2．器皿：台式天平，2000ml搪瓷锅，500ml烧杯，500ml三角瓶，500ml、1000ml量筒，漏斗，15×150mm试管，玻棒，1ml、10ml吸管，滴管。 3．其它：pH试纸，药勺，滤纸，防潮纸，纱布，棉花，线绳。
方法
1、制备牛肉膏蛋白胨培养基
（1）牛肉膏蛋白胨培养基配方如下：
牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml pH 7.0～7.2
（2）制备方法：按需要称量各药品，用量筒量取1000ml蒸馏水于搪瓷锅中，放入琼脂加
热至其全部熔化后，再加入牛肉膏、蛋白胨及NaCl至全部溶解后，补水定容至1000ml。然后用1mol/L NaOH调pH7.1。趁热分装，3个500ml三角瓶，每瓶装300ml；15×150mm试管，每支试管约装3-5ml（装量不超过试管长度的1/5）。塞好棉塞，用防潮纸包好，试管7支一捆，准备灭菌。
图10-1 棉塞制作过程 正确的棉塞
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2、配制马铃薯培养基
（1）马铃薯培养基配方如下：
去皮马铃薯 200g 蔗糖或葡萄糖 20g 琼脂 20g 自来水 1000ml pH 6.5
（2）配制方法：按需称量各药品，将洗净去皮的马铃薯切成约1cm2 小块置于搪瓷锅中，
加入1000ml自来水煮沸半小时，然后用4层纱布过滤，向滤液中加入琼脂，加热熔化后，再加入蔗糖或葡萄糖，再补足水分至1000ml，然后用1mol/L HCl调pH至6.5。趁热分装、包好同上，准备灭菌。
3、配制高氏1号培养基
（1）高氏1号培养基配方如下：
可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO3 1g K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml
pH 7.2～7.4
（2）配制方法：按需称取各药品，先用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少量沸水并加热
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使淀粉充分溶解。向琼脂中加入少量沸水并加热使其完全溶解后，加入溶解淀粉，再逐一加入所需的NaCl，KNO3，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，然后用1mol/L NaOH调pH至7.5。趁热分装、包好，准备灭菌。
4、配制牛肉膏蛋白胨液体培养基：配方同1，只是无须添加琼脂凝固剂。制备方法同1。分装于250ml三角瓶中，每瓶分装100ml，包好后准备灭菌。
5、棉塞的制备：棉塞的形状、大小和松紧要合适，才能起到防止杂菌侵入并有利于通气的作用。加塞时应使棉塞总长度的3/5塞入试管口或三角瓶口，以防止棉塞脱落。制塞时应按口径大小取适量普通棉花铺成近方形，中间稍厚，边缘稍薄。沿对角线内折略成三角形。然后用拇指和食指将三角形的一角卷起，边卷边压紧，在卷的过程中要不断将絮状纤维往里卷，使棉塞外形光洁如未开伞的蘑菇。其过程如图10-1所示。
6、配制无菌水：将蒸馏水分装于250 ml三角瓶中，内含20-30粒玻璃珠，每瓶100ml。15×150mm试管中装9 ml蒸馏水，7支一捆，包好后准备灭菌。
（1）灭菌：以上各培养基及无菌水均可在1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃条件下，进
行高压蒸汽灭菌20分钟。
（2）摆放斜面：灭菌后待培养基冷却至50-60℃时（防止斜面上冷凝水过多），将试管口
一端搁在高度适中的木棍上，调整搁置的斜度，使斜面长度不超过试管总长度的1/2。如图10-2和10-3所示。
问题
1．何谓选择培养基，加富培养基及鉴别培养基？各有何用途？ 2．在制备培养基过程中应注意哪些问题？为什么？
3．制好培养基后为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？ 4．摆放培养基斜面时应注意什么？
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10-2 分装培养基
图10-3 斜面的放置
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图
实验十一 高压蒸汽灭菌和干热灭菌
目的
使学生学习并掌握高压蒸汽灭菌和干热灭菌的原理及方法。
原理
高压蒸汽灭菌是实验室最常用的灭菌方法，适用于培养基，生理盐水，各种缓冲液及玻璃器皿的灭菌。常用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌锅有立式、卧式和手提式三种。图11-1所示常用手提式灭菌锅。高压蒸汽灭菌的原理是通过提高灭菌锅内的蒸汽温度以达到灭菌目的，即，使灭菌锅夹层的水加热、沸腾，不断产生蒸汽，以排除冷空气，直至空气排净后（约排气10-15分钟）关闭放气阀，使蒸汽锅密闭，这时随蒸汽压不断上升，锅内的温度也随之上升，当蒸汽压（饱和蒸汽压）升到1.05kg/cm时，锅内温度即达121.3℃，在该温度下保持20-30分钟，可将所有微生物及芽孢杀死。灭菌所需时间和温度取决于被灭培养基中营养物的耐热性、容器体积大小和装物量等因素。若灭砂土、石蜡油或含菌量大的物品则应适当延长灭菌时间。
干热灭菌适用于玻璃器皿的灭菌。常用电热烘箱进行，其结构如图11-2所示。干热灭菌主要是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到杀灭微生物的目的。细胞内蛋白质凝固性与其本身含水量相关。当菌体受热时，环境和细胞内含水量越大，蛋白质凝固就越快，反之则慢。通常干热灭菌时预先将各种器皿用纸包好或装入金属制培养皿箱、移液管筒内，再放入电热烘箱，然后打开电源，加热升温至150-160℃，维持2小时即可进行彻底灭菌。
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仪器与材料
1．仪器：立式高压蒸汽灭菌锅，手提式高压蒸汽灭菌锅，电热烘箱。 2．需灭菌的物品：培养基，无菌水，培养皿，用报纸包好的吸管等。
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