⑶.移液时,移液管不要伸入太浅,以免液面下降后空吸;也不要伸入太深,以免移液管外壁附有过多的溶液。
⑷.使用同一移液管移取不同浓度溶液时要充分注意荡洗3次。
2.3 滴定管
2.3.1 滴定管介绍
滴定管分为碱式滴定管和酸式滴定管。前者用于量取对玻璃管有侵蚀作用的液态试剂;后者用于量取对橡皮有侵蚀作用的液体。滴定管为一细长的管状容器,一端具有活栓开关,其上具有刻度指示量度。一般在上部的刻度读数较小,靠底部的读数较大。 2.3.2 规格
滴定管容量一般为50mL,刻度的每一大格为1mL,每一大格又分为10小格,故每一小格为 0.1mL。精确度是百分之一。即可精确到0.01ml . 2.3.3 使用方法 ⑴.酸式滴定管
①.给旋塞涂凡士林。把旋塞芯取出,用手指蘸少许凡士林,在旋塞芯两头薄薄地涂上一层,然后把旋塞芯插入塞槽内,旋转使油膜在旋塞内均匀透明,且旋塞转动灵活。
②试漏。将旋塞关闭,滴定管里注满水,把它固定在滴定管架上,放置1-2分钟,观察滴定管口及旋塞两端是否有水渗出,旋塞不渗水才可使用。
③滴定管内装入标准溶液后要检查尖嘴内是否有气泡。如有气泡,将影响溶液体积的准确测量。排除气泡的方法是:用右手拿住滴定管无刻度部分使其倾斜约30°角,左手迅速打开旋塞,使溶液快速冲出,将气泡带走。
④进行滴定操作时,应将滴定管夹在滴定管架上。左手控制旋塞,大拇指在管前,食指和中指在后,三指轻拿旋塞柄,手指略微弯曲,向内扣住旋塞,避免产生使旋塞拉出的力。向里旋转旋塞使溶液滴出。 ⑵.碱式滴定管
①试漏。给碱式滴定管装满水后夹在滴定管架上静量1-2分钟。若有漏水应更换橡皮管或管内玻璃珠,直至不漏水且能灵活控制液滴为止。
②滴定管内装入标准溶液后,要将尖嘴内的气泡排出。方法是:把橡皮管向上弯曲,出口上斜,挤捏玻璃珠,使溶液从尖嘴快速喷出,气泡即可随之排掉。 ③进行滴定操作时,用左手的拇指和食指捏住玻璃珠靠上部位,向手心方向捏挤橡皮管,使其与玻璃珠之间形成一条缝隙,溶液即可流出。 2.3.4注意事项
⑴.滴定管使用前和用完后都应进行洗涤。滴定管洗干净的标准是玻璃管内壁不
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挂水珠。
⑵.装标准溶液前应先用标准液涮洗滴定管2-3次,洗去管内壁的水膜,以确保标准溶液浓度不变。装液时要将标准溶液摇匀,然后不借助任何器皿直接注入滴定管内。
⑶.滴定管必须固定在滴定管架上使用。读取滴定管的读数时,要使滴定管垂直,视线应与弯月面下沿最低点在一水平面上,要在装液或放液后1-2分钟进行。每次滴定时最好从―0‖刻度开始。
2.4 量筒
2.4.1 量筒简介
量筒是用来量取液体的一种玻璃仪器。量筒是量度液体体积的仪器。 2.4.2 规格
常用的有10 ml、25ml、50 ml、100 ml、250 ml、500 ml、1000 ml等。外壁刻度都是以 ml为单位,10 ml量简每小格表示0.2 ml,而50 ml量筒每小格表示1ml。 2.4.3 使用方法
向量筒里注入液体时,应用左手拿住量筒,使量筒略倾斜,右手拿试剂瓶,使瓶口紧挨着量筒口,使液体缓缓流入。待注入的量比所需要的量稍少时,把量筒放平,改用胶头滴管滴加到所需要的量。 2.4.4注意事项
⑴.量取液体体积时,要选用大小合适的量筒,如量取 8.0mL 液体的体积,选用 10mL 量筒为宜,不能选用 100mL 等大号量筒,否则会造成较大的误差。一般来说,在能量出液体体积的前提下,尽量选择最小号的量筒使用。 ⑵.量筒不能做反应容器用,不能用于物质的溶解或稀释,更不能进行加热,因量筒受热非常容易破裂。
⑶.量筒不能量取热液体,一方面热液体可能使量筒受热破裂,另一方面还可使量出液体的体积不准确,因相同量的液体其体积大小随温度的变化而变化。
2.5 研钵
2.5.1 简介
研钵是实验中研碎实验材料的容器,配有钵杵,常用的为瓷制品,也有玻璃、玛瑙、氧化铝、铁的制品。用于研磨固体物质或进行粉末状固体的混和。其规格用口径的大小表示。 2.5.2注意事项
⑴.不许与氢氟酸接触;
⑵.不许放在热处,例如不许放在烘箱中烤;
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⑶.遇有大块或结晶体样品,要在外边压碎敲碎,再放入研钵进行研磨; ⑷.研钵使用后要用水洗净,必要时可先用稀盐酸洗,再用水冲洗干净,如果仍不干净,可放入少许食盐研磨若干时间后倒去再洗净,不得已时可用少许海砂代替食盐以清理;
⑸.硬度过大,粒度过粗的物体,最好不要在研钵中研磨.以免划坏表面。
2.6 电子分析天平
2.6.1 简介
电子分析天平具有全自动故障检测,外置法码,自动校准,全部线性四点校准,超载保护等多种应用程序。 2.6.2注意事项
⑴.天平室要保持高度清洁,清扫天平室时,只能用带潮气的布擦拭,决不能用湿透的拖把拖地。潮湿物品切勿带入室内,以免增加湿度。
⑵.应随时清洁天平外部,至少一周清洁一次。在每次称量完毕后,应立即清洁底坐。阻尼器的壁上可用软毛刷和麂皮清洁后,再用 20 ~ 30 倍放大镜观察是否仍有细小物质的存在。
⑶.天平玻璃框内需放防潮剂,最好用变色硅胶,并注意更换。
⑷.在天平和砝码附近应放有该天平和砝码实差的检定合格证书,以便衡量时获得准确的必要数据。
2.7 酸度计
2.7.1 简介
