题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 6/40 5.2. 5.2.1.
待验证的检测方法 0.4%乙醇标准溶液的配制
用1ml分度吸管精密量取正丙醇0.50ml，置于装有三分之一注射用水的250ml量瓶中，再用1ml单标线吸管精密量取乙醇1.00ml，置于同一量瓶中，用注射用水定容至刻度，摇匀后静置即为标准溶液。
5.2.2.
0.4%样品溶液的配制
用1ml分度吸管精密量取正丙醇0.50ml，置于装有三分之一注射用水的250ml量瓶中，再用1ml的单标线吸管精密量取样品1.00ml，置于同一量瓶中，用注射用水定容至刻度，摇匀后静置即为供试液。
5.2.3.
色谱条件 条件内容 型号 色谱柱 检测器 气 相 色 谱 仪 主 机 载气 色谱柱流量 氢气流量 空气流量 尾吹流量 分流比 进样口温度 炉温 检测器温度 顶 空 进 型号 样品瓶 名称/指标 Agilent 6890N 毛细管柱，DB624，30m×250μm×1.4μm （Length× I.D.× Film） 氢火焰离子检测器（FID），范围（Range）0 氦气（≥99.99%） 1.0 ml/min（恒流） 40ml/min 450 ml/min 45 ml/min 5:1 120℃ 恒温，80℃ 200℃ Agilent 7694E 20ml/个 版本号：0000 生效日期： 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 名称/指标 1ml 5.0ml 70℃ 100℃ 110℃ 10.0min 20.0min 0.50min 1.00min 1.00min 2.00min 10.0min 代码： 64-0018 页码： 7/40 条件内容 样 器 定量环 取样量 样品瓶温度 定量环温度 传输线温度 运行时间 样品瓶平衡时间 样品瓶加压时间 定量环填充时间 定量环平衡时间 进样时间 谱图采集时间 5.2.4. 检测步骤
标准溶液和样品溶液各分别进样2针，记录色谱图；并按照以下公式计算样品中乙醇的浓度。
以峰面积计算样品中乙醇的浓度，公式如下：
样品中乙醇的浓度（v/v）=（A样乙×A标丙）÷（A标乙×A样丙）×100% 式中： A标丙：标准溶液的正丙醇峰面积的平均值；
A标乙：标准溶液的乙醇峰面积的平均值； A样丙：样品溶液的正丙醇峰面积的平均值； A样乙：样品溶液的乙醇峰面积的平均值。
5.3. 验证使用的试剂和气体
版本号：0000 生效日期： 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 8/40 5.3.1.
方案中使用的试剂为色谱级乙醇、色谱级正丙醇、注射级氯化钠，肝素钠（302）、注射用水为本公司自产。记录试剂名称、规格、生产或分装商以及试剂/气体批号等内容（附件1）。
5.3.2.
方案中使用的气体为氦气、空气、氢气，纯度均要求99.99%以上。执行方案时必须检查这些载气的规格、生产或分装商以及试剂/气体批号等内容并记录（附件1）。
5.3.3. 5.3.3.1. 5.3.3.2. 5.4. 5.4.1.
试剂和载气可接受标准
所有在方案执行中用到的试剂和载气必须符合5.3.1.和5.3.2.项下要求。 所有试剂必须在有效期内。 验证使用的器具、仪器及配件
检查位于质量控制部仪器室1的Agilent 6890N＆7694E气相色谱仪（设备编号：QC-GC-02）的型号、生产厂家、校验日期与校验有效期。
5.4.2.
检查与气相色谱仪连接的氦气瓶、空气瓶、氢气瓶上的压力表，记录其规格、生产厂、校验编号、校验日期与校验有效期等。
5.4.3.
检查实验中使用的容量瓶、单标线吸管、分度吸管记录其规格、校验编号、校验日期与校验有效期等内容。
5.4.4. 5.4.5. 5.4.5.1. 5.4.5.2. 5.4.5.3.
