表13 Multiphor 上进行固相干胶等电聚胶（Immobiline Drystrp IEF）规则
在梯度模式（Gradient mode）下设置好EPS3501XL电源仪的程序，并关掉电源检查选择选项。IPG胶条在含有相应pH范围的IPG缓冲液的重水化液中重新水化。
固定干胶条（Imnobiline Drystrip） 长度 ph梯度 7cm PH4-7L
1 2 3 总 共
7cm PH6-11L
PH3-10L PH3-10NL
11cm PH4-7L
1 2 3
总共
1 2 3
11cm PH6-11L
PH3-10L
13cm PH4-7L
1 2 3 总共 1 2 3 总共
13cm PH6-11L
PH3-10L PH3-10NL
18cm PH4-7L
1 2 3 总共 1 2 3 总共
18cm PH6-11L
PH3-10L PH3-10NL
24cm pH3-10
1 2 3 总共 1 2 3 总共
500 3500 3500
500 35000 3500
2 2 2
5 5 5
500 35000 3500
2 2 2
5 5 5
300 35000 3500
2 2 2
5 5 5
300 35000 35000
2 2 2
5 5 5
300 35000 3500 300 35000 3500
2 2 2 2 2 2
200 35000 3500
2 2 2
5 5 5 5 5 5 5 5 5
200 3500
2 2
阶段（phase） 电压
（V）
电流（A）
功率 (W) 5 5 5
0:01 1:30 0:55-1:30 2:25-3:00 0:0.1 1:30 0:35-1:05 2:05-2:35 0:01 1:30 2;20-3:30 23:50-5:00 0:01 1:30 1:45-2:35 3:15-4:05 0:01 1:30 3:45-4:20 5:15-5:50 0:01 1:30 3:10-4:00 4:40-5:30 0:01 1:30 5:40-7:40 7:10-9:10 0:01 1:30 4:50-6:20 6:20-7:50 0:01 1:30 7:40-10:40 9:10-12:10
1 2800 3200-5200 6000-8000 1 2800 2200-3700 5000-6500 1 2900 8100-12100 11000-15000 1 2900 6100-9100 9000-12000 1 2900 13100-18100 16000-21000 1 2900 11100-14100 14000-17000 1 3000 20000-27000 23000-30000 1 300 12000-22000 20000-25000 1 3000 27000-37000 30000-40000
持续时间 （h:min）
（推荐）电压时
35000 2
总共
固定干胶条（Imnobiline Drystrip） 长度 ph梯度 24cm pH4-7 3-7NL
3-10NL
阶段（phase） 电压
（V）
电流（A）
功率 (W)
持续时间 （h:min）
（推荐）电压时
1 2 3 总共 1 2 3 总共
500 3500 3500 500 3500 3500
0:01 1:30
1 3000
12:00-16:20 42000-47000 13:30-17:50 45000-60000
0:01 1:30
1 3000
24cm
窄pH 梯度
22:00-27:40 77000-97000 23:30-29:10 80000-100000
(1) 在阶段2中，电压将会从阶段1设置的电压上升至3500V。在整个阶段3中电压将会保持在3500V。 (2) 若在PH6-11L IPG胶条上，样品通过包含在重水化液中加样，需要更多的时间来完成聚焦。在最后阶
段中增加推荐的电压时，使最后阶段电压时为：7cm长的IPG胶条6-10倍，11cm长的IPG胶条5-8倍，和13-18cm长的IPG胶条5-7倍。
3.5.6故障及排除
表14在等电聚焦过程中可能产生的故障和解决的方法。 症状
（Symptomm） 样品杯渗漏
可能原因
（Possible Cause） 处理和放置样品杯不正确
样品杯很脆弱，它不能无数次的从加样栅上拿下来又安装上去。检查样品杯是否与IPG胶条对准。 检查样品杯底部是否与IPG胶条的表面平行贴着。（见图13）
注意：样品杯渗漏往往在加样前能被检查出来 当IPG覆盖液到入到固定干胶托盘内时
（1）当将IPG覆盖液倒入到固相干条托盘上时，观察IPG覆盖液是否从样品杯底部渗漏到杯内，若这情况发生，重新安装样品杯，用微量移液器移走渗入的液体，并且继续检查样品杯是否渗漏。
（2）另一种检查是否渗漏的方法是将0.01%的溴酚蓝溶液放入样品杯内，看是否有染料从样品杯渗出。若有染料渗出，则样品杯必须重新安装来消除渗漏。（注意：在加样前染料必须从样品杯内除去）
