过滤技术
效果评估：监测消毒灭菌过程优于自消毒灭菌物品 分离微生物 化学消毒剂种类
根据消毒效果分为高效、中效、低效三类
高效：杀灭芽胞、分枝杆菌、病毒、真菌、细菌 常见-过氧乙酸、次氯酸钠、戊二醛等 中效：杀灭分枝杆菌、病毒、真菌、细菌 常见-酚类衍生物、乙醇和异丙醇 低效：杀灭细菌 常见-季铵类
化学消毒剂消毒效果影响因素 消毒剂的成分 浓度 接触时间 温度 PH值
有机物含量 医院感染
医院感染（NosocomialInfection,NI）又称医疗机构相关感染（healthcare-associatedinfection,HAI），指在医院中获得的感染。包括外源性和内源性感染。
外源性感染：来自另一感染者或环境
内源性感染：来自患者自身。正常菌群迁徙至机体其他部位，或受损组织、抗菌药物不合理使用导致病原体过度生长
入院时处于潜伏期的感染，不属于医院感染。
社区获得性感染可能经患者带入医院，感染患者及医务人员，导致医院感染 几乎所有病原体都可以导致医院感染 常见医院感染 泌尿道感染 呼吸道感染 外科伤口感染 血流感染
其他：烧伤、皮肤和软组织感染，眼和结膜感染、子宫内膜炎、产后生殖道感染，胃肠炎、肝炎等
临床微生物实验室在医院感染控制中的职责 制定标本采集、运送、处理规范。
遵循标准化操作程序处理标本，预防实验室感染。 监测消毒、灭菌效果，必要时进行环境监测。 及时将具有流行病学意义的结果通知相关人员。 必要时进行医院感染病原体的流行病学分型。
定期报告感染病原菌在不同解剖部位、病房的发生率及耐药谱
微生物标本采集的一般原则
1.早期采集 2.无菌采集
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集 4.采集适量标本 5.安全采集 标本的处理
1.一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检
2.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。
3.其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中，脑脊液等则要在25℃保存。
4.患者标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。
注意：标本的正确选择、采集和运送是实验室工作准确和有效的前提，是保证实验室质量的重要环节。下面介绍几种特殊标本的采集
一．血液
1.采血部位
通常采血部位为肘静脉。
疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。
对疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。
2.静脉穿刺和培养瓶接种程序
（1）采血前，才学部位严格进行消毒，在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手套固定静脉，不可接触穿刺点。
（2）用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养 瓶，或严格按厂商推荐的方法采血。
（3）血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。立即送检，切勿冷藏 3.采血量
自动化仪器要求成人采血量是8～10ml/瓶，儿童1～5ml/瓶。 4．血培养次数和采血时间
只要怀疑血液细菌感染，应即刻采集。
采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在1h内采集2～3次做血培养。 对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。
入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采2份。 6.标本运送
采血后应该立即送检,如不能立即送检，可室温保存，切勿冷藏。
血液中常见的病原体的临床意义 葡萄球菌菌血症
由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）及凝固酶阴性葡萄球菌引起的菌血症和脓毒症逐年增多，占菌血症的10%~15%，临床表现明显，发病急，中毒症状重。
肠球菌菌血症
近年来明显增多，约占菌血症的10%。常见泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的患者，易并发心内膜炎。此菌可对多种抗生素耐药，病情较重。
革兰阴性杆菌菌血症
主要侵犯危及机体免疫功能低下的患者。常可引起泌尿生殖道、胃肠道、胆道及呼吸道感染。
厌氧菌菌血症
厌氧菌常寄居于口腔、肠道和泌尿生殖道，并引起相应部位的感染。 真菌血症
常由条件致病性真菌引起，有假丝酵母菌、曲霉菌和毛霉菌等，以白假丝酵母菌最多见，多数伴有细菌感染。脑脊液标本采集
采集脑脊液一般用腰椎穿剌术获得，特殊情况可采用小脑延髓池或脑室穿刺术。 标本采集后要立即送检、化验，一般不能超过1小时。
腰穿法无菌取脑脊液3～5ml，置无菌管内立即送检。培养脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本置于35℃条件下保温送检，不可置冰箱保存。但做病毒检查的脑脊液标本应放置冰块，可在4℃保存72h。
脑脊液中常见病原体的临床意义
细菌性脑膜炎：是中枢神经系统感染的常见类型，其中以流行性脑脊髓膜炎为常见，有的呈暴发型，病情严重，病死率较高；多发年龄在5～29岁，冬春季多发，可用青霉素类、磺胺类、头孢霉素类抗生素治疗。结核性脑膜炎最常见，近几年呈回升趋势，为防治重点。
真菌性脑膜炎：最常见于隐球菌脑膜炎，其他的真菌性脑膜炎如白假丝酵母菌、球孢子性脑膜炎日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发，如AIDS、恶性肿瘤，严重糖尿病、SLE等患者易发生。
流行性乙型脑炎：是一种人兽共患的自然疫源性疾病。传染源为患者和家禽、家畜及野生动物，蚊虫为传播媒介，经蚊虫叮咬、吸血而传播，人群对本病普遍易感，感染后多数人无症状而成为隐性感染。但可获得持久免疫力，再次发病者极少见。少数患者病情严重，病死率高，可留有后遗症。
脓液标本采集 先清洗，再采集。
脓性标本是用针和注射器抽吸采集，如果没有得到抽吸物，也可以用拭子在伤口深部采集渗出物。
脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可由排液法取得。 厌氧菌感染的脓液常有腐臭应予注意。特别要注意避免正常菌群所污染以及由采集至接种前尽量避免接触空气。
