目 录
实验规则????????????????????????????????2
实验一 环境中微生物的检测?????????????????????????3 实验二 细菌的简单染色???????????????????????????7 实验三 细菌的革兰氏染色??????????????????????????10 实验四 细菌的芽孢染色???????????????????????????12 实验五 细菌的荚膜染色???????????????????????????14 实验六 细菌的鞭毛染色及其运动性观察????????????????????16 实验七 放线菌的形态观察??????????????????????????19 实验八 酵母菌形态及细胞结构的观察?????????????????????23 实验九 丝状真菌形态观察????????????????????????26 实验十 几种常用培养基的制备???????????????????????30 实验十一 高压蒸汽灭菌和干热灭菌??????????????????????35 实验十二 噬菌体效价的测定?????????????????????????40 实验十三 微生物对大分子化合物的水解??????????????????43 实验十四 微生物对糖的利用?????????????????????????46 实验十五 营养元素对微生物生长的影响 ???????????????????48 实验十六 温度对微生物生长的影响??????????????????????50 实验十七 pH值对微生物生长的影响?????????????????????52 实验十八 紫外线对微生物生长的影响?????????????????????55 实验十九 抗生素对微生物最低抑制浓度（MIC）的测定?????????????57 实验二十 大肠杆菌生长曲线的测定????????????????? ???? 60 实验二十一 显微镜下细胞直接计数?????????????????????? 63 实验二十二 显微镜下测量微生物细胞的大小?????????????????? 66 实验二十三 乳酸发酵及乳酸菌的分离和鉴定??????????????????70 实验二十四 稀释法平板法分离土壤中的微生物?????????????????78
附录Ⅰ????????????????????????????84 附录Ⅱ?????????????????????????????91 参考文献????????????????????????????94
实 验 规 则
1． 按时上课，不得迟到早退。如有疾病不能上课者，应向任课教师提供医院证明。
2． 实验前请先预习《微生物生物学实验》相关内容，明确实验目的、原理、操作方法，
以保证实验顺利进行。
3． 做实验时要严格遵守实验纪律及操作规程，培养严肃认真的科学态度。不得随意涂改、
编造实验数据，对实验结果进行认真分析。
4． 在实验台上除实验用具和实验指导外，不得乱放其它物品。勿将菌液、染液、药品等
洒在桌面上或地面上，如有菌液污染桌面或地面时，不要随便涂抹，应该用75%酒精或5%石炭酸溶液消毒。
5． 实验过程中保持实验室肃静，不得随便走动，不得高声谈笑。
6． 接种时必须严格遵守无菌操作规程，不得讲话。接种用的接种环、接种针及其它接种
用具，在使用前后必须经过火焰灭菌或放在指定的消毒器皿内，不得随便放置。
7．实验完毕时，必须整理实验台，擦净桌面，打扫地面后方可离开。
8．爱护仪器、用具。节约药品，并按指定方法使用，不得自己乱用。如有损坏或故障必须
及时报告指导教师，并登记在物品损坏登记簿上。
9．按时观察实验结果，以实事求是的科学态度完成实验报告，力求简明准确。实验报告包
括实验目的、原理、方法、结果及回答问题（讨论）等五部分内容。字迹要清楚，绘图用铅笔。
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实验一 环境中微生物的检测
目的
1．用实验证明在我们生活的环境周围存在着各种各样的微生物； 2．了解无菌操作在微生物实验中的重要性。
原理
微生物生活在我们周围，其中有些附着于尘埃上，有些漂浮于大气中，还有些沉降在各种物体的表面。土壤中微生物的种类和数量最多。此外，在人体和动物体的口腔、呼吸道、消化道以及动植物体表都存在着各种各样的微生物。由于这些微生物个体微小、结构简单、人们很难用肉眼看到，因而常常忽略了它们的存在。有些微生物种类对我们人类有益，有些则往往能引起工农业产品及实验室中各种实验材料的污染。在实际工作中，必须牢固建立无菌操作概念，熟练各种微生物操作技术，防止杂菌污染。在我们生活的环境中存在着种类繁多的微生物，在适宜的温度下，将这些微生物接种到适合于它们生长的固体培养基表面，经过一段时间，即可由单个菌体或孢子生长、繁殖形成一个个肉眼可见的菌落。根据各种微生物菌落形态的不同，即可初步辨别出细菌、放线菌、酵母菌和丝状真菌。
材料
1．5套无菌培养皿
2．150ml细菌培养基（LB）
方法
1．制备培养基平板：
点燃酒精灯，取5套无菌培养皿置于左手边，再取1瓶熔化好的培养基（冷却至45℃
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左右）置于右手边，按照无菌操作法, 即右手拿好装有培养基的三角瓶，左手拔下棉塞，并在火焰上轻烧瓶口，边烧边转动。然后用左手大拇指和食指打开皿盖，使之成45°角，向每皿中到入约15毫升培养基，平放，待其凝固。如图1-1所示。 2．接种：
（1）取1套培养基平板，打开皿盖，15-20分钟后，盖好皿盖并注明处理方式； （2）取1套培养基平板，在酒精灯旁打开皿盖，取一钱币于培养基表面轻轻涂抹后，盖好
皿盖并注明处理方式；
（3）取1套培养基平板，打开皿盖，用力将衣物上或头发上灰尘摇落在培养基表面，盖好
皿盖并注明处理方式；
（4）取1套培养基平板，打开皿盖，将平板放在距口6-8厘米处，用力咳嗽，盖好皿盖并
注明处理方式；
（5）不打开第5套培养基平板，注明为对照，以“CK” (check) 表示； 3．将所有培养皿倒置，于28℃温箱中培养一周，观察结果。
结果
将结果填入下表：
表1-1 环境中微生物检测结果
培养皿号 NO．1 NO．2 NO．3 NO．4 NO．5
菌落数 （个） 菌落 类型 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 大小 3
菌 落 特 征 形态 表面干湿 颜色 边缘
图1-1 制备培养基平板
问题
1．菌落是怎样形成的？
2．为什么在培养过程中要将培养基平板倒置？ 3．为什么在实验中要留空白对照？
4．比较测试培养皿和对照培养皿中的菌落数说明什么问题？ 5．通过实验谈谈你对无菌操作的认识？
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