表11 样品特征图谱测定结果
相对保留时间 生产厂家 厂家A 厂家B 厂家B 厂家C 厂家C 厂家D 自制（广西药材） 自制（四川药材） 自制（安徽药材） 自制（四川药材） 自制（河南药材） 自制（广西药材） 自制（安徽药材） 厂家E 厂家E 厂家E 葛根原药材 葛根原药材 葛根原药材 葛根原药材（厂家B） 葛根原药材（厂家A） 葛根原药材（厂家C） 葛根原药材（厂家D） 葛根原药材（自购-神农） 葛根原药材（自购-金贵） 对照药材(中检所) 批号 峰1 A-2 B-1 B-2 C-1 C-4 D-1 20100503 20100504 20100506 20100601-2 20100601-3 20100601-1 20100601-4 0901 0902 0903 广西 四川 安徽 121175-200302 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 21
峰2 1.06 1.06 1.07 1.06 1.06 1.06 1.05 1.06 1.06 1.06 1.06 1.05 1.06 1.07 1.07 1.07 1.05 1.07 1.06 1.06 1.07 1.06 1.06 1.06 1.05 1.07 峰3 1.35 1.35 1.36 1.35 1.35 1.35 1.35 1.34 1.35 1.35 1.35 1.35 1.35 1.35 1.35 1.35 1.35 1.36 1.35 1.35 1.36 1.35 1.35 1.35 1.35 1.35 峰4 1.99 1.98 1.99 1.99 1.98 1.99 1.99 1.98 1.98 1.99 1.99 1.99 1.99 1.98 1.99 1.99 1.99 2.00 1.98 1.99 2.00 1.99 1.99 1.99 1.99 1.99 峰5 3.20 3.20 3.20 3.21 3.20 3.20 3.20 3.18 3.19 3.21 3.21 3.21 3.21 3.21 3.21 3.21 3.21 3.22 3.20 3.21 3.22 3.20 3.21 3.21 3.21 3.20
含量测定 葛根中含有多种有效成分，主要为异黄酮，因此为了有效控制产品质量，制定此项。并以葛根素、其它异黄酮（大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素）的含量作为质量控制指标。
1、仪器与试剂、色谱条件同特征图谱项 2、溶液的制备
2.1 对照品混合溶液的制备 取葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素对照品各适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含葛根素1mg、大豆苷0.2mg、染料木苷0.1mg、大豆素0.1mg和染料木素0.1mg的混合溶液，摇匀，即得对照品混合溶液。
2.2 供试品溶液的制备 取本品约60mg，精密称定，置25ml量瓶中，加60%乙醇适量，超声处理30分钟，放冷至室温，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3、测定法
3.1标准曲线的制备 分别精密量取对照品混合溶液0.05、0.1、0.5、2.0、5.0ml,置10ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，得对照品系列溶液。分别精密吸取对照品系列溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
3.2 测定 精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按标准曲线法以峰面积计算，即得。
4、测定方法的确立
4.1 流动相的选择及检测波长的确定同特征图谱项。
4.2 专属性试验 取空白溶剂、对照品溶液、与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下分别进行测定，记录色谱图。结果表明：样品溶剂不干扰测定。
4.3 溶剂的选择 取本品适量，共4份，精密称定，分别置25ml量瓶中，分别加30%、50%、60%、70%乙醇适量，超声提取30min，取出，放冷至室温，分别加30%、50%、60%、70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl进样，以峰面积与取样量的比值计算比较。结果表明用60%乙醇作溶剂适合。见表12
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表12 溶剂的选择结果表
峰面积/取样量 提取溶剂 葛根素 30%乙醇 50%乙醇 60%乙醇 70%乙醇 297.6 312.8 310.8 299.4 大豆苷 46.7 51.6 53.1 52.9 染料木苷 6.5 7.3 7.5 7.5 大豆素 16.6 20.0 20.9 21.0 染料木素 1.0 1.3 1.4 1.5 4.4 最低检出限试验：取均约0.1mg/ml 的对照溶液经逐步稀释，进样10μl，记录色谱图，信噪比大于3为最低检出限，测得结果如下：葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素均为0.01μg/ml，即葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素均为0.1ng。
