葛根提取物技术要求编制说明
为贯彻落实《食品安全法》对保健食品实行严格监管的要求，严格保健食品原料管理，加强保健食品原料的安全监管，提高保健食品准入门槛，做好保健食品许可工作，国家食品药品监督管理局开展了保健食品原料标准的研究工作。按国家食品药品监督管理局食品许可司的要求，我院承担了保健食品原料-葛根提取物技术要求的研究工作。现将编制情况说明如下：
一、编制情况简介
1、通过检索、查阅相关文献资料，收集了全国已有的生产样品，参照已收集的企业生产工艺、制法，经试验确定产品制法并自制部分样品。主要从以下几方面制定产品的技术要求：1 真伪方面。 感官与鉴别。从感官、薄层、特征图谱及所含功效成分等方面鉴别产品的真伪；2 安全方面。按《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求（国家药典委员会）中的规定，注重中药安全性检测方法和指标的建立和完善，加强对重金属及有害元素、残留农药、残留溶剂、残留二氧化硫、微生物、真菌毒素等外源污染物的检测。3 产品质量方面。参考《中国药典》2010年版及相关文献资料，根据产品的实际功效，选定相应的功效成分控制产品的质量。4 根据稳定性研究结果提供产品的贮藏条件。于2010年7月完成了保健食品葛根提取物原料技术要求的试验研究工作。
2、组织有关专家进行评审
2010年7月份，组织相关专家召开了专家论证会。对保健食品葛根提取物原料技术要求进行了论证并提出了修改意见。
3、委托三家检测单位进行了技术复核
2010年9月份，国家食品药品监督管理局食品许可司召开了保健食品原料技术要求制订汇报工作会议。会上对保健食品葛根提取物原料技术要求提出了有关要求。按要求于9月下旬，委托陕西省食品药品检验所，湖北省疾病控制中心及武汉市食品药品检验所三家单位进行了复核。三家检测单位复核结果基本一致，均认为所订葛根提取物原料技术要求整体可行、重现性好。
4、国家食品药品监督管理局食品许可司组织专家进行了技术审评 2010年11月份和2011年1月，国家食品药品监督管理局食品许可司先后
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两次在北京召开了《保健食品原料葛根提取物质量标准（征求意见稿）》等专家论证会。专家审核认为所建立的技术要求可行，能够有效控制葛根提取物原料的质量。
二、编制说明
名称：按《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求（国家药典委员会）中的规定，本提取物为粗提物，粗提物命名以药材名加提取溶剂加“提取物”构成，提取溶剂为水时可省略为药材名加“提取物”构成。因此本品命名为“葛根提取物”。
制法：参考文献【1、3、4、5、6】，取葛根，粉碎成粗粉，分别以水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇为提取溶剂，均加热回流提取两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加8倍量，滤过，合并滤液，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.10～1.20（室温）的清膏，放冷，每种提取物分别加乙醇使含醇量为60%、70%、80%，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得葛根提取物，计算收率，同时测葛根素及其他异黄酮的含量。结果见表1
表1 不同提取工艺的结果比较表
沉淀用乙提取溶剂 醇浓度 60%乙醇 水 70%乙醇 80%乙醇 60%乙醇 30%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 60%乙醇 50%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 80%乙醇 提取收率（%） 25.80 25.70 25.20 32.60 32.50 25.50 31.20 29.00 25.10 33.77 葛根素含量（%） 8.10 9.64 9.99 11.05 11.71 12.28 9.89 11.46 12.98 11.94 其他异黄酮含量 大豆苷（%） 2.78 3.34 3.47 3.83 4.05 4.35 3.27 3.76 4.31 3.67 染料木苷（%） 0.15 0.18 0.18 0.21 0.23 0.24 0.19 0.22 0.25 0.20 大豆素（%） 0.14 0.16 0.16 0.15 0.15 0.17 0.14 0.16 0.18 0.16 染料木素（%） 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 总量（%） 3.074 3.684 3.814 4.194 4.434 4.764 3.604 4.144 4.744 4.034 结果表明：综合考虑提取收率和各提取物中葛根素、其他异黄酮的含量，确定葛根提取物的提取工艺即制法为：取葛根，粉碎成粗粉，加30%乙醇加热回流
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提取两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加8倍量，滤过，合并滤液，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.10～1.20（室温）的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为 70%，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得。
感官：根据样品的实际外观、性状制定。
鉴别：《中国药典》2010年版收载野葛，其鉴别有显微鉴别和薄层鉴别。因本品为提取物，依据产品的实际情况，只制定薄层鉴别。并对展开剂、薄层板、溶液浓度及点样量进行了实验研究：
1、薄层鉴别方法：
A、对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
B、对照药材溶液的制备：取葛根对照药材0.8g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。
C、供试品溶液的制备：取本品0.1g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。
2、展开剂的选择：
A、三氯甲烷：甲醇：水=7：2.5：0.25；见图1
图1
B、甲苯：甲醇：水=7：4：0.1；见图2
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图2
C、 三氯甲烷：甲醇=4：1；见图3
拖尾、扩散
图3
主斑点Rf值＜0.3，扩散
结果表明：展开剂A的展开效果最好，故展开剂A为实验选定展开剂。 3、薄层板的选择：供试液为不同产地的葛根药材 A、自铺板 结果见图4
图4
B、硅胶G板(青岛海洋化工厂) 结果见图5
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图5
C、硅胶G板(烟台市化学工业研究所） 结果见图6
图6
结果表明：自制板和青岛海洋化工生产的硅胶G板均可。
4、葛根素最低检出限的测定：取浓度为20ug/ml的葛根素对照品溶液，分别点样0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3μL，葛根素最低检出限为4ng。见图7
1、点样量3μl 2、点样量2μl 3、点样量1μl 4、点样量0.5μl 5、点样量0.4μl 6、点样量0.3μl 7、点样量0.2μl
1 2 3 4 5 6 7 8 图7
5、葛根原药材的薄层鉴别结果 见图8
8、点样量0.1μl
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