酸度计是一种常用的仪器设备,又名PH计。主要用来精密测量液体介质的酸碱度值,配上相应的离子选择电极也可以测量离子电极电位MV值。测定时把复合电极插在被测溶液中,由于被测溶液的氢离子浓度不同而产生不同的电动势,将它通过直流放大器放大,最后由电压表指出被测溶液的pH值。酸度计能在0~14pH值范围内使用。 2.7.2 使用方法 ⑴.校正
先将仪器斜率调节器调节在100%位置,再根据被测溶液的温度,调节温度调节器到该温度值。 ⑵.定位
把复合电极插入仪器。选择一种最接近样品pH值的缓冲溶液,把电极放入这一缓冲溶液里,摇动烧杯,使溶液均匀。待读数稳定后,该读数应是缓冲溶液的pH值,否则就要调节定位调节器。用于分析精度要求较高的测定
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时,要选择两种缓冲溶液(即被测样品的pH值在该两种缓冲溶液的pH值之间或接近)。待第种缓冲溶液的pH值读数稳定后,该读数应为该缓冲溶液的pH值,否则调节定位调节器。清洗电极,吸干电极球泡表面的余液。把电极放入第二种缓冲溶液中,摇动烧杯使溶液均匀,待读数稳定后,该读数应是第二种缓冲溶液的pH值,否则调节斜率调节器。 ⑶.测量
经过pH标定的仪器,即可用来测定样品的pH值。这时温度调节器、定位调节器、斜率调节器都不能再动。用蒸馏水清洗电极,用滤纸吸干电极球部后,把电极插在盛有被测样品的烧杯内,轻轻摇动烧杯,待读数稳定后,就显示被测样品的pH值。复合电极的主要传感部分是电极的球泡,球泡极薄,千万不能跟硬物接触。测量完毕套上保护帽,帽内放少量补充液(3mol/L的氯化钾溶液),保持电极球泡湿润。仪器采用CMOS集成电路,不用时插入短路插头。检修时电烙铁要有良好的接地,以保护仪器。 2.7.3 注意事项
玻璃电极在初次使用前,必须在蒸馏水中浸泡一昼夜以上,平时也应浸泡在蒸馏水中以备随时使用。玻璃电极不要与强吸水溶剂接触太久,在强碱溶液中使用应尽快操作,用毕立即用水洗净,玻璃电极球泡膜很薄,不能与玻璃杯及硬物相碰;玻璃膜沾上油污时,应先用酒精,再用四氯化碳或乙醚,最后用酒精浸泡,再用蒸馏水洗净。如测定含蛋白质的溶液的pH时,电极表面被蛋白质污染,导致读数不可靠,也不稳定,出现误差,这时可将电极浸泡在稀HCl(0.1mol/L)中4-6分钟来矫正。电极清洗后只能用滤纸轻轻吸干,切勿用织物擦抹,这会使电极产生静电荷而导致读数错误。甘汞电极在使用时,注意电极内要充满氯化钾溶液,应无气泡,防止断路。应有少许氯化钾结晶存在,以使溶液保持饱和状态,使用时拨去电极上顶端的橡皮塞,从毛细管中流出少量的氯化钾溶液,使测定结果可靠。另外,pH测定的准确性取决于标准缓冲液的准确性。酸度计用的标准缓冲液,要求有较大的稳定性,较小的温度依赖性。
2.8 分光光度计
2.8.1 简介
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。 2.8.2 分类
包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200~400 nm的紫外
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光区.不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红,橙,黄,绿,蓝,靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.
氢灯(或氘灯)的发射光谱:氢灯能发出185~400 nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源. 2.8.3使用方法
⑴.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。 ⑵.将灵敏度开关调至―1‖档
⑶.根据所需波长转动波长选择钮。
⑷.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
⑸.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向t=0处。 ⑹.盖上暗箱盖,调节―100‖调节器,使空白管的t=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
⑺.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。 2.8.4注意事项
⑴.该仪器应放在干燥的房间内,放置在坚固平稳的工作台上,照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。 ⑵.使用本仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
⑶.在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于―0‖刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
3 溶液配置
3.1 溶液配置方法
3.1.1 直接法
用分析天平准确称取一定量基准物质,溶解后配成一定体积(溶液的体积需用容量瓶精确确定)的溶液,根据物质的质量和溶液体积,即可计算出该物质的浓度。 在直接法中必须要用基准物质配制,作为基准物质必须符合以下要求:
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