4.5 超声提取时间的确定 取本品适量，共4份，精密称定，分别置25ml量瓶中，加60%乙醇适量，分别超声提取10min、20min、30min、40min，取出，放冷至室温，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl进样，以峰面积与取样量的比值计算比较。结果表明超声30min即可，见表13。
表13 超声提取时间试验结果表
超声提取时间（min） 10 20 30 40 峰面积/取样量 葛根素 500.0 541.0 547.8 530.8 大豆苷 80.4 81.1 81.1 82.0 染料木苷 12.2 12.3 12.3 12.4 大豆素 33.5 34.0 33.7 34.3 染料木素 2.4 2.4 2.4 2.4 4.6 线性关系考察 精密称取葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素对照品各约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取对照品储备液1.0ml，置100ml 量瓶中，用60%乙醇稀
1。11、释至刻度，摇匀，得对照品溶液○分别精密量取对照品溶液○2.5、5、25ml，
置50ml 量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，同时精密量取对照品储备液0.5、5ml，置10ml 量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液系列，浓度分别为0.2、0.5、1、5、10、50、500ug/ml，分别精密量取10μl进样。在上述
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色谱条件下进行测定，记录峰面积，以对照品溶液浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明：葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素在浓度为0.2～500 μg/ml范围内，线性关系均良好。见表14。 表14 线性关系考察试验结果
组分 对照品浓度（μg/ml） 0.204 0.510 1.021 葛根素 5.104 10.208 51.040 510.400 0.201 0.503 1.006 大豆苷 5.030 10.060 50.300 503.000 0.233 0.582 1.164 染料木苷 5.818 11.636 58.180 581.800 0.201 0.502 1.005 大豆素 5.024 10.048 50.240 502.400 0.195 0.488 0.975 染料木素 4.876 9.752 48.760 487.600 峰面积 0.114 0.305 0.627 2.769 4.774 27.284 310.892 0.116 0.310 0.639 3.169 5.701 31.378 359.146 0.188 0.511 1.049 5.298 10.470 52.063 495.608 0.177 0.476 1.032 5.025 9.985 49.563 431.735 0.241 0.655 1.410 7.111 14.168 71.081 663.344 r=0.9999 Y=1.3592X+0.9806 r=0.9999 Y=0.8576X+1.3806 r=0.9999 Y=0.8512X+0.5529 r=0.9999 Y=0.7154X-1.0561 r=0.9999 Y=0.6103X-0.8967 线性关系 24
4.7 进样精密度试验 取同一对照品溶液连续进样6次，每次进样10μl，记录峰面积，结果表明：此方法的进样精密度良好。见表15
表15 进样精密度试验结果
进样 次数 峰 组分 面积 葛根素 大豆苷 染料木苷 大豆素 染料木素 1 63.596 56.289 14.478 21.051 24.170 2 63.582 56.551 14.500 21.029 24.133 3 63.713 56.264 14.502 21.023 24.203 4 63.754 56.353 14.474 20.992 24.103 5 63.395 56.337 14.478 21.038 24.105 6 63.889 56.372 14.489 20.960 24.119 平均 63.655 56.361 14.487 21.016 24.139 RSD(%) 0.27 0.18 0.08 0.16 0.16
4.8 回收率试验 分别精密称取葛根素对照品24.96mg、大豆苷对照品12.89mg、染料木苷对照品6.32mg、大豆素对照品5.92mg和染料木素对照品6.90mg，置25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。
精密称取本品(自制-安徽，批号：20100506)约25mg，共6份，分别置6个25ml量瓶中，均精密加入对照品储备液2.0ml，再加60%乙醇适量，照“2.2”项方法制备供试品溶液，照“3”项方法测定，按标准曲线法以峰面积计算回收率。结果见表16。
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