(aconitine)、中乌头碱(mesaconitine)、次乌头碱(hypa-conitine)、消旋去甲基乌药碱(d1-dcmethylcoclaurine,d1-hige-naenine)等为主;生乌头等所含的上述生物碱,为多种相似的双酯类生物碱,约0.4%~0.8%。此外,尚含有新乌头碱、塔拉地萨敏(talatisamine)、川乌碱甲、乙及氯化甲基多巴胺(coryneine chori01e),又含酯类成分约0.7%,从中分离出附子脂酸,附子磷脂酸钙,甾醇及其酯类等成分。
乌头的功能为祛风散寒、除湿镇痛,而附子则为温补回阳、强心救逆要药。二者虽同出一源,但其加工炮炙有别,故药性疗效亦各有异,其中奥妙,就在于其化学成分在炮制过程中发生了一系列的变化。原生乌头所含毒性很强的上述多种酯型生物碱,包括乌头碱、中乌头碱,次乌头碱等,在附子炮制过程中,都水解成为毒性较小的单酯类碱:苯甲酰乌头胺(benzoylaconine)、苯甲酰中乌头胺(benzoylmesaconine)、苯甲酰次乌头胺(benzoyl hypaconine)等;若继续水解则转变为毒性更小的胺醇类碱:乌头胺(aconine)、中乌头胺(m-sam-nine)、次乌头胺(hyraconine)等。如乌头碱水解后变为苯甲酰乌头胺,其毒性为乌头碱的1/200,而乌头胺的毒性还更小,仅为乌头碱的1/2000。 2.成分分析
现对附子的成分鉴别与含量测定等成分分析已进行了较为深入的研究,如乌头碱等单一生物碱或总生物碱的含量测定或限量检查等,为其质量控制及深度开发提供了有效的手段。在药材质量控制上,尤其
要注意其有毒成分的限量检查或含量测定,下面特予介绍。 (1)附子乌头碱的限量检查:取黑顺片、白附片或淡附片粗粉209,置具塞锥形瓶中,加乙醚150ml,振摇10分钟,加篑试液lOml,振摇30分钟,放置1~2小时,分取醚层,蒸干,加无水乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取乌头碱对照品,加无水乙醇制成每lml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液6ml、对照品溶液5pl,分别点于同一碱性氧化铝薄层板上,以正己烷一醋酸乙酯(1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以碘化碘钾试液与碘化铋钾试液的等容混合液。
《中华人民共和国药典》2000年版(一部)规定附子供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
(2)乌头碱的含量测定(薄层扫描法)
①仪器与薄层色谱条件:仪器:岛津CS-920型薄层仪。薄层色谱条件.薄层板:硅胶G60F25铝质软板(E.Merck,德国);展开甲苯.醋酸乙酯一二乙胺(7:2:1展距9cm;显色剂:碘蒸气,斑点呈紫棕色;扫描条件:波长:b=242nm;线性参数SX=1;狭缝:1.2mm×1.2mm。 ②标准曲线:精密称取乌头碱对照品3mg于1商量瓶中,加乙醚溶解,定容,使成3y9/ml的溶液。以对照品点样量为横向联合坐标,斑点积分值为纵坐标作图,得一直线,其回归议程为:Y=515.5X+3055.3.r=0.9943
结果表明,乌头碱的线性范围为3.3~15.0mg。
③稳定性试验吸取对照品溶液2ml点于薄层板上,展开后,按一定时间间隔测定斑点积分值。结果表明在10小时内斑点积分值稳定。 ④样品测定:取样品于60℃下干燥,粉碎过60目筛,取药粉59,精密称定,置于250ml碘瓶中,加入浓氨水10ml,待药粉湿润后,加入氯仿100ml,振摇5分钟后浸渍24小时,滤过,药渣用10ml氯仿洗涤2次,合并氯仿液,回收溶剂,浓缩液定量转移至5ml量瓶中,水浴蒸干,点样前加乙醚溶解,定容,作为供试品溶液。吸取供试品溶液适量和对照品溶液点于同一薄层板上,按上述条件展开,测定斑点面积积分值,用外标二点法计算样品中乌头碱的含量,即得。 (3)酯型生物碱的限量检查与含量测定(分光光度法): ①酯型生物碱的限量检查:
对照品溶液的制备:精密称取乌头碱对照品20mg,置10ml量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度。
