题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 11/40 5.7.2.1.
将5.6.2项下的乙醇-正丙醇标准混合溶液稀释成一系列浓度的溶液，进样分析，当被测溶液中乙醇的色谱峰高为基线噪音的3倍时，此溶液的浓度就是乙醇的最小检测浓度，即检测限。
5.7.2.2.
当被测溶液中乙醇的色谱峰高为基线噪音的10倍时，此溶液的浓度就是乙醇的最小定量浓度，即定量限。记录实验结果（附件6）。
5.8.
方法的线性
配制乙醇浓度为5.6.2.2.1项下0.4%乙醇标准溶液浓度的10%、20%、30%、35%、40%、50%（v/v）的乙醇与正丙醇混合标准溶液，进样分析并建立标准曲线，以确定本方法的线性是否符合相关要求。
5.8.1. 5.8.1.1.
标准溶液的配制：
取250ml量瓶5个，分别编号A、B、C、D、E；记录量瓶校验编号；一支1ml的分度吸管，乙醇专用；一支1ml的分度吸管，正丙醇专用。
5.8.1.2.
按照下表配制系列标准溶液： 编号 试剂 乙醇ml 正丙醇ml 注射用水ml 溶液中乙醇浓度（%） A 0.10 0.50 定容至250 0.04 B 0.20 0.50 定容至250 0.08 C 0.30 0.50 定容至250 0.12 D 0.35 0.50 定容至250 0.14 E 0.40 0.50 定容至250 0.16 F 0.50 0.50 定容至250 0.20 5.8.2. 5.8.2.1.
进样分析：
分别向气相色谱仪中进样标准溶液A、B、C、D、E、F各1针，各针的Sample Name分别设置为line-A-10%、line-B-20%、line-C-30%、line-D-35%、line-E-40%、line-F-50%。方法和仪器条件见5.2.3.项下。
5.8.2.2. 5.8.3. 5.8.3.1.
记录每个谱图的名称及谱图编号（附件7）。 计算：
计算每次进样后乙醇与正丙醇的峰面积之比，记录结果（附件8）。
版本号：0000 生效日期： 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 12/40 5.8.3.2.
以乙醇与正丙醇峰面积之比的值为纵轴，乙醇标准溶液浓度为横轴作图。对数据进行线性回归，作出线性方程，命名为“乙醇浓度检测的线性方程”，计算回归的相关系数（附件9）。
5.8.3.3. 5.8.4.
通过计算判断方法的线性是否符合要求。 可接受标准
线性回归系数不得低于0.9990。
5.9.
方法的准确度
配制乙醇含量为5.2.2项下“0.4%样品（样品中乙醇含量按30%计）溶液” 的 50%、80%、100%、120%系列溶液和5.2.1.项下“0.4%乙醇标准溶液”，判断方法的准确度。
5.9.1.
取250ml量瓶14个，分别编号A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3、S、E；100ml量瓶1个，编号F，其中编号S为标准溶液，编号F为0.025g/ml氯化钠溶液，编号E为0.020g/ml肝素钠溶液。
5.9.2. 5.9.2.1.
溶液的配制
0.025g/ml氯化钠溶液的配制：称取氯化钠2.50g，置100ml容量瓶中，加注射用水溶解并定容至刻度，摇匀即得。
5.9.2.2.
0.020g/ml肝素钠溶液的配制：称取肝素钠5.00g，置250ml容量瓶中，加注射用水溶解并定容至刻度，摇匀即得。
5.9.3.
按照下表配制系列标准溶液： 编号 试剂 乙醇ml A-50% 标准溶液 A1 A2 A3 B-80% B1 B2 B3 C-100% C1 C2 C3 D-120% D1 D2 D3 1.00 0.15 0.15 0.15 0.24 0.24 0.24 0.30 0.30 0.30 0.36 0.36 0.36 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 10 10 10 10 10 10 正丙醇ml 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.025g/ml0 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 氯化钠 0.020g/ml0 10 10 10 10 10 10 肝素钠 水定容体250 250 250 250 250 250 250 积ml 版本号：0000 生效日期： 250 250 25250 250 250 0 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 13/40 5.9.4. 5.9.4.1.
系统适用性实验
进样分析标准溶液5针，记录乙醇峰与正丙醇峰的分离度和理论塔板数并计算乙醇和正丙醇峰面积之比的RSD。（附件10）
5.9.4.2. 可接受标准
5.9.4.1.1. 乙醇峰与正丙醇峰的分离度不得小于2.0。 5.9.4.1.2. 乙醇峰与正丙醇峰的理论塔板数均不得小于5000。 5.9.4.1.3. 乙醇和正丙醇峰面积之比的RSD不大于5%。 5.9.5.
进样分析A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3溶液各1针，各针的Sample Name分别设置为STD-1、STD-2、
accuracuy-A1-50%、accuracuy-A2-50%、accuracuy-A3-50%以此类推。
5.9.6. 5.9.7. 5.9.8.
记录每针的谱图名称及谱图编号（附件10）。 计算每张谱图中乙醇与正丙醇的峰面积之比。
将峰面积之比的数据带入（A样乙×A标丙）÷（A标乙×A样丙）×100%中，计算出A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3各点的乙醇浓度。
5.9.9.