记录检查结果（附件2）。 可接受标准
在验证中使用到的所有仪器必须经过校验，并且在有效期内。 在验证中使用的所有压力表必须经过校验，并且在有效期内。
在验证中使用的所有容量瓶、分度吸管等玻璃量器必须经过校验，并且在有效期内。
5.5.
仪器稳定性检查
在方法验证开始之前，先检查基线，以确定仪器的稳定状态。
5.5.1.
按SOP 51-0008《Angilent气相色谱仪标准操作规程》打开气相色谱仪、顶空进样器，按照5.2.3.项下设定好仪器条件。
版本号：0000 生效日期： 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 9/40 5.5.2.
待仪器达到所设定的条件，进入Sample Info，设置Sample Name为“steady—baseline”，根据程序升温所需时间确定采集数据时间（约15分钟），打印谱图。
5.5.3.
向右下拖动鼠标，使基线放大，判断谱图中的基线波动范围是否超过10pA。
5.5.4.
可接受标准
基线波动范围不超过10pA。
5.5.5. 5.6. 5.6.1.
填写仪器稳定性检查—基线记录（附件3）。 方法的专属性 空白实验：
检查确认注射用水的色谱行为，确认是否会对酒精的检测造成影响。
5.6.1.1.
在仪器稳定性检查合格后，进样注射用水1针，监测10分钟。设置Sample Name为“water”，打印谱图。
5.6.1.2.
向右下拖动鼠标，使基线放大，判断谱图中注射用水空白基线波动是否超过15pA，并且是否有明显的色谱峰出现。
5.6.1.3.
可接受标准
5.6.1.3.1. 空白基线波动范围不超过15pA。 5.6.1.3.2. 没有明显的色谱峰。 5.6.1.4. 5.6.2.
填写空白实验结果记录（附件4） 专属性实验：
分别对乙醇溶液、正丙醇溶液以及乙醇和正丙醇的混合溶液进样分析，判断乙醇和正丙醇是否互相干扰，方法的专属性是否符合规定。
5.6.2.1.
取3个洁净的250ml量瓶，记录量瓶的校验编号；再分别编号1#、2#、3#，作为配制试剂专用。
5.6.2.2.
试剂配制：
版本号：0000 生效日期： 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 10/40 5.6.2.2.1. 0.4%乙醇标准溶液：用1ml单标线吸管移取1.0ml乙醇，注入装有三分之
一注射用水的1#250ml量瓶中，用注射用水稀释并定容至刻度，充分混匀备用。
5.6.2.2.2. 0.2%正丙醇标准溶液：用1ml分度吸管移取0.50ml正丙醇，注入
2#250ml容量瓶中，用注射用水稀释并定容至刻度，充分混匀备用。
5.6.2.2.3. 0.4%乙醇-0.2%正丙醇混合标准溶液：用1ml单标线吸管移取1.0ml乙
醇，注入3# 250ml量瓶中，再用另一支1ml分度吸管移取0.50ml正丙醇，注入同一个装有三分之一注射用水3#250ml量瓶中，用注射用水稀释并定容至刻度，充分混匀备用。
5.6.2.3.
进样分析：
5.6.2.3.1. 分别向气相色谱仪中进样乙醇标准溶液、正丙醇标准溶液和乙醇-正丙醇混
合标准溶液各1针，进行检测。方法和仪器条件见5.2.3.。
5.6.2.3.2. 各针的Sample Name分别设置为“ethanol”、“propanol”和
“ethanol+propanol”。
5.6.2.4.
可接受标准
5.6.2.4.1. 色谱图中乙醇峰与正丙醇峰的分离度不得小于2.0。 5.6.2.4.2. 色谱图中乙醇峰与正丙醇峰的理论塔板数均不得小于5000。 5.6.2.5. 5.7. 5.7.1. 5.7.1.1.
记录实验结果（附件5）。 方法的检测限和定量限 方法的噪音
从5.5项下实验得到的色谱图中，记录基线噪音最高处和最低处所对应的响应值分别为H大、H小，其差值为Np-p，即：Np-p=H大-H小。
5.7.1.2. 5.7.2.
噪音计算公式：RMS Noise=1/5×Np-p。 检测限和定量限的确定
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