标准曲线的制备:精密量取对用品溶液0.00ml、0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00 ml、2.5ml,分别置25ml量瓶中,均加无水乙醇使成2.5ml,各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在60~65℃水浴中保温10分钟,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5分钟,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,放置15:分钟,以第一份为空白,照分光光度法在520nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。
测定法:取本品粗粉约109,精密称定,置具塞锥形瓶中,加乙醚50ml
与氨试液4ml,密塞,摇匀,放置过夜,滤过,药渣加乙醚50ml,连续振摇1小时,滤过,药渣再用乙醚洗涤3~4次,每次15ml,滤过,洗液与滤液合并,低温蒸干。残渣加氯仿2ml使溶解,转入分液漏斗中,用氯仿3ml分次洗涤容器,洗液。并入分液漏斗中,用0.05mo1/L硫酸溶液提取3次,每次5ml,酸液依次用同一氯仿lOml振摇洗涤,合并。酸液,加氨试液调节pH值至9,再用氯仿提取3次,每次loml,氯仿液依次用同一水20ml振摇洗涤,合并氯仿液,低温蒸干,残渣加无水乙醇适量使溶解,转入5ml量瓶中,用无水乙醇分次洗涤容器,洗涤液并入量瓶中,再加无水乙醇至刻度,摇匀。精密量取上述溶液及无水乙醇空白溶液各2.5rrd,分别置25ml量瓶中,照标准曲线绘制各项下的方法,自\各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml\起,依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中酯型生物碱的重量(,ug),计算,即得。《中华人民共和国药典)eo00年版(一部)规定制川乌含酯型生物碱以乌头碱(C34H47N011)计,不得过0.15%。
②酯型生物碱的含量测定:取本品中粉109,精密称定,照上述酯型生物碱测定法项下的方法,自\加乙醚50\起至\洗液与滤液合并,低温蒸干\,用乙醚一氯仿(3:1)的混合液代替乙醚。残渣加混合液5ml使溶解并蒸干,再加乙醇5ml使溶解,精密加入硫酸滴定液(0.01mo1/L)15ml、水15ml与甲基红指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.01mo1/L)滴定至黄色。每lml硫酸滴定波(0.01mo1/L)相当于12.9mg的乌头碱(c34H47N011)o
(4)生物总碱的含量测定(滴定法):
①酸碱滴定法:取药材细粉约59,置125ml具塞烧瓶或分液漏斗中,加乙醚50,振摇后,加10%氨试液2.5ml,振摇10分钟,放置4小时,加水2ml,剧烈振摇10分钟,放出乙醚液,过滤入25\三角瓶中,残渣再用乙醚振摇至少提取6次,每次15ml,每次滤液过滤入三角瓶。蒸去乙醚后,残渣再加入乙醚5ml,再蒸干,加入中性醇(对甲基红指示液呈中性)5ml,微热使其溶解后,加入新煮沸放冷的水30ml与甲基红指示液4滴,用0.02mo1/L盐酸溶液滴定。每毫升0.02mo1/L盐酸溶液相当于12.914mg的乌头碱。本品所含总生物碱以乌头碱(c34H47N01l)计。
②非水滴定法:取粉末用氨水碱化后,在沙氏提取器中用乙醚提取,醚液用0.1mo1/L硫酸溶液提取,酸液经碱化后用氯仿提取,氯仿提取液用无水硫酸钠干燥后,蒸去氯仿,用乙醚溶解,再蒸去乙醚,残渣溶于醋酐中,用0.Ohno1/L高氯酸标准溶液滴定,以甲紫为指示剂,所得总生物碱以乌头碱计算。 (二)药理作用与临床应用 1.药理作用
(1)对心血管系统的作用:
①强心作用:熟附片煎剂对离体心脏、在体心脏及戊巴比妥钠所致的衰竭心脏均有明显的强心作用,剂量加大可现心律不齐。生附子因含有大量乌头碱,对心脏呈现明显毒性。经久煎煮后,乌头碱水解为乌头原碱,毒性大减,而强一已成分经煎煮却依然存在。从附子提得的