电流过低
在重水化液中没放IPG缓冲剂
在开始跑胶时没电流
没连接电极或缺少电源连接
IPG胶条没有完全水化
电泳仪的高电压接口没有正确地插入到电源供给仪上。
样品染料液有从样品杯中移出
样品染料从样品杯中移出往往需要好几个小时
对IPG凝胶来说很常见，凝胶的传导性很低
电源供给仪不能检测到低uA级的电流并且关闭。
通常IPG等电聚胶开始时电流接近1mA,随后下降到uA级范围内，这依赖于在电泳仪上IPG胶条的数量。
检查低电流选项是否打开，（参照电源供应指令），IPG等电聚焦开始时电流的范围不能被电源供给仪检测出来。
重水化液中经常包含IPG缓冲剂
确保所有的MultiphorⅡ位于正确位置，确保带有电极的金属片与固定干胶托盘的侧面的金属片接触。注意带有电极的金属板只能位于标有红色或白色圈端。确保在冷却盘下的连接电缆是否正确安装。 确保整个IPG胶条已经全部水化。
确保电泳仪的高压接口安全地接到电源供给仪的输出端口上。若需要，使用合适的接口。
解决方法（Remedy）
样品杯按下时用力太大，以至于样品杯穿过胶条与塑料支持胶片靠在一起。这能使电流受阻，并且机械地阻碍蛋白质进入胶条。
样品中的离子强度大于胶条内的离子强度，由于这种原因，样品区域的场强不足于使蛋白质按估计的速度从样品区域移走。移动有可能完全停止了。
撤换IPG胶条，并且重新安装样品杯
尽可能的稀释样品或在加样前利用渗析法除去盐离子。
IPG胶条产生火花或燃烧
样品或IPG胶条的传导性太大 确保样品已充分去盐，或到达最大电压前，增加了低电压阶段的时间，使各离子向IPG胶条两端移动。
3.6 IPGphor 等电聚焦设备
利用IPGphor等电聚焦设备，IPG胶条的重水化和等电聚焦在同一个一个支
撑槽内进行。不同长度的支撑槽（holder）能适应不同长度的IPG胶条。胶条支撑槽是由在内部装有铂电极的具热传导性的瓷性物质做成的槽和一个盖子组成。能简单的将样品放入到含有重水化液的支撑槽中进行加样或在等电聚焦之前单独加样。当样品加入到IPG 胶条后并且将胶条支撑槽安置在IPGphor仪器平台上，根据所选的电泳方法，随后的步骤能自动进行。多大12个胶条支撑槽能同时进行电泳。
3.6.1 IPG胶条重新水化—IPGphor胶条支撑槽
（1） 准备IPG胶条支撑槽。
根据实验的要求选择与IPG胶条长度相对应的胶条支撑槽。 注意：在处理瓷性支撑槽时要小心，由于它们很脆弱。
用去污剂清洗各槽以除去残留蛋白。用重蒸馏水冲洗支撑槽。用棉性擦布或脱脂棉干燥支撑槽，或让支撑槽在空气中干燥。带手套处理干净的支撑槽以避免污染。
（2）加重水化液
用微量移液器吸取合适体积的重水化液至各槽中，如表15所示。从支撑槽的中间位置慢慢的将重水化液注入，使其从加样槽向两段移动。除去所有大的气泡。
注意：为了确保样品完全吸收，不要加入过量的重水化液
表15每条IPG胶条的重水化液体积 IPG胶条长度（cm） 7 11 12 18 24
①包含样品，若在重水化液中加入样品。
每条胶条的总共体积（ul） 125 200 250 350 450
①
（3）安装IPG胶条（图17和图16）
除去IPG胶条表面的包装，胶上成尖的一端（阴极端）对准支撑槽上带有点标记端，使带有点的一端先放到支撑槽上，为了使溶液包被整个胶条轻轻地抬起和放低胶条，并且沿着液体表面来回的移动，若需要的话，轻轻的倾斜支撑槽以确保整条胶完全的和均匀的浸润。最后放低IPG胶条阴极端（方形端）将整个胶条浸入到溶液中。确保胶条的两端与支撑槽的两端的电极接触。（当重水化液给胶着色时，胶能从视觉上判断出来），小心不要在胶底部形成大的气泡。 （4） 加入IPG覆盖液
加入IPG覆盖液以防止蒸发和尿素结晶的形成。利用微量移液器将胶条覆盖液从支撑槽的一端加入，直至半条胶覆盖上覆盖液，然后从另一端加入覆盖液，直至整条胶覆盖住。
（5） 胶条支撑槽上加盖
轻轻挤压盖子下侧的区域，确保在胶膨胀过程中，使IPG胶条与电
极具有良好的接触。 （6） 使IPG胶条重水化
重水化过程可放在板凳上进行或IPGphor仪平台上进行，确保支撑槽位于水平的表面上。进行水化至少需要10小时以上，因此建议在晚上进行。重水化的步骤可以编为利用IPGphor进行电泳的第一步。若在电泳的过程中考虑到温度控制，这样就尤其方便。
3.6.2 任选：安置电极纸片
在某种情况下，如聚焦时间很长，水有可能向IPG胶条的一端移动，从而使
另一端变干。这种作用可以通过在IEF前在IPG胶条和支撑槽电极之间放置纸电极片来减小。纸电极片也能吸收离子，这些离子不但再电泳时能在胶条两端积累，而且有可能影响分离效果。 （1） 准备纸电极
从等电聚焦电极纸带上（PaperIEF electrode Strip）剪取３ｍｍ宽的纸
电极片。将其放在干净平滑表面上如玻璃培养皿，然后用无离子水润湿用滤纸吸去多余的水分