B6.1取5.0g肌肉（除去脂肪组织），用10ml PH为7.2的67m mol /l磷酸缓冲液研磨后，用8 ml叔丁基甲基醚提取研磨物，强烈振荡20min；离心10min（4000r/min）；移去上清液，用8ml叔丁基甲基醚重复提取沉淀物。 B6.2将两次提取的醚相合并，并且蒸发；有1 ml甲醇（70%）溶解干燥的残留物；用3 ml石油酡洗涤甲醇液（研磨15S，短时间离心，吸收除石油醚）。
B6.3蒸发甲醇溶液，用1 ml二氯甲烷溶解后，再用3 ml1 mol/L的氢氧化钠(NOH)溶液提取;然后300μL 6mol/L磷酸中和提取液,用RIDA C18柱进行纯化. B7测定程序(室温200C~240C条件下操作)
B7.1将足够标准和样品所用数时的孔条插入微孔架,标准和样品做两个平行实验,记录下标准和样品的位置. B7.2加入20μL的标准和处理好的样品到各自的微孔中,标准和样品做两个平行实验.
B7.3加入50μL稀释后的DES抗体到每个微孔中,充分混合并在20C ~80C孵育过夜(注意:在第二早上继续进行实验之前,微孔板应在室温下放置30min以上,稀释用缓冲液也应回到室温,因此最好将缓冲液放在室温下过夜). B7.4倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打(每行拍打3次)以保证完全除去孔中的液体,用250μL蒸馏水充入孔中,再次倒掉微孔中液体,再重复操作两次. B7.5加入5μL稀释的酶标记物到微孔底部,室温孵育1h.
B7.6倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打(每次拍打3次)以保证完全除去孔中的液体,用250μL蒸馏水充入孔中,再次倒掉微也中液体,再重复操作一次.
B7.7加入50μL基质和50μL发色试剂到微孔中,充分混合物并在室温暗处孵充15min.
B7.8加入100μL反应停止液到微孔中,混合好在450nm处测量吸光度值(可选择>600nm的参比滤光片),以空气为空白,必须在加入停止液后60min内读取吸光度值. B8结果
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准（0标准）的吸光度值再乘以100，得到以百分比给出的吸光度值，以式（B.1）表示：
E（%）=A/A0*100 （B.1） 式中：
E---------吸光度值，%；
A---------标准或样品的吸光度值； A0--------0标准的吸光度值。
以计算的标准值绘成一个对应DES浓度（ng/L）的半对数坐标系统曲线图，校正的曲线在25ng/L~200ng/L的范围内应成为线性，相对应的每一个样品的浓度，可以从曲线上读出。乘以稀释倍数即可得到样品中的DES的实际浓度（ng/L）。 附件5
无公害食品 渔用配合饲料安全限量 NY5072-2002 1. 范围
本标准规定了渔用配合饲料安全限量的要求、试验方法、检验规则。 本标准适用于渔用配合饲料的成品，其他形式的渔用饲料可参照执行。 2. 规范性引用文件
下列文件中条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其他随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，棘手的最新版本适用于本标准。 GB/T 5009.45-1996 水产品卫生标准的分析方法 GB/T 8381-1987 饲料中黄曲霉素B1的测定 GB/T 9675-1988 海产食品中多氯联苯的测定方法 GB/T 13080-1991 饲料中铅的测定方法
GB/T 13081-1991 饲料中汞的测定方法 GB/T 13082-1991 饲料中镉的测定方法 GB/T13083-1991 饲料中氟的测定方法 GB/T 13084-1991 饲料中氰化物的测定方法 GB/T 13086-1991 饲料中游离棉酚的测定方法 GB/T 13087-1991 饲料中异硫氰酸酯的测定方法 GB/T13088-1991饲料中铬的测定方法
GB/T13089-1991 饲料中噁唑烷硫酮的测定方法 GB/T13090-1999饲料中六六六、滴滴涕的测定方法 GB/T13091-1991 饲料中沙门氏菌的检验方法 GB/T 13092-1991 饲料中霉菌的检验方法 GB/T14699.1-1993 饲料采样方法
GB/T 17480-1998 饲料中黃曲霉素B1的测定，酶联免疫吸附法 NY 5071 无公害食品 渔用药物使用准则 SC 3501-1996 鱼粉 SC/T 3502 鱼油
《饲料药物添加剂使用规范》[中华人民共和国农业部公告（2001）第[168]号]
《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》[中华人民共和国农业部公告（2002）第[176]号] 《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》[中华人民共和国农业部公告（2002）第[193]号] 3. 要求 3.1 原料要求
3.1.1加工渔用饲料所用原料应符合各类原料标准的规定，不得使用受潮、发霉、生虫、腐败变质及受到石油、
农药、有害金属等污染的原料。 3.1.2皮革粉应经过脱铬、脱毒处理。
3.1.3大豆原料应经过破坏蛋白酶抑制因子的处理。 3.1.4鱼粉的质量应符合SC3501的规定。
3.1.5鱼油的质量应符合SC/T3502中二级精制鱼油的要要求。
3.1.6使用的药物添加剂种类及用量应符合NY5071、《饲料药物添加剂使用规范》、《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》、《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》的规定；若有新的公告发布，按新规定执行。 3.2安全指标
渔用配合饲料的安全指标限量应符合表1规定。
表1 渔用配合饲料的安全指标限量
项目 铅（以Pb计）/（mg/kg） 汞（以Hg计）/（mg/kg） 无机砷（以As计）/（mg/kg） 镉（以Cd计）/（mg/kg） 限量 ≤5.0 ≤0.5 ≤3 ≤3 ≤0.5 铬（以Cr计）/（mg/kg） 氟（以F计）/（mg/kg） 游离棉酚/（mg/kg） ≤10 ≤350 ≤300 ≤150 适用范围 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 海水鱼类、虾类配合饲料 其他渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 温水杂食性鱼类、虾类配合饲料 冷水性鱼类、海水鱼类配合饲料 氰化物/（mg/kg） 多氯联苯/（mg/kg） 异硫氰酸酯/（mg/kg） 噁唑烷硫酮/（mg/kg） 油脂酸价（KOH）/（mg/g） ≤50 ≤0.3 ≤500 ≤500 ≤2 ≤6 ≤3 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 渔用育苗配合饲料 渔用育成配合饲料 鳗鲡育成配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 各类渔用配合饲料 黃曲霉毒素B1/（mg/kg） 六六六/（mg/kg） 滴滴涕/（mg/kg） 沙门氏菌/（cfu/25g） 霉菌/（cfu/g） 4. 检验方法 4.1铅的测定
按GB/T 13080-1991 规定进行 4.2汞的测定
按GB/T 13081-1991规定进行 4.3无机砷的测定
按GB/T5009.45-1996规定进行 4.4镉的测定
按GB/T13082-1991 规定进行 4.5铬的测定
≤0.01 ≤0.3 ≤0.2 不得检出 ≤3*104