总蛋白=（mg/0.5）·n·V总 单位：mg 比活力=总活力单位/总蛋白 单位：mg
实验数据处理结果汇总表
总体总酶总蛋白/mg 比活力/u/mg 初提取液A 热提取液B 14.5 25839 307 84 71.1 89 1.25 12.5 28913 432 67 100 100 1.00 蛋白回收酶活回收纯化倍数/倍 积/ml 活/u 率/% 率/% 乙醇提取液C 柱分离液D 9.6 19786 306 65 70.8 68 0.97 103.6 8951 7 1279 1.6 31 19.1
4.2.2分析
ABCD的总活力单位数依次减小各组的回收率还是比较理想的。B、C、D的纯化倍数都小于理论值，虽然已经有纯化，但是纯化效果不是很理想。 4.3结论
参见实验数据处理结果汇总表。 4.4注意
①试剂A加完后，立即充分混匀，静置10min。再向各管加B后放置10min，再加第二次。 ② 每次加A、B后应立即迅速充分混合。
5． 实验5. 微量凯氏定氮法测蔗糖酶中总蛋白氮 5.1材料与方法
5.1.1试剂
①蛋白样品：2g牛血清白蛋白溶于0.9%NaCl溶液并稀释至100ml；
②浓硫酸；
③硫酸钾3份与硫酸铜1份（质量分数）混合研磨成粉末；
④30%NaOH溶液:30g氢氧化钠溶于蒸馏水，稀释至100ml；
⑤ 2%硼酸溶液：2 g溶于蒸馏水，稀释至100ml； ⑥ 混合指示剂：0．1％甲基红酒精溶液和 0．1％甲基蓝酒精溶液临时按2:1的比例混合。或0．1％甲基红酒精溶液和 0．1％溴甲酚绿酒精溶液临时按1:5的比例混合
⑦
0.01mol/L HCl标准溶液
5.1.2器材
①改良式凯氏定氮仪；
②克氏烧瓶50ml（×2）; ③移液管；
④锥形瓶50ml（×3）； ⑤吸球、玻棒、滴管、量筒；
5.1.3操作方法 1．消化
凯氏瓶内加入A 0.1ml、B 0.2ml、C 0.25ml和2ml硫酸，半匙催化剂，消化至淡绿色，定容至50ml。
2.洗涤定氮仪
装配好凯式定氮仪，反应室中加少许水（10ml左右）蒸汽发生室内充入适量额水，加热，冷凝管口用指示剂检测，若指示剂变棕色，须将反应室内的水吸去，重新加入水，至指示剂不变色（颜色保持紫红色不变），则洗涤干净。
实际操作时，观察到随着锥形瓶内水量增多，指示剂变棕红色。
第三次洗涤后，指示剂不变色。 3．蒸馏
反应室加入5ml消化液，用少许水洗涤小漏斗，冷凝管插入指示剂，用量筒加10ml30%NaOH至反应室，保留少许NaOH在小漏斗中，再加3ml水，缓缓放入反应室，并保留少量水作液封。开始蒸馏至指示剂变绿，再蒸馏3min，使冷凝管离开指示剂。再蒸1min，少量水冲洗管口。重复3次，每次都必须将凯式定氮仪洗涤干净。
实际操作时，在加反应液后，反应室内液体变成棕黑色，液体反应剧烈。指示剂有红色变成棕色，最后变成绿色。
4．滴定
用0.01N HCl将锥形瓶中的指示剂滴定至淡紫色，
记录消耗HCl的量。
5.2结果与分析 5.2.1结果 次数 HCl消耗量
1 0.52ml
2 0.48ml
3 0.45ml
HCl浓度：0.0102mol/L
样品含氮量=(A-B) ×N=13.7mg/ml 样品含蛋白质量=85.7mg/ml 5.2.2分析
蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量（约在14%-18%，平均约含氮16%），所以，可用蛋白氮的量乘以6.25，就是样品的粗蛋白含量。
本次试验计算所得含氮量为11.82×0.2=2.36mg，属于适用的测定氮量为0.05～3.0mg的范围。
在加入NaOH后，反应室内液体变成棕黑色。是因为CuSO4和过量的NaOH生成铜酸钠，此时会产生氨气。 试样中若含有硝态氮时，首先要使硝态氮还原为铵态氮，可加入水杨酸和硫代硫酸钠，使硝态氮与水杨酸在室