绪 言
一、生理学实验课的目的
生理学是一门实验学科，其研究的基本方法即是实验。生理学实验课的基本目的在于：⑴通过实验培养学生具有科学的思维方法和科学的工作态度；⑵在实验过程中使学生初步掌握生理学实验的基本操作技术；⑶了解获得生理学知识的科学方法；⑷验证和巩固生理学的基本理论。 二、生理学实验的特点及基本方法
生理学实验的特点在于主要以活的动物为实验材料，因此要求做到：⑴爱护动物，尽量减少动物在实验中的痛苦，并充分利用每只动物以获得尽可能多的观察结果和实验数据；⑵严格按实验步骤和要求进行操作，以免造成不必要的创伤和出血使动物的正常生理状态遭到破坏，从而影响到实验结果的可靠性。
生理学的基本实验方法分为急性实验方法和慢性实验方法两大类。
㈠急性实验方法 实验过程不能持久，实验后动物不能存活，实验观察能在短时间内完成的实验方法。一般又可分为两种：
⒈离体器官实验方法 把要研究的器官或组织从活的或刚死去的动物身上取下来，放在一个适宜于正常生理活动的人工环境中以观察和研究其生理功能。
⒉活体（在体）实验方法 在动物麻醉或大脑毁损的状态下，解剖暴露动物的某一器官组织以进行实验研究。
㈡慢性实验方法 是在某一特定条件下，连续地反复观察和记录清醒动物的生理机能，需要较长时间才有结果的实验方法。有时要先做无菌的外科手术，待动物恢复健康后再进行实验研究。此法在基础实验课教学中较少应用，主要广泛应用于研究工作中。 三、生理学实验课要求
⒈认真预习本次实验的原理、目的、要求、实验步骤和操作程序。
⒉严格按照实验步骤认真操作、仔细观察，在需要互相合作的实验中应互相配合。在整个实验过程中不得进行与实验无关的活动。
⒊注意保护实验动物和标本，尽量节省实验器材和药品。
⒋实验后将仪器整理整齐，所用器械清洗干净并擦干，做好本组卫生。 ⒌遵守实验器械管理规定，爱护实验器械。
⒍及时整理实验记录，认真撰写实验报告，按时将报告交负责老师评阅。 四、实验报告写作要求
⒈写明姓名、日期、学号、组别及同组人员 ⒉实验号和实验题目 ⒊实验目的
⒋实验原理：可作扼要描述
⒌实验对象 ⒍实验器材和药品
⒎实验方法和步骤：可作扼要描述
⒏实验结果：详细记录所观察的实验结果，以及获得这些结果所需的各种实验条件，并进行适当的分析和处理。
⒐实验讨论和结论：运用所学的理论知识对实验结果进行解释和分析，并指出其生理意义。也可对实验方法进行讨论和分析。
实验一 蛙或蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本的制备
实验原理 两栖类动物的一些基本生理活动规律与哺乳类动物类似，其离体器官可以在室温下的任氏液中于一定时间内保持其生理机能，所以常用作生理学研究中的实验材料。坐骨神经─腓肠肌标本就是从两栖类动物后肢分离坐骨神经及其支配的腓肠肌所制成，常用于研究神经冲动的传导和神经肌肉接头的传递特性，以及肌肉的收缩机能，是研究神经、肌肉生理的最基本的实
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验材料之一。
实验目的 熟练掌握坐骨神经─腓肠肌标本的制备方法，为今后的神经肌肉实验打下有利的基础。
实验对象 蛙或蟾蜍
实验器材和药品 蛙类手术器械（蛙板、玻璃板、大头针、探针、普通剪刀、单面刀片、玻璃针、镊子、手术剪、滴管、线、烧杯、培养皿、锌铜弓、棉花）；任氏液。 实验步骤和观察项目
一、破坏蟾蜍的脑和脊髓 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指和中指夹住其前肢，无名指和小指夹住其后肢，拇指按压其头部前端。右手持探针从相当于枕骨大孔处垂直刺入，然后向前通过枕骨大孔刺入颅腔，左右充分搅动捣毁脑组织。再将探针抽回至进针处，向后刺入脊椎管，反复抽插捣毁脊髓。此时如果蟾蜍四肢松软、呼吸停止、角膜反射消失，表明脑和脊髓已完全被破坏，否则应重复上述步骤直至蟾蜍出现如此现象为止。
二、左手捏住蟾蜍的腰部，右手持普通剪刀在其肩关节稍下方处剪断脊柱，然后提起脊柱，沿两侧剪开皮肤，蟾蜍头部与内脏自然下垂，剪去头部及所有内脏（注意切勿损伤沿脊柱两侧下行的坐骨神经）。
三、左手捏紧脊柱残端（注意不要碰到坐骨神经），右手捏紧其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢的皮肤，然后把标本放入盛有任氏液的培养皿中。将手及全部用过的手术器械冲洗干净，因为皮肤的分泌物对神经和肌肉是有害的。
四、用镊子夹住脊柱将标本提起，然后用普通剪刀沿正中将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，使之完全分离；或用单面刀片沿正中将脊柱和耻骨联合处切开（注意勿伤坐骨神经）。把标本放入盛有任氏液的培养皿中。
