抗氧化玉米肽的制备及其功能与结构关系的研究 - 图文(8)

第四章抗氧化短肽的特性分析０１Ｍ一１．．＾一．＾．．１２６０．．一＾．．．．一３６０．．．．．１００１２０１４０１６０１８０２００２２０２４０２８０３００３２０３４０３８０４００图４．１ＢＦｉ９４－１Ｂ８号组分电喷雾离子化一级质谱图ＥＳＩ－ＭＳｓｐｅｃｔｒｕｍｓｏｆｔｈｅ８ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎＴｈｅ在８号组分的电喷雾离子化ＥＳ＋一级质谱图（图４．１Ｂ）中ｍ／ｚ＝２５３．１的峰丰度最强，在ｍ／ｚ为２７５．１、２９０．９矛１５０５．０处分别显示出［Ｍ＋Ｎａ】＋、【Ｍ＋Ｋ】＋和［２Ｍ＋Ｈ］＋的峰，对应在电喷雾离子化ＥＳ．一级质谱图中ｍ／ｚ＝２５０．９的峰丰度很强为［Ｍ．Ｈ】‘。。利用电喷雾质谱解析软件（Ｍａｓｓｌ），ＩａｘＩ作站ｑｂＢｉｏｌｙｎｘ软件）分析，所得８号样品氨基酸序列为ＡＹ，其匹配度为１００％，在ＳＷＩＳＳ．ＰＲＯＴ玉米蛋白数据库中存在着多处Ａｌａ．Ｔｙｒ片段。２００２２０２４０２６０２８０３００３２０３４０３６０３８０４００图４－１ＣＦｉ９４－１Ｃ‘Ｔｈｅ８号组分电喷雾一级质谱总离子流色谱图ｔｏｔａｌｉｏｎｓＥＳＩ－ＭＳｃｕｒｒｅｎｔ（ＴＩＣ）ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆｔｈｅ８ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎ电喷雾一级质谱总离子流色谱图（图４．１Ｃ）为８号的紫外全波长扫描图，从图中可以看出除在２２３．６ｎｍ和２７４．６ｎｍ都有吸收峰，说明玉米肽中含有芳香族氨基酸Ｔｙｒ。在Ａｌａ．聊中耻有紫外吸收，含有酚羟基，在Ａｌａ的影响下易失去电子成为氢供体，具有ＡＢＴＳ自由基强烈清除能力，在１０ｍｇ／Ｌ时清除率为３１．２％，比同浓度抗坏血酸清除率（２６．６％）高。江南大学硕士学位论文（２）１７号组分经Ｌｃ／ＥｓＩ．Ｍｓ分析和Ｂｉｏｌｙｎｘ软件处理，结果如图４－２所示。玉米蛋白默１０００洗脱液１７号０８０４１４．１０７．５３４：ＤｉｏｄｅＡｒｒａｙ２７６０．５３ｊ＼／二２：ＳｃａｎＥＳ－１０．００１２．（３０１４．００１：ＳｃａｎＥＳ＋０８０４１４－１０１２伪４．００∞０４１４．１０１６．∞＼８．∞■享，２ＪＤ０４．００６．∞＼８．∞１０．００１２．００１４．００图４—２Ａ１７号组分解析图谱Ｆｉ９４－２ＡＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｔｈｅ１７ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎ如图４—２Ａ所示，７．５３ｍｉｎ洗脱峰在ＥＳ＋图谱中时ｍ／ｚ＝５０３．６，在ＥＳ．图谱中ｍ／ｚ＝５０１．５，响应值都很高且单一。０８０４１４－１０７０（７６５７）２帖．８２：ＳｃａｎＥＳ－３．６４ｅ４５们．５．离５８７．４∞５．７Ｏ盼¨＂Ｉ艘，－８＼６４６６７．２；１２４Ｉ／６８１．４８１６５８耳?０１０００３０８０４１４－１０７０（７．６１６）１：ＳｃａｎＥＳ＋２３Ｉ．９２ｃ；?。■２５８．８５０３．６Ｌ｜。．【止１．乎１９罗？Ｐ一斜，．．Ｐ‘７５７ｆ。翟量哪。２９８．９．唧一，呼：图４．２Ｂ１７号组分电喷雾离子化一级质谱图Ｆｉ９４?－２ＢＴｈｅＥＳＩ??ＭＳｓｐｅｃｔｒｕｍｓｏｆｔｈｅ１７ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎ在１７号组分电喷雾离子化ＥＳ＋一级质谱图（图４．２Ｂ）中ｒｎ／ｚ＝５０３．６的峰丰度很强为【Ｍ＋Ｈ】＋，对应在电喷雾离子化Ｅｓ．一级质谱图中ｍ忙５０１．５的峰丰度很强为［Ｍ－ＨＩ’。３２第四章抗氧化短肽的特性分析利用电喷雾质谱解析软件（ＭａｓｓｌｙｎｘＩ作站＠Ｂｉｏｌｙｎｘ软件）分析，所得１７号样品氨基酸序列为Ｌｅｕ．Ｍｅｔ．Ｃｙｓ．Ｈｉｓ，匹配度为１００％。在ＳＷＩＳＳ—ＰＲＯＴ玉米蛋白数据库中存在ＨＣＭＬ片段，其中Ｈｉｓ和Ｌｅｕ对该肽的抗氧化有重要意义。（３）１８号组分经ＬＣ／ＥＳＩ．ＭＳ分析和Ｂｉｏｌｙｎｘ软件处理，结果如图４．３所示。玉米蛋白肽１０００洗脱液１８号０８０４１４．１６１１８：１２：５４２：ＳｃａｎＥＳ－３１８．７．９７ｅ４ｔ２．０００８０４１４．１６４．００６．００８．００１０．００１２．ｏｏ１４．ｏｏ１６．００悒００１：ＳｃａｎＥＳ＋３２０９５．６８ｅ４■冰２．