无泄漏情况。
8.2 定期检查维护
·每隔三个月，需对设备进行全面检查维修。 ·关断所有电源、水源、气（汽）源。
·仔细检查系统所有密封圈、密封端。如有永久变形、老化、划伤、损坏，必须更换。新的密封圈在使用前，必须涂上一层薄薄的硅脂（附带备件）。
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· 检查机械密封的情况，机械密封面是否损伤，动环的位置是否合适（将动环拆下清洗，对动环上的橡胶密封圈加上一层薄薄的硅脂，增加动环的复位能力。
·检查除菌过滤器完好情况，有破损、堵塞现象就要更换。一般3-5批次就应更换新的过滤器。
9 常见故障与排除方法
现象 原因 1） 放久了没有活化 pH电极无法校准 2） 受污染了 3） 电极接插件受潮 4） 电极已损坏或失效 溶氧电极零位或满度无法调出，反应慢 1）放久了没有极化 2）受污染了 3）电极接插件受潮或要加电解液 4）电极已损坏或失效 1）安装不到位 2）密封件损坏 罐压不能保持 3）阀、管泄漏 4）螺丝松动，或松紧不一致 1） 过滤器阻塞 供气量不足 2） 供气系统原因 3） 分布器堵塞 4） 发酵液粘度太高 1） 电器控制原因 发酵温度失控 2） 电加热器损坏 3） 循环泵电磁阀损坏 1） 过滤器失效 2） 罐、管路密封破坏 3） 菌种不纯 染菌 4） 灭菌不彻底 5） 操作原因 6） 实消后冷却和培养过程中罐内负压 系统控制失灵 硅胶管易老化龟裂 硅胶管易夹破
排除方法 1） 按说明书活化 2） 按说明书清洗 3） 烘干处理 4） 调换电极 1）按说明书极化 2）按说明书清洗 3）烘干处理，加电解液 4）调换电极 1）细心安装 2）检查更换 3）修理、更换、调整 4）拧紧或调整紧固 1） 更换或清洗烘干 2） 检修 3） 清洗分布器 4） 改变培养液粘度 1） 检查修理 2） 更换 3） 调换 1） 更换 2） 检查、调换 3） 菌种纯化 4） 严格按工艺要求操作 5） 严格按工艺要求操作 6） 保持罐内正压 1） 接地不良 2） 受强干扰影响 胶管没选对或溶液的浓度太高 胶管没装好 29
1） 改变接地情况 2） 断电重新开机 选择合适的胶管或调整相应的溶液 仔细安装 10 电极的使用和维护
进口pH电极使用事项
如果要把电极放入灭菌锅里或灭菌罩内灭菌，在电极灭菌前，必须在电接插端口处加上隔离帽，或者用牛皮纸包扎好，以防被蒸汽侵蚀、潮湿。
1. pH电极平时不使用，可以浸泡在3mol/L的KCl溶液或饱和KCl溶液中，严格禁止将电极浸泡在
蒸馏水，去离子水或自来水等离子含量极少的液体中。
2. 如果pH电极长期干放而暴露在空气中，在重新使用之前，请先将电极浸泡在3mol/L的KCl溶液
或饱和KCl溶液中2-3天，使电极恢复活性，如果有条件，请先将电极浸泡在9895电极再生液中1分钟左右，然后再用蒸馏水洗干净，浸泡在3mol/l的KCl或饱和KCl溶液中至少1天才能使用。
3. 如果电极敏感膜或白色陶瓷隔膜孔受到蛋白质污染而发黄，可以购买9891电极清洗液，将电极
浸泡在其中数小时，然后再用蒸馏水洗干净，最后浸泡在3mol/L的KCl或饱和KCl溶液中至少1天才能使用。
4. 如果电极白色陶瓷隔膜孔受到Ag2S污染而变黑，可以购买9892隔膜清洗液，将电极浸泡在其中
数小时直至隔膜孔再变白，然后再用蒸馏水洗干净，最后浸泡在3mol/L的KCl或饱和的KCl溶液中至少1天才能使用。