五、取一条腿放置于蛙板上的玻璃板上，脊柱端取腹面向上，大腿端取背面向上，用大头针固定。用玻璃针沿脊柱分离坐骨神经，再沿神经走向剪去梨状肌及其附近的结缔组织，顺坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间的肌间沟）找出坐骨神经的大腿段，用玻璃针仔细分离。在近脊柱处结扎坐骨神经，从结扎处近脊柱端将坐骨神经剪断，然后将结扎神经的线轻轻提起，剪断坐骨神经的所有分支，将神经游离。
六、将游离的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪去全部的大腿肌肉，用刀片将股骨
图1－1：坐骨神经－腓肠肌标本
刮干净，然后在距膝关节约１cm处剪断股骨。 七、将游离的坐骨神经置于股骨端，在腓肠肌的跟腱下穿线结扎，并于结扎处远端剪断跟腱。提起腓肠肌将其游离至膝关节下，然后从膝关节囊将小腿其余部分剪去，这样就制成了一个
附着于股骨上并带有坐骨神经的腓肠肌标本（如图1－1）。
八、检验标本活性: 用经任氏液润湿的锌铜弓两极轻轻接触一下坐骨神经，如腓肠肌发生迅
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速而明显的收缩，则表明标本的活性良好，可将标本放入盛有任氏液的培养皿中备用。 注意事项:
⒈在暴露坐骨神经和腿部肌肉后不能用自来水冲洗。
⒉分离坐骨神经时应沿神经走向进行，尽量少用金属器械接触神经干，不要过分牵拉和压迫标本组织以免产生损伤。
⒊在制备过程中经常给神经和肌肉滴上任氏液，防止表面干燥，以保持标本的正常活性。 思考题
⒈你在制备坐骨神经─腓肠肌标本的过程中有哪些操作体会？ ⒉锌铜弓检验标本活性的原理是什么？
实验二 神经干动作电位的引导
实验原理 神经是可兴奋组织，其兴奋的客观标志就是神经动作电位，神经动作电位也叫神经冲动。神经在安静状态下其静息膜电位为胞内负胞外正（内负外正，极化），当产生动作电位时膜电位变成内正外负（去极化），因而在神经兴奋区与非兴奋区之间存在着电位差，这种电位差所产生的局部电流又引起邻近的非兴奋区发生去极化并产生动作电位，使兴奋沿细胞膜传向整个细胞，同时原来的兴奋区又恢复为内负外正的静息膜电位（复极化）。在完整的神经纤维膜外记录动作电位时，由于兴奋依次通过两个引导电极，会在这两个引导电极间产生方向不同的电位差变化，因而记录到的是双向动作电位，其波形与引导电极之间的距离有关。如果在两个引导电极之间用损伤法或药物阻断动作电位的传导，则只能记录到一次电位差变化，即单向动作电位。
坐骨神经内包含许多阈值、传导速度和去极幅度都不同的神经纤维，每根神经纤维都按“全或无”的特点产生动作电位，刺激坐骨神经所记录到的复合动作电位即是这些单个动作电位的总和。这种复合动作电位的波形与刺激强度有关。当刺激强度较小时，只有一部分的神经纤维发生兴奋，复合动作电位比较小；当刺激强度增加到一定程度时，所有的神经纤维都发生兴奋，复合动作电位达到最大值，此时再增大刺激强度也不能记录到更大的复合动作电位。 实验目的
⒈掌握记录神经的双相和单相动作电位的方法。
⒉观察刺激强度、引导电极之间距离的变化对坐骨神经动作电位波形的影响。
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实验对象 蛙或蟾蜍
实验器材和药品 计算机、生理学与神经生物学实验系统、神经标本屏蔽盒、蛙类手术器械、滤纸；任氏液。 实验步骤和观察项目
一、破坏蟾蜍的脑和脊髓（方法同实验一）。 二、游离坐骨神经至大腿段（方法同实验一）。
三、分离腓神经或胫神经 坐骨神经在小腿段分为胫神经和腓神经两支。在分支下方剪断内侧的胫神经，沿腓神经的走向（腓神经在腓肠肌沟内下行，直到足部）仔细分离腓神经，将坐骨神经轻轻提起，剪断腓神经的所有细小分支，游离腓神经，在踝关节水平穿线结扎，于结扎处远端将腓神经剪断。这样就制成了坐骨神经─腓神经标本。也可以剪断腓神经分支，分离胫神经，制成坐骨神经─胫神经标本。将制备好的标本放入盛有任氏液的培养皿中。
图2－1
神经动作电位引导装置示意图 s1、s2：刺激电极，r1、r2、r3：引导电极
四、按图2－1连接仪器，注意接好地线，检查各部分是否接通，先打开计算机电源，打开生理学与神经生物学实验系统电源（以下简称实验系统），再运行生理学与神经生物学实验系统软件，输入学号。选择所做实验，进入实验界面。 五、参数的设置
打开参数详细设置，参数设置分三个部分： 1.刺激器
单脉冲，波宽＜0.2ms，频率：15～30Ｈz，强度：微调从０Ｖ开始 2.放大器
首先根据实验选择通道，如图2-1信号输入接入1，通道选1，通道只能选择一个；放大倍数几百倍（根据实验要求选择）,时间常数DC，滤波：10KHz。
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