０００８０４１４．１６４．００６．００８．００１０．００１２．００１４．００１６．００１８．００４：ＤｉｏｄｅＡｒｒａｙ１．０ｅ－３《２．００４．００６．００８．００１０．００１２．００１４．００１６．００１８．００图４．３Ａ１８号组分解析图谱Ｆｉ９４－３ＡＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｔｈｅ１８ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎ如图４．３Ａ所示，７．９１ｍｉｎ洗脱峰在ＥＳ＋图谱中时ｍ／ｚ＝３２０．９，在ＥＳ．图谱中ｍ／ｚ＝３１９．７，响应值都很高且单一。１６４８２∞．８，警?Ｉｒｌ酷一２∞刮尹‘３笋乱９３５０．６ｚ繁一．．．．Ｉ．。琊?图４－３Ｂ１８号组分电喷雾离子化一级质谱图３３江南大学硕士学位论文Ｆｉ９４。。３ＢＴｈｅＥＳＩ－－ＭＳｓｐｅｃｔｒｕｍｓｏｆｔｈｅ１８ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎ在１８号组分电喷雾离子化ＥＳ＋一级质谱图（图４．３Ｂ）中ｍ／ｚ＝３２０．９的峰丰度为【Ｍ＋Ｈ】＋，对应在电喷雾离子化Ｅｓ．一级质谱图中ｍ／ｚ＝３１８．７的峰丰度很强为［Ｍ．Ｈ］一。１８号多肽纯度高，但是测出的质量偏大，存在两种可能性，利用电喷雾质谱解析软件（ＭａｓｓｌｙｎｘＩ作站中Ｂｉｏｌｙｎｘ软件）分析，所得１８号样品氨基酸序列第一种可能性为ＣＱＡ，匹配度很为１００％，第二种可能性为ＥＤＧ或ＥＡＴ，匹配度都为１００％。在ＳＷＩＳＳ—ＰＲＯＴ玉米蛋白数据库中存在Ｃｙｓ．Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｇｌｕ．Ａｓｐ。Ｇｌｙ或Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｔｈｒ片段，其中Ａｌａ和Ｇｌｕ对该肽的抗氧化有重要意义。（４）２０号组分经ＬＣ／ＥＳＩ．ＭＳ分析和Ｂｉｏｌｙｎｘ软件处理，结果如图４．４所示。玉米蛋白肽１０００洗脱液２０号０８０４１４－１１１６：０５：４６２：ＳｃａｎＥＳ．５５６．４１．５０ｅ４４．０００８０４１４－１１１６．００８．００１０．００１２．００５５８５．７３ｅ３术４．０００８０４１４．１１６．００８．００９．１０１０．００１２．００４：ＤｉｏｄｅＡｒｒａｙ２８０１４ｅ－２１．Ｏｅ?三０．４．００６．００８．００１０．００Ｔｉｍｅ１２．００图４．４Ａ２０号组分分析图谱Ｆｉ９４—４ＡＴｈｅａｎａｌｙｓｂＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｔｈｅ２０ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎ如图４—４Ａ所示，９．１０ｍｉｎ洗脱峰在ＥＳ＋图谱中时ｍ／ｚ＝５５５８．５，在ＥＳ．图谱中ｍ／ｚ＝５５６．４，响应值都很高且单一。第四章抗氧化短肽的特性分析．２４４．２，５７饿栉ｍ≤妒，．３，ｆ一。。茹２咖二ｂ盯５唧咿，多１５０２００２５０３００３５０４００４５０５００５５０６００图４．４Ｂ２０号组分电喷雾离子化一级质谱图Ｆｉ９４－４ＢＴｈｅＥＳＩ－ＭＳｓｐｅｃｔｒｕｍｓｏｆｔｈｅ２０ｔｈｆｒａｃｔｉｏｎ在２０号组分电喷雾离子化ＥＳ＋一级质谱图（图４．４Ｂ）中ｍ／ｚ＝５５８．６和ｒｎ／ｚ＝５８０．５的峰丰度为［Ｍ＋Ｈ】＋和［Ｍ＋Ｎａ】＋，同时对应在电喷雾离子化Ｅｓ一一级质谱图中ｒｎ／ｚ＝５５６．４的峰很强为［Ｍ．Ｈ】一。２０号组分利用电喷雾质谱解析软件（ＭａｓｓｌｙｎｘＩ作站ｑｂＢｉｏｌｙｎｘ软件）分析，所得三种可能性片段：ＬＮＱＬＡ、ＬＮＬＱＡ和ＮＬＬＱＡ，匹配度分别为８６％、７７％和７６％，在ＳＷＩＳＳ．ＰＲＯＴＳＫ，米蛋白数据库中都能搜索到，用ＷａｔｅｒｓＰｌａｔｆｏｒｍＺＭＤ４０００质谱仪分析无法作出准确判断２０号组分具体的氨基酸序列。（５）２１号、２２号组分经ＬＣ／ＥＳＩ．ＭＳ分析和Ｂｉｏｌｙｎｘ软件处理，结果分别如图４．５和图４—６所示。玉ｊＩｌ蛋白１１１０００最Ｅ掀１号０８０４１４１２１６：３１：２３４．ＤｉｏｄｅＡｒｒｏｗ４００６．∞８＿００玉囊噩白－Ｈ０１３０戋暖甍冱孽１０加１２∞图４．５Ａ２１号组分和２２号组分色谱图Ｆｉ９４．５ＡＴｈｅＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｔｈｅ２１ｓｔａｎｄｔｈｅ２２ｎｄｐｅｐｔｉｄｅｓ３５、