【 试 剂 】 1. 细胞计数板; 2. 红细胞稀释液; 3. 冰乙酸; 4. 1%冰乙酸。
【 操 作 】 1. 细胞总数:
(1)澄清脑脊液:混匀后用滴管直接滴入计数池,计数10个大方格内红、白细胞数,其总和即为每u l的细胞数。(如细胞较多,可计数一大格内的细胞数〓10)。
(2)浑浊或带血脑脊液:用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20ul,加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内,混匀后滴入计数池内,用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数,再乘以50即为每ul脑脊液的细胞总数。 2.白细胞数:
(1)非血性标本:小试管内放入冰乙酸1~2滴,转动试管,使内壁沾有冰乙酸后倾去之,然后滴加混匀的脑脊液3~4滴,数分钟后,混匀充入计数池,按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。 (2)血性标本:将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后,按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数,结果〓稀释倍数。 3.细胞分类:
(1)直接分类法:白细胞计数后,将低倍镜换成高倍镜,直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及单核细胞)和多核细胞,应数100个白细胞,并以百分率表示。若白
细胞少于100个,应直接写出单核、多核细胞的具体数字。 (2)染色分类法:如直接分类不易区分细胞时,可将脑脊液离心沉淀,取沉淀物2滴,加正常血清1滴,推片制成均匀薄膜,臵室温或37℃温箱内待干,进行瑞氏染色后用油镜分类。 如见有不能分类的细胞,应另行描述报告。 【 附 注 】
1. 脑脊液常规包括一般性状检查、潘氏(Pandy)球蛋白定性试验及细胞计数。
2. 计数应及时进行。
3. 细胞计数时,应注意新型隐球菌与白细胞的区别。 4. 计数池用后,应用75%乙醇消毒60min。
浆膜腔积液检查
浆膜粘蛋白定性试验(Rivalta反应)
【 标 本 】 新鲜浆膜腔积液。 【 试 剂 】 冰醋酸。 【 操 作 】
取100ml量筒,加蒸馏水100ml,滴入冰醋酸0.1ml (PH 3~5),充分混匀,静止数分钟,将穿刺液靠近量筒液面逐滴轻轻滴下,在黑色背景下,观察白色雾状沉淀的发生及其下降速度等,报告阴性或阳性及阳性的程度。
细胞学检查
【 标 本 】 新鲜浆膜腔积液。 【 操 作 】
1. 细胞总数及有核细胞计数
方法基本与脑脊液同,漏出液中有核细胞数量常在100〓106/L以下;渗出液中有核细胞数量较多,常在500〓106/L以上。 2. 细胞分类:
穿刺液应在抽出后立即离心,用沉淀物涂片后以瑞氏染色法进行分类。必要时制备稍厚涂片,在干燥前放臵乙醚乙醇等量混合液中固定30min,用苏木素- 伊红(HE)或巴氏法染色查找癌细胞。
精液检查
精子活动率
【 标 本 】 新鲜精液。 【 操 作 】
取新鲜标本混匀后,在温热玻片上用高倍镜观察100个精子,计数活动精子与不活动精子的比例,计算精子活动的百分率。 【 附 注 】
如室温低于10℃时,应将标本先放入37℃温育5~10min后镜检。
精子活力
【 标 本 】 新鲜精液。 【 操 作 】
取上述新鲜湿片标本,观察精子的活动力,以0级至Ⅳ级报告。
精子计数
【 标 本 】 新鲜精液。 【 试 剂 】 精子稀释液。 【 操 作 】
1. 于小试管内加精子稀释液0.38ml,吸液化精液20ul,加入稀释液内摇匀。
2. 充分摇匀后,滴入血细胞计数池内,静臵1~2min,待精子
下沉后,以精子头部作为基准进行计数。
3. 如精子数少,可计数2个大方格内精子数,数得总数乘10万即为每毫升精液内精子数,再换算成〓109/L报告。
4. 如精子数多,可计数5个中方格内精子数,加6个零,即为每ml精液内精子数再换算成〓109/L报告。 【 附 注 】
1. 收集精液前应避免性生活3~7天,精液宜用清洁干燥之小瓶收集,避孕套内的精液不宜采集。收集精液标本后应在一小时内检查,冬季应注意保温。
2. 出现一次异常结果,应隔一周后复查,反复查2~3次方能得出比较正确的结果。
3. 如低倍镜、高倍镜检查均无精子,应将精液离心沉淀后再涂片检查,如两次均无精子,报告“无精子”。
精子形态观察
【 标 本 】 新鲜精液。 【 试 剂 】 革兰或瑞氏染液。 【 操 作 】
革兰或瑞氏染色后用油镜观察,报告异常精子的百分比。
前列腺液检查
【 标 本 】