2.4注意
①在整个柱操作过程中，要严格防止液面低于交换
剂的表面。当液面低于交换剂表面时，空气进入交换剂内，形成气泡，而影响分离效果。
②加样不可太快，以免搅浑交换剂的表面，而使分离不纯。
③恒流泵的流速要控制好，要速度有利于液体滴下来，同时防止液体下滴过快而引起干柱。
3．实验3. 蔗糖酶活力的测定
3.1材料与方法 3.1.1试剂
①3,5-二硝基水杨酸
（1）甲液：溶解6.9g结晶酚于15.0ml10%氢氧化钠溶液中并用水稀释至69ml，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。
（2）乙液：称取255g酒石酸钾钠加到330ml10%
氢氧化钠溶液中，再加入880ml1%3,5-二硝基水杨酸溶液。
将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中
备用，在室温放置7~10天后使用。
②葡萄糖标准溶液（0.2mg/ml） 准确称取20mg分析纯葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量移入100ml的容量瓶中，定容。5%蔗糖、；
③0.2mol/L pH4.6醋酸缓冲液 溶解10.83g醋酸钠于水中，加近260ml的1 mol/L醋酸调pH到4.6，稀释至2L；
④ ⑤
5%蔗糖 用0.2mol/L pH4.6醋酸缓冲液配置； 2mol/L NaOH 溶解0.80g氢氧化钠于10ml水中。
3.1.2器材 ①电炉；
②恒温水浴; ③紫外分光光度计； ④试管、吸管；
3.1.3操作方法
1．葡萄糖标准曲线的制作
取6支试管，分别按表3-1加入各种试剂。将各管内液
体混合均匀，在沸水浴加热5min。取出后立即用冷水冷却到室温，于540nm波长处测OD值，以葡萄糖的毫克数为横坐标，OD值为纵坐标，画出标准曲线。
表3-1 葡萄糖标准曲线的制作
试管号
0
1
2
3
4
5
葡萄糖 蒸馏水 DNS 总体积 OD
0.0 3.0 1.5 4.5 0.000
0.6 2.4 1.5 4.5
0.8 2.2 1.5 4.5
1.0 2.0 1.5 4.5
1.2 1.8 1.5 4.5
1.4 1.6 1.5 4.5
0.083 0.234 0.395 0.579 0.745
2．酶活力测定
①将前个实验所得四部分提取液用冷蒸馏水按比例稀释：初提取液A（1：200）；热提取液B(1:200)；乙醇提取液C（1：200）；柱分离液D（1：20）。
②取8支试管，按表3-2加入各种试剂。
表3-2 酶的催化反应
项目 A（1：200） B(1:200) C（1：200） D（1：20） 加样 A对 A样 B对 B样 C对 C样 D对 D样 酶液/ml 2N NaOH 5%蔗糖
立即摇匀，准确计时，反应3min
2 35℃预热10min，同时预热5%蔗糖 2 2 2 2 2 2 2 0.5 — 0.5 — 0.5 — 0.5 — 2 2 2 2 2 2 2 2 2N NaOH 总体积/ml — 0.5 — 0.5 — 0.5 — 0.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 ③取反应液A 0.15ml，B 0.15ml，C 0.25ml，D 0.3ml进行DNS反应，测定540nm处OD值。
得到ODA=0.216 ODB=0.324 ODC=0.528 ODD=0.576 3.2结果与分析 3.2.1结果
①绘制葡萄糖标准曲线
表3-3实验数据整理
项目 A B C D
葡萄糖标准曲线图
总活力单位数=mg/V测·4.5/2·V总·n
酶的回收率=（各提取液的总酶活/初提取液A的总
酶活）·100%
将数据整理如表3-3所示