将计算得到的浓度与实际配制的浓度进行比较，计算回收率；计算公式如下：
回收率（%）= 计算得出的乙醇的浓度÷实际配制的乙醇的浓度×100%
5.9.10.
记录5.9.6.、5.9.7.、5.9.8.项下的计算结果，记录峰面积并计算峰面积之比（附件12）和各组溶液的平均回收率（附件11~附件12）。
5.9.11.
可接受标准
5.9.10.1 回收率在98%~102%之间。
5.9.10.2 溶液中氯化钠和肝素钠对乙醇峰无影响。 5.10. 5.10.1.
方法的精密度 方法的精密度：
版本号：0000 生效日期： 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 14/40 5.10.1.1. 由同一位检验员根据5.9.项下的检测结果计算各组溶液的乙醇浓度的平均
值、标准偏差S、相对标准偏差（RSD），从而确定方法的精密度。记录计算结果（附件13）。
5.10.1.2. 计算公式如下：
每个浓度的平均值：C =（C1+C2+C3）/3；
(X?X)(C?C)每个浓度的标准偏差S =?= ?
22n?12每个浓度的相对标准偏差RSD=（S/C）×100%
5.10.1.3. 可接受标准
每个浓度项下相对标准偏差RSD不大于2%。
5.10.2.
方法的中间精密度
5.10.2.1. 由不同的检验员，在不同的日期，重复以上实验，计算相对标准偏差，判
断方法的中间精密度是否符合要求。
5.10.2.2. 注意：该实验必须由不同的检验员，在不同日期进行。
5.10.2.3. 实验步骤与5.9. “方法的准确度”项下内容一样；由另外一名检验员，从
配制乙醇-正丙醇混合溶液开始，重复5.9. 项下内容。
5.10.2.4. 计算步骤与5.10.1.项下一样，各针的Sample Name分别设置为STD-3、
STD-4、repeat-A1-50%、repeat -A2-50%、repeat -A3-50%以此类推。
5.10.2.5. 记录由另外一名检验员做的“方法的准确度”的实验谱图和计算结果。 5.10.2.6. 记算由另外一名检验员测得的各个浓度的相对标准偏差，并与原检验员测
得的结果比较，记录结果（附件14）。
5.10.2.7. 可接受标准
每个浓度项下的相对标准偏差RSD不大于2%。
5.11.
方法的范围
根据5.6.—方法的专属性、5.7.—检测限和定量限、5.8.—方法的线性、5.9.—方法的准确度、5.10—方法的精密度等实验结果，确定气相色谱法检测过程控制酒精浓度的检测方法范围（附件15）。
版本号：0000 生效日期： 批准人页签： 题目： 深圳市海普瑞药业有限公司Shenzhen Hepalink Pharmaceutical Co.,Ltd验证方案 过程控制酒精浓度检测 方法验证方案（Agilent） 代码： 64-0018 页码： 15/40 5.12.
方法的耐变性
调整方法的检测条件以确定气相色谱法对中间过程酒精浓度检测结果的影响。根据耐变性实验计算出相对标准偏差（RSD），判断这些条件的改变对方法的影响。
5.12.1.
调整检测条件：
5.12.1.1. 将气相色谱仪进样口温度调整为115℃和125℃； 5.12.1.2. 将检测器温度调整为195℃和205℃；
5.12.1.3. 将顶空进样器加热平衡时间调整为15min和25min。 5.12.2.
溶液的配制：
配制0.4%乙醇-0.2%正丙醇混合标准溶液：用1ml单标线吸管移取1.0ml乙醇，注入装有三分之一注射用水的250ml量瓶中，再用另一支1ml分度吸管移取0.50ml正丙醇，注入同一个250ml量瓶中，用注射用水稀释并定容至刻度。
5.12.3.
操作步骤：
5.12.3.1. 配制5.2.1.项下“0.4%乙醇标准溶液”。
5.12.3.2. 以5.2.3项下的色谱条件，向气相色谱仪中进样0.4%乙醇-0.2%正丙醇混
合标准溶液2针，记录色谱图，作为对照溶液的色谱图。
5.12.3.3. 其他条件不变，将气相色谱仪进样口温度分别调整为115℃和125℃，每
种温度条件下向气相色谱仪中进样乙醇-正丙醇混合标准溶液3针，各针的Sample Name分别设置为resist-INJ-1、resist-INJ-2 、resist-INJ-3、resist-INJ-4、resist-INJ-5 、resist-INJ-6。根据谱图判断乙醇与正丙醇是否互相干扰。计算乙醇浓度和相对标准偏差RSD，判断检测结果是否符合要求；记录实验结果（附件16、19、22）。
5.12.3.4. 其他条件不变，将气相色谱仪检测器温度调整为195℃和205℃，其他条
件不变，每种温度条件下向气相色谱仪中进样乙醇-正丙醇混合标准溶液3针，各针的Sample Name分别设置为resist-DET-1、resist-DET-2 、
版本号：0000 生效日期： 批准人页签：