－－－－－－－－－－－ ３６±１℃ ↓１８～２４小时 －－－－－－－－－－－－－－ ｜ 四硫磺酸盐增菌液 ｜ －－－－－－－－－－－－－－ ３６±１℃ ↓２４±２小时
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ｜ ＤＨＬ琼脂平板 ＥＭＢ琼脂平板 ｜ ｜ （或ＳＳ琼脂平板） （或麦康凯琼脂平板）｜ －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ３６±１℃ ↓２４±２小时 －－－－－－－－－－－ ｜ ＴＳＩ琼脂斜面 ｜ －－－－－－－－－－－ ３６±１℃ ↓２４±２小时
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ↓ ↓ ｜ ｜ －－－ －－－ －－－－－－－－－－－－－－－－ ｜ ｜革｜ ｜半｜ ↓ ↓ ↓ ｜兰｜ ｜固｜ －－－ －－－ －－－ －－－ －－－ ｜氏｜ ｜体｜ ｜靛｜ ｜尿｜ ｜赖｜ ｜氰｜ ｜血｜ ｜染｜ ｜肉｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜氨｜ ｜ ｜ ｜清｜ ｜色｜ ｜汤｜ ｜基｜ ｜素｜ ｜酸｜ ｜化｜ ｜学｜ ｜镜｜ ｜琼｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜脱｜ ｜ ｜ ｜试｜ ｜检｜ ｜脂｜ ｜质｜ ｜酶｜ ｜羧｜ ｜钾｜ ｜验｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜酶｜ ｜ ｜ ｜ ｜ －－－ －－－ －－－ －－－ －－－ －－－ －－－ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ↓ －－－－－ ｜报 告｜ －－－－－
３．２ 分离培养 轻微摇动增菌培养液，以接种环沾取１～２环接种于ＤＨＬ（或Ｓ．Ｓ）琼脂平极及ＥＭＢ（或麦康凯）琼脂平板各１个。于３６±１℃培养２４±２小时，检查平板上有无疑似沙门氏菌落。沙门氏菌在上述平板上典型菌落形态见表３。 表３： 沙门氏菌在选择性平板上的菌落特征
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ｜ 培 养 基 ｜ 菌 落 特 征 ｜ ｜－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ＤＨＬ琼脂 ｜无色至浅橙色，半透明，多数菌株菌落中心带黑色或几乎｜ ｜ ｜全黑色 ｜ ｜－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ＳＳ琼脂 ｜无色至浅橙色，半透明或不透明，有的菌株菌落中心带黑｜ ｜ ｜色 ｜ ｜－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ＥＭＢ琼脂 ｜无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润 ｜ ｜－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ 麦康凯琼脂 ｜无色至浅橙色，透明或半透明，有时中心暗色 ｜ －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
由于药物的影响或非典型菌株的存在，沙门氏菌菌落可呈现非典型形态，如色泽变深，菌落粗糙等，应注意挑选。
３．３ 初步筛选试验 以接种针轻轻接触菌落的中心部位，沾取选择性平板的疑似菌落２个或更多个，划线接种于ＴＳＩ琼脂斜面并穿剌底层。置３６±１℃培养２４±２小时观察结果。沙门氏菌在ＴＳＩ琼脂斜面的反应为：斜面呈碱性（红色），底层呈酸性（黄色），硫化氢阳性（底层黑色）或阴性（无黑色）。
沙门氏菌及有关细菌在ＴＳＩ琼脂上的反应见表４。 表４： 沙门氏菌及其它细菌在ＴＳＩ琼脂的反应结果
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ｜序 号｜斜 面｜底 层｜产 气｜硫化氢｜ 可能的菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ １ ｜ － ｜ ＋ ｜＋／－｜ ＋ ｜沙门氏菌属、变形杆菌属、柠檬酸杆菌｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜属、爱德华氏菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ２ ｜ － ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ － ｜沙门氏菌属、埃希氏菌属、哈夫尼亚菌｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜属、摩根氏菌属、普罗菲登斯菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜沙门氏菌属、志贺氏菌属、埃希氏菌 ｜ ｜ ３ ｜ － ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜属、哈夫尼亚菌属、摩根氏菌属、普罗｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜菲登斯菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ４ ｜ ＋ ｜ ＋ ｜＋／－｜ ＋ ｜亚利桑那菌、柠檬酸杆菌属、变形杆菌｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ５ ｜ ＋ ｜ ＋ ｜＋／－｜ － ｜埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜属、沙雷氏菌属、柠檬酸杆菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ６ ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜ 产碱杆菌、假单胞菌属 ｜ －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ＋酸性或阳性反应；－碱性或阴性反应；＋／－多数阳性少数阴性
上表中反应序号１，２，３的反应结果，应作为沙门氏菌疑似菌株继续鉴定。其它反应结果可不作为沙门氏菌疑似菌株而加以排除。对有疑问的菌株，可补做乳糖、蔗糖发酵及氧化酶试验，沙门氏菌均应为阴性反应。
取疑似菌株的ＴＳＩ琼脂斜面或肉汤琼脂斜面３６±１℃１８～２４小时的培养物，涂片作革兰氏染色，镜检。沙门氏菌应为革氏阴性杆菌。
３．５ 生化反应 取沙门氏菌疑似菌株的ＴＳＩ斜面培养物，作以下试验：
３．５．１ 靛基质试验 用接种环沾取少量培养物，接种至蛋白胨水培养基中，照大肠杆菌检验方法项下操作、判断结果。沙门氏菌应为阴性反应。
３．５．２ 尿素酶试验 用接种环沾取培养物，划线接种于尿素琼脂培养基上。置３６±１℃培养２４小时，观察结果。如斜面变为红色为阳性反应；阴性反应不变色。沙门氏菌应为阴性反应。 ３．５．３ 氰化钾试验 取３６±１℃培养２０～２４小时的疑似菌株肉汤培养液，用接种环沾取１环，接种至氰化钾培养基内，另取一环接种于对照培养基内。接种后即以橡胶塞塞紧，置３６±１℃培养２４～４８小时，观察结果，对照管内有菌生长（混浊），而试验管也有菌生长者为阳性（不受抑制）。经４８小时培养后，对照管有菌生长，而试验管无细菌生长时为阴性（受抑制）。沙门氏菌应为阴性反应。 本试验应十分注意密封管口，夏天分装培养基宜在水浴中进行，以防氰化钾分解。产生氢氰酸逸出，致使氰化钾浓度下降，细菌生长，造成假阳性。
３．５．４ 赖氨酸脱羧酶试验 用接种环沾取少量培养物，接种在赖氨酸脱羧酶培养基中，同时接种对照培养基。置３６±１℃培养２４～４８小时，观察结果。对照管黄色，试验管呈紫色时为阳性反应（赖氨酸脱羧产碱）；黄色为阴性反应。沙门氏菌应为阳性反应。 表５： 沙门氏菌与有关细菌生化反应初步鉴别
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ｜序 号｜硫化氢｜靛基质｜尿素酶｜氰化钾｜赖氨酸｜ 可能的菌属 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜脱羧酶｜ ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ １ ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜ － ｜ ＋ ｜沙门氏菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ２ ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜ ＋ ｜沙门氏菌属（少见） ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜爱德华氏菌属 ｜
｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜ ＋ ｜沙门氏菌属、埃希氏菌属 ｜ ｜ ３ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜甲型副伤寒沙门氏菌 ｜ ｜ ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜埃希氏菌属、志贺氏菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ４ ｜ ＋ ｜ － ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ － ｜柠檬酸杆菌属、奇异变形杆菌｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ５ ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ － ｜普通变形杆菌 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ６ ｜ － ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜ ＋ ｜埃希氏菌属 ｜ ｜ ｜ － ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜ － ｜埃希氏菌属、志贺氏菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ７ ｜ － ｜ － ｜＋／－｜ ＋ ｜ ＋ ｜克雷伯菌族各属 ｜ ｜ ｜ － ｜ － ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ － ｜阴沟肠杆菌、柠檬酸杆菌属 ｜ ｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜ ｜ ８ ｜ － ｜ ＋ ｜＋／－｜ ＋ ｜ － ｜摩根氏菌属、普罗菲登斯菌属｜ －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 注：（１）硫化氢试验以ＴＳＩ培养基结果为准
（２）＋表示阳性；－表示阴性；＋／－表示多数阳性，少数阴性。
上述反应序号１，２，３可能为沙门氏菌，其它５种反应结果可以排除沙门氏菌。
反应序号１为沙门氏菌属典型反应。其中若靛基质反应阳性（反应序号２），应补做甘露醇和山梨醇发酸试验，沙门氏菌皆为阳性反应。若尿素酶、氰化钾及赖氨酸脱羧酶３项试验中有１项异常时，仍应作为沙门氏菌疑似菌株，继续鉴定；若有２项异常，可排除沙门氏菌。
反应序号３者应排除ＴＳＩ斜面产酸的菌株，结合动力试验阳性。作为沙门氏菌疑似菌株继续鉴定。 ３．６ 动力检查 用接种针沾取培养物，穿刺接种半固体肉汤琼脂管，置３６±１℃培养２４小时，观察结果。有动力的细菌能运动到穿刺线外呈四周扩散生长，使培养基呈现混浊蔓延现象；无动力的细菌仅没穿刺线生长，周围培养基清晰。无动力表现的培养物，应在室温保留２～３天后，再观察。沙门氏菌除少数例外，均具有周身鞭毛，能运动。
３．７ 血清学试验 在洁净载玻片近中心区的一端，以接种环沾取沙门氏菌属Ａ～Ｆ“０”多价血清２～３环，再挑取疑似菌株的ＴＳＩ斜面上部的培养物少许，与血清混合（要小心操作，以防外溅，污染四周），将玻片前后侧动，在暗背景下观察结果。如为阳性反应，通常在３分钟内出现凝集现象。有时反应迟缓，需将玻片置培养皿内，并在皿内放湿棉球１个，以防干涸，约过２０分钟，再观察结果。 凡与血清出现凝集者，应以生理盐水与同一菌株培养物作对照试验。对照应无凝集现象方可确定为阳性反应。
当与血清未出现凝集时，应以接种环取上述斜面培养物，置于含少量生理盐水的试管中，制成浓菌悬液，在１００℃水浴中保温３０分钟，待冷，再以此处理后的菌悬液与沙门氏菌属Ａ～Ａ“０”多价血清作凝集试验。如出现凝集，应判为阳性反应；如不出现凝集，则为阴性反应。
４．结果报告及处理 凡疑似菌株培养物①生化试验及血清学试验结果按表６情况报告结果或提出进一步鉴定意见。
注① 疑似菌培养物系指ＴＳＩ琼脂斜面反应序号为１，２，３，的培养物。 表６：
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ｜ ｜ 血清凝集试验 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ （Ａ～Ｆ“０”血清） ｜ ｜ ｜ ｜序｜－－－－－－－－－－－－－－－｜生化反应＊｜ 报告或处理意见 ｜ ｜号｜凝集｜１００℃３０分钟｜生理盐｜ ｜ ｜ ｜ ｜反应｜ 凝集反应 ｜水对照｜ ｜ ｜ ｜－｜－－｜－－－－－－－－｜－－－｜－－－－－｜－－－－－－－－－－｜ ｜１｜＋ ｜ ｜ － ｜ 符合 ｜ 检出沙门氏菌 ｜ ｜２｜－ ｜ ＋ ｜ － ｜ 符合 ｜ 检出沙门氏菌 ｜ ｜３｜－ ｜ － ｜ ｜ 不符合 ｜ 未检出沙门氏菌 ｜ ｜４｜＋ ｜ ｜ － ｜ 不符合 ｜ 进一步鉴定 ｜ ｜５｜－ ｜ ＋ ｜ － ｜ 不符合 ｜ 进一步鉴定 ｜ ｜６｜－ ｜ － ｜ ｜ 符合 ｜ 进一步鉴定 ｜ －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
＊生化反应符合系指生化反应序号１，２（甘露醇及山梨醇均为阳性）及３（乳糖、蔗糖应为阴性，动力应为阳性）的初步鉴别试验结果；不符合系指反应序号４、５、６、７、８的鉴别结果。 绿脓杆菌检验法
绿脓杆菌为假单胞菌属细菌，学名为铜绿色假单胞菌。本菌对人类有致病力，并对许多药物具有天然的耐药性。烧伤、烫伤、眼科疾患和其他外伤，常因绿脓杆菌引起继发感染，是常见的化脓性感染菌，可造成眼角膜溃疡、失明，引起败血症等严重病患。本菌在自然界分布广泛，土壤、空气、水以及人和动物的皮肤、肠道、呼吸道均有存在。故可通过生产的各个环节污染药品。因此，一般眼科用制剂和外用药品，规定不得检出绿脓杆菌。 １．培养基、试剂
１．１ 普通肉汤培养基（附录三１）
１．２ 十六烷三甲基溴化铵琼脂（附录三２２） １．３ 普通肉汤琼脂斜面（附录三２） １．４ ＰＤＰ琼脂斜面（附录２３） １．５ 明胶培养基（附录２４）
１．６ 硝酸盐胨水培养基（附录三２５） １．７ １％盐酸二甲基对苯二胺液（附录二４） １．８ ＨＣＩ（１ｍｏｌ／Ｌ）（附录二４）