5. 如果电极使用时间过长而造成敏感膜老化，可以购买9895电极再生液，将电极浸泡在其中1~10
分钟（根据敏感膜老化的程度及斜率决定浸泡时间长短），然后再用蒸馏水洗干净，最后浸泡在3mol/L的KCl和饱和KCl溶液至少1天才能使用。严格禁止将斜率在56mv/pH以上的pH电极用9895处理，因为9895电极再生液中含有HF溶液，9895的原理就是用HF将表面的敏感膜老化层腐蚀掉，如果新电极浸泡在9895的电极再生液中或旧电极浸泡在其中时间过长，HF会将好的敏感膜部分也腐蚀掉。
6. 如果pH电极被无机物质污染可以用0.1mol/L的HCl或NaOH溶液清洗数分钟，然后再用蒸馏水
洗干净。
7. 如果pH电极被有机物质污染，可以用酒精或丙酮清洗，然后再用蒸馏水洗干净。
8. 请切记，用9891、9892或9895处理过的pH电极，请勿马上校准或测量，因为那时电极无法进
行测量，必须将电极浸泡在3mol/L或饱和KCl溶液中至少1天才能使用。
9. pH电极上端和电缆线相连接处的接头是高阻抗部件，禁止用水等液体浸泡或蒸气等潮湿空气侵
蚀，可以用新电极所带的塑料小螺帽盖住，电极电缆的接头也属于高阻抗部件，严禁用水等液体浸泡或蒸气等潮湿空气侵蚀，一定要存放在干燥处。
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进口DO电极维护方法
如果要把电极放入灭菌锅里或灭菌罩内灭菌，在电极灭菌前，必须在电接插端口处加上隔离帽，或者用牛皮纸包扎好，以防被蒸汽侵蚀、潮湿。 一、存放
1、如果长期不用请将电极从罐上取下，清洗后放入电极盒中即可。
2、如果敏感膜脏了，请用干净的水冲洗干净。如果冲洗不掉，可放入开水中浸泡一下再冲洗。切不要用坚硬物体刮擦，以免刮伤敏感膜。
3、 勿用水等液体浸泡。防止蒸气等潮湿空气侵蚀电缆线接头和电极接头。 4、 勿用利器刮擦敏感膜，以免损伤。 二、更换膜和换电解液方法：
电极出厂前经过一系列的检验，电极本身带有一个电极膜，但由于在购买运输过程中需要一定的周期，所以在使用前最好更换一下电解液。
如果电极信号产生误差（响应时间长，机械损坏，在无氧介质中电流增大等等），就需要更换膜。更换电解液的维护工作，每三个月进行一次： 1、将电极置于垂直位置，拧下旧电极膜。
2、用水冲洗内电极体并用绵纸小心的擦干，检查一下内电极体和不锈钢外壳之间是否有电解液，如有残留的电解液，将其轻轻甩干净。
3、使用一段时间以后，如发现电极体银环发黑，可用1000目以上的细砂纸擦亮即可。 4、检查一下O型圈是否有损坏，如有需要可更换。
5、 电解液倒入将要更换的膜中，液面控制在螺纹以下，适当多加些电解液，可避免因电解液较少而影响
电极极化，将电极置于垂直位置并将膜轻轻拧上电极体。拧电极膜时注意“进二退一”原则，避免因膜内多余液体无法及时排出而把膜撑破。最后电极膜应拧紧，到看不见O型密封圈颜色（黑色）为止，渗出的电解液用绵纸擦干。
6、 由于O型圈的密封作用，膜会很容易的被拧紧，如需用力拧或此过程不能容易的完成，则可能没有拧
在正确的位置。
7、 在每次换膜或换电解液后，电极必须重新极化和校准。
8、 极化：更换新的电解液或换新的膜以后，必须连续通电7小时以上，即为极化，极化后才能进行准确
的校准。先极化，后校准。
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