V/ml OD540 质量/mg V总/ml 酶稀释倍数n
0.15 0.216 0.771 12.5 200
0.25 0.324 0.990 14.5 200
0.25 0.528 1.145 9.6 200
0.3 0.576 0.202 103.6 20
项目 初提液A 热提取
液B
乙醇提取液C 19786
柱分离液D
总活力单位数/U 回收率/%
3.2.2分析
28913 25839 8951
100 89 68 31
葡萄糖标准曲线的绘制是关键。在测OD值时，电子示数不稳定，可能是由于溶液内部的物质分布不均匀。结果造成数据的R2较小。由图像可知，第一个数据偏大，第二个偏小，第三个偏小，第四个略微偏大。可能是因为反应的时候为摇匀所致。
热提取液B的回收率小于乙醇提取液C的回收率，这是可能是因为在初提纯过程中，平衡时加入了过多的平衡液。
3.3结论
得到葡萄糖标准曲线，
通过DNS法，测定了初提液A、热提取液B、乙醇沉淀提取液C、柱分离液D中的总活力单位数 3.4注意
①做葡萄糖标准曲线时，加完各种试剂后要充分摇
匀。要求测得的OD值在0.1~0.7
②测定酶活力时，要准确反应3min
③测得在线性范围外的OD值，需重新配液显色反应。
4． 实验4. 蔗糖酶蛋白质含量测定及比活力计算 4.1材料与方法 4.1.1试剂
①试剂A（碱性铜试剂） 取Na2CO3（AR）10g和 NaOH（AR）2g，加蒸馏水30ml，微热溶解：另取酒石酸钠 （Na2C2H3O3?2H2O，AR）0.1g和CuSO4?5H2O（AR）0.05g，再加入30ml蒸馏水微热溶解，冷却后将上述两溶液混合，再用水稀释至100ml，即为试剂A。该试剂为含10% Na2CO3，0.1%酒石酸钠和0.05%硫酸铜的0.5mol/L NaOH溶液。保存于塑料试剂瓶中，24℃至少可使用1个月。溶解于500毫升蒸馏水中。；
②试剂B（酚试剂） 在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4?2H2O）,25克钼酸钠（Na2MoO4?2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫 酸 锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准NaOH滴定，酚酞作指示剂，然后适当稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1mol/L左右。
③标准浓度牛血清白蛋白溶液（200μg/ml） 精确称取结晶牛血清蛋白或酪蛋白，必要时预先经微量凯氏定氮法测蛋白质含量，根据其纯度精确称重配成。牛血清白蛋白溶于水若混浊，可改用0.9%NaCl溶液。；
4.1.2器材
①分光光度计（使用直径为10nm的比色皿）；
②刻度吸管0.5ml（×1），2ml（×1），5ml（×1）; ③试管1.5 cm×15cm（×8）； ④具塞试管10 ml（×3）；
⑥
恒温水浴箱（55℃）；
4.1.3操作方法
1．标准曲线的制作
取6支试管，编号0~5分别按表4-1加入各种试剂。
将各管内液体混合均匀，在55℃水浴加热5min。取出后立即用冷水冷却到室温，
于660nm波长处测OD值，空白0号位对照。以牛血清白蛋白微克数为横坐标，OD660值为纵坐标，画出标准曲线。
表4-1 标准曲线的配置加样表
管号 BSA 水 试剂A 试剂B 试剂B
0.2 0.3 0 0 4.5 1.0
1 0.2 4.3 1.0
2 0.4 4.1 1.0
3 0.6 3.9 1.0
4 0.8 3.7 1.0
5 1.0 3.5 1.0
静置10min（立即充分混匀） 0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
静置10min（立即充分混匀） 0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
混匀55℃水域5min,测A660
OD600 0.000 0.096 0.234 0.376 0.518 0.661
2.未知蛋白浓度的测定
按A（1：100）、B（1：100）、C（1：20）、D（不稀释）进行稀释，A稀释液去0.4ml，B、C、D稀释液各取5ml测定OD660(所得数据如上表所示)。
【注意】Folin-酚B试剂在酸性条件下稳定，而
Folin-酚A试剂在碱性条件下与蛋白质作用生成碱性的铜-蛋白质溶液。当Folin-酚B试剂加入后，应迅速摇匀（加一管，摇一管），使还原反应产生在试剂被破坏之前。 4.2结果与分析 4.2.1结果
实验结果数据记录表
样品 OD660
A 0.557
B 0.323
C 0.232
D 0.070
蛋白质标准曲线