脓液中常见病原体的临床意义
由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见。细菌造成伤口感染一般认为需每克组织内细菌数量在105～106个以上。
外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，且易发生混合感染。
烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染，如铜绿假单胞菌等，次为革兰阳性球菌感染，可单独也可混合细菌感染。
急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌感染所致。
放线菌感染可发生在免疫功能下降时或由于拔牙、口腔黏膜损伤时。 痰液标本采集
自然咳痰法
以晨痰为佳，尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，将痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应≥1ml。
支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。
小儿取痰法
用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
注意：对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。
痰标本中常见病原体
下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，主要指肺实质性炎症的肺炎和支气管黏膜炎症的支气管炎，是我国常见病和病死率高的感染性疾病。
痰标本的细菌学检查对呼吸道感染的诊断有重要意义。
粪便标本采集
用药前自然排便，采集脓血、黏液部分2～3g。 外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材。 液体便取絮状物1～2ml,置无菌容器内送检。
如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集标本。 粪便标本送检
1.对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内粪便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件的提倡使用运送培养基。
2.消化道溃疡、幽门螺杆菌标本可取胃窦和胃体等部位各一块胃黏膜活检标本，置入无菌生理盐水中立即送检，或将标本放于运送培养基，于4℃保存，24h内送检。
粪便中常见的病原体的临床意义 细菌性痢疾
简称菌痢，主要是指由志贺菌引起的肠道传染病，是肠道感染性腹泻最常见的病种。 细菌性食物中毒 常可危及生命，常见于沙门菌、副溶血弧菌、致病性大肠埃希菌、葡萄球菌、肉毒梭菌、腊样芽胞杆菌食物中毒。多发生在夏秋季，以暴发和集体发病为特征，是一种严重的病症。
致病性大肠埃希菌引起的肠道感染
消化性溃疡幽门螺杆菌感染主要部位是胃及十二指肠球部，大量研究及临床证明胃炎、消化性溃疡主要是HP所引起，因此消化性溃疡经抗感染治疗取得很好的疗效
尿液标本采集 采集清洁中段尿。
必要时导尿或膀胱穿刺留尿标本，但要注意导尿容易引起逆行性感染。
采集容器的要求：洁净、无菌、加盖、封闭、防渗漏、广口、容积应50ml、盒盖易于开启，不含防腐剂和抑菌剂。
标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），4℃冷藏保存时间不得超过8小时。但应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。
尿液中常见病原体的临床意义
80%为革兰阴性杆菌，其中以大肠埃希菌最为常见。20%为革兰阳性菌，其中以肠球菌为多见。
尿路感染
生殖道标本标本采集
采集前清洁、消毒尿道口及外阴，尿道分泌物可将无菌棉拭子伸入尿道3～4cm捻转拭子采集。
阴道分泌物采集时可用无菌棉拭子自阴道深部或阴道穹隆后部，宫颈2～3cm处，转动并停留10～30s取分泌物。
一、细菌形态学检验
（一）制片
1.涂片取洁净载玻片一张，用标记笔一分为二，用接种环取生理盐水2环，分别置于玻片两端，接种环灭菌后，取金黄色葡萄球菌斜面培养物少许与盐水混匀，并涂成均匀薄膜涂片。接种环灭菌后以同样方法再取大肠埃希菌少许，与另一端生理盐水混匀后涂成均匀薄膜。如用液体材料，如痰、尿液、脓汁等可直接涂片，不必加生理盐水
2.干燥涂片最好在室温下自然干燥，必要时可将标本面向上，小心间断地在弱火高处烘干，但切勿紧靠火焰将涂膜烤枯。
3.固定涂片干燥后，将标本片在酒精灯上快速的来回通过三次，共约2s～3s，注意温度不可太高，以涂片涂膜的反面触及皮肤觉轻微烫觉即可。
固定目的：①杀死细菌；②使菌体与玻片粘附较牢，在染色时不致被染液和水冲掉；③菌体蛋白变性易着色。
（二）革兰染色法
1.原理
（1）革兰阳性细菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易渗入；革兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入。
（2）革兰阳性菌的等电点低，革兰阴性菌的等电点较高，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。
（3）革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色；而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。
2.染色方法
（1）标本涂片、干燥和固定。
（2）染色：在已固定细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴，室温作用1min，用细流水轻轻冲洗，甩去积水。再滴加碘液数滴，室温作用1min，冲洗。滴加95%酒精数滴，轻轻摇动玻片几秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片，使脱掉的染料随酒精流去，再滴加酒精，直到流下的酒精无色为止（约需30s），立即用细流水将酒精冲掉。再滴加稀释石炭酸复红液复染约30s后用细流水冲洗。
（3）标本染色后，晾干或用吸水纸吸干，滴香柏油后用油镜观察。 3.结果
紫色为革兰阳性菌，红色为革兰阴性菌