3．其它：载玻片，无菌水，洗瓶，擦镜纸，吸水纸，二甲苯，香柏油及接种用具
方法
1．涂片：取一洁净的玻片， 滴加1滴无菌水。以无菌操作法取大肠杆菌涂片，干燥固定； 2．染色：
（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴覆盖于涂片处约1分钟，水洗； （2）媒染：滴加碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟，水洗；
（3）脱色：倾斜载玻片，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗直至流出的乙醇不带紫色为止，
立即用水冲净乙醇；
（4）复染：用番红染液覆盖1分钟（可适当延长时间至2分钟），水洗，风干；
采用相同的方法进行金黄色葡萄球菌的革兰氏染色（也可在教师指导下进行混合涂菌）； （6）镜检：干燥后置油镜下观察；
（7）清理：整理桌面，将显微镜恢复原样，将废片放入废片缸内。
结果
根据各菌革兰氏染色反应结果，填写表3-1：
表3-1 细菌的革兰氏染色
菌名 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
菌体颜色
菌体形态（图示）
G＋或G－
问题
1．革兰氏染色的关键步骤是什么？为什么？应当如何控制？
2．当需要对一株未知菌进行革兰氏染色时，应从哪些方面注意控制条件，才能保证对菌株的染色结果可靠？
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实验四 细菌的芽孢染色
目的
学习并掌握细菌芽孢染色的原理及方法。
原理
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而加以区别。芽孢通常具有厚而致密的壁，透性低，不易着色和脱色，当用着色力强的弱碱性染色剂孔雀绿在加热条件下染色时，芽孢和菌体同时着色，进入菌体的染色剂可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。经对比度大的复染液番红染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，呈绿色；而菌体被复染剂染成红色，易于区别。进行芽孢染色的菌株应控制其培养时间，如菌株培养时间过长，芽孢则从菌体脱落出来。因此，如果需要观察芽孢在菌体内着生的位置，一定要根据各菌的特点来确定培养时间。
材料
1.菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26℃-28℃ 培养2~3天； 巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium），26℃-28℃ 培养2天； 2.染色剂：孔雀绿染液，番红染液
3.其它：载玻片，无菌水，洗瓶，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，接种用具
方法
1．制片：将枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌分别涂片、干燥固定；
2．染色：用吸水纸块盖住涂片处，然后在吸水纸上滴加孔雀绿染液至饱和。加热使染液微
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冒蒸汽后，保持5分钟。注意：加热时应不断添加染液，不要使吸水纸干燥；
3．水洗：待玻片冷却后，用镊子除去吸水纸，再用水瓶轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止 4．复染：用番红染液染色1~2分钟，水洗； 5．镜检：涂片干燥后，置油镜下观查； 6．清理：清理显微镜、废玻片及桌面。
结果
观察染色结果，绘图。(注意芽孢在菌体内的位置、大小和形状)
问题
1．为什么在孔雀绿加热染色时，要待玻片冷却后才能冲洗？
2．分别从菌龄、制片等方面，简述细菌芽孢染色需要注意的技术要领。
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实验五 细菌的荚膜染色
目的
学习并掌握细菌荚膜染色的原理及方法。
原理
荚膜是包围细菌细胞外的一层粘液性物质，主要成分为多糖类，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形，因此荚膜染色通常采用衬托染色法或称负染法，即将菌体和背景分别着色，从而把不着色且透明的荚膜衬托出来。
本实验以钾细菌为材料。钾细菌是50年代分离出来的一种硅酸盐细菌，它可分解正长石和磷灰石等矿石，并释放出钾、磷等元素，又称为硅酸盐细菌。钾细菌的细胞通常单生或成对生长，有周生鞭毛，在无氮培养基中生长时能形成很厚的荚膜。
材料
1．菌种：钾细菌（Bacillus mucilaginosus），点接于阿须贝平板上，26℃-28℃ 培养3天。 2．染色剂：墨汁，使用前必须用滤纸过滤，除去墨汁中的杂质。
3．其它：载玻片，无菌水，洗瓶，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，接种用具。
方法
1．制片：在洁净载玻片的中央滴加1滴无菌水（或6%葡萄糖液），取少许培养72小时的
钾细菌制成涂片，空气中风干；
2．染色：用番红，并在涂片处染色1-2分钟，水洗， 稍风干；
3．滴加一滴墨汁在载玻片一侧，左手持此玻片，右手另拿一干净玻片作推片用，将推片边缘平整的一端与混合菌液成30°角接触，顺势将菌液推开，使其涂成一薄层，并在空气中充分自然干燥；
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4．镜检：玻片自然干燥后，置油镜下观察， 菌体为红色，荚膜无色， 背景黑色； 5．清理：清理显微镜、废玻片及桌面。
结果
绘制钾细菌荚膜染色图并描述其染色结果。
问题
1．简单染色能否观察细菌荚膜？请解释原因。
2．细菌的荚膜有何特点，在对其染色观察结果时应注意什么？
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