4.2 IGF-1R基因SNP位点基因型的组间比较
对三组之间IGF-1R基因+3174基因型分布频率进行卡方检验,未发现显著性差异(P=0.25, >0.05)。
表 11 IGF-1R基因+3174等位基因频率2组间比较
Table 11 Comparisons of IGF-IR +3174 allele frequencies among the two groups SNP位点 +3174
等位基因 A G
研究组n(%) 对照组n(%) χ2 38(25.7) 110(74.3)
50(29.4) 120(70.6)
0.829
P值 0.661
5 Ang-2基因SNP位点基因型及等位基因频率的组间比较 5.1 Ang-2基因SNP位点的HWE检验
对Ang-2基因+35基因型频率在对照组、轻症组和重症组3组间的分布进行HWE检验,结果显示基因型分布频率符合HWE (P>0.05),说明人群具有代表性。 5.2 Ang-2基因SNP位点基因型频率的组间比较
对三组之间Ang-2基因+35基因型频率进行卡方检验,未发现显著性差异(P=0.951, >0.05)。
表 12 Ang-2基因+35基闪??丨频率2組间比较
Table 12 Comparisons of of Ang-2 +35 genetype frequencies among the three groups
SNP位点 基因型 +35
GG GC CC HWE-P
研究组 4(4.1) 22(31.1) 48(64.8) 0.49
对照组 6(8.5) 20(28.2) 45(63.4) 0.10
χ2 0.700
P值 0.951
5.3 ACE基因SNP的HWE检验
对ACE基因I/D基因型频率在对照组、轻症组和重症组三组间的分布进行HWE检验，结果显示基因型分布频率符合HWE (P>0.05)，说明人群具有代表性，见表2-15。
5.4 ACE基因I/D基因型频率的组间比较
ACE基因16内含子目的片断经PCR扩增后可形成两种不同长度的DNA片断:即490bp的插入片断(I)和190bp的缺失片断(D)? PCR产物经凝胶电泳溴化乙
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锭染色后，在紫外灯下可观察到三种条带，一为单一490bP条带，此为纯合子插入型(II基因型);二为单一 190bp条带，此为纯合子缺失型(DD基因型);三为490bp和190Pb两种条带，此为杂合子插入/缺失型(DI基因型)。见图2-2。对三组之间ACE基因I/D基因型分布频率进行卡方检验，未发现显著性差异(P=0.777， >0.05)。
6 相关SNP与ROP的logistic分析
6.1VEGF基因+405、+936多态性及PEDF基因-5376多态性与ROP的关联性分析
以上卡方检验中发现VEGF基因+405、+936基因型频率和PEDF基因-5376基因型频率在间有显著性差异，采用二分类logistic分析校正胎龄和出生体重后检测这3个位点多态性与重度ROP的相关性。由于重症组与对照组间胎龄、出生体重有统计学差异，校正胎龄、出生体重后结果显示:3个SNP与重症显著相关(P值分别为P=0.010；P=0.023；P-0.045，<0.05)。其中，VEGF基因+405GG基因型与CC基因型相比，患重症ROP的风险度为0.140(OR:0.140，95%CI:0.039-0.505)，有统计学意义(P=0.003；<0.05)；VEGF基因+936CT基因型与CC基因型相比，患重症ROP的风险度为3.281(OR:3.281，95%CI:1.272-8.462)，有统计学意义(P=0.014；<0.05)；PEDF基因-5376CT基因型与TT基因型相比，患重症ROP的风险度为0.315(OR:0.315，95%CI；0.121-0.817)，有统计学意义(P=0.018；<0.05)。
以上卡方检验中发现VEGF基因+405基因型频率在重症组与轻症组间有显著性差异，釆用二分类logistic分析检测位点多态性与重症ROP的相关性。校正胎龄和出生体重后结果显示，在重症组与轻症组间，该位点多态性与重症ROP显著关联(P=0.000，<0.05)。其中，VEGF基因+405GG、GC基因型与CC基因型相比，患重症ROP的风险度分别为0.088(OR:0.088，95%CI:0.028-0.279)和0.276(OR；0.276，95%CI:0.110-0.693)，有统计学意义(P值分别为P=0.000；P=0.006；<0.05)。
6.2 VEGF +405M60单倍型组合与ROP的关联性分析
VEGF基因+405G/C、-46001多态性位点间存在4种单倍型:^46007+4050:-460C/+405C；-460T/+405G；-460T/+405C，本次研究中共发现
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6种单倍型组合，①.-TTAMOSCC；②.-46010/+40500:③.-460TT/+405CG；④.-460CC/+40500:⑤.-4601CC/+40500:⑥.-460TT+4050CG
首先对单倍型组合在三组间的分布进行卡方检验，发现各单倍型组合在三组间的分布有显著性差异(P=0.000，<0.05)，两两比较发现，单倍型组合在重症组与对照组、重症组与轻症组间的分布频率有显著差异(两组均为P=0.000，<0.017)，而在轻症组与对照组间分布无显著性差异(P=0.981，>0.017)；进一步采用二分类logistic分析校正胎龄和出生体重后，对VEGF -460/+405各单倍型组合在重症组与对照组间、重症组与轻症间的分布频率进行比较。具体方法如下:将②、③、④、⑤、⑥单倍型组合合并为“非①”，则可得到①与非①单倍型组合的比较结果。同理，可以得到②与非②、③与非③...⑥与非⑥单倍型组合在两组间的比较结果。结果发现，重症组与对照组、重症组与轻症组间，VEGF-460TT/+405CC单倍型组合(-460T/+405C纯合子)显著增加了患重症ROP的风险(OR：5.319，95%CI：2.034-13.904， P=0.001)和3.878(OR：3.878，95%CI： 1.693-8.885， P=0.001);在重症组与对照组、重症组与轻症组间，-460TT/+405GG单倍型组合(-460T/+405G纯合子)显著降低了患重症ROP的风险(OR：0.121， 95%CI：0.022-0.660， P=0.015)和0.289(OR：0.289，95%CI：0.123-0.680，P=0.019)。
通过对比和研究以下数据：1．VEGF基因SNPs与AMI发病风险的关联分析，结果表明VEGF基因SNPs与急性心肌梗死正相关（r=0.312）；2.血浆VEGF浓度与VEGF基因SNPs的关系成正相关(r=0.573)；3.VEGF血浆水平与MACCE发生率相关性分析表明，VEGF血浆水平、多态性与MACCE正相关（r=0.618）；4．LV- remodling与VEGF浓度及多态性正相关(r=0.187)；5.心肌梗死面积分别与VEGF血清浓度及VEGF的SNP的相关性结果表明，心肌梗死面积与VEGF血清浓度成正相关（r=0.736），心肌梗死面积与VEGF的SNP成正相关（r=0.582）。血管内皮生长因子的检测数据与急性心肌梗死其他检测的数据相关性分析表明，各数据间均呈正相关，对急性心肌梗死的血管内皮生长因子的检测对急性心肌梗死的研究诊断具有重要意义。
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第三章 讨论
急性心肌梗死（Acute myocardial infarction，AMI）具有发病急、并发症多、病死率高等特点。其病理改变是冠状动脉粥样硬化，致管腔变窄或冠脉痉挛，血栓梗塞，导致心肌缺血、缺氧、坏死。因心肌梗死的部位有前壁、下壁、右壁或多个部位梗塞，故出现病情轻重不同，轻者仅有胸闷隐痛，重者出现剧痛和并发症。急性心肌梗死属中医“真心痛’、“厥心痛”等范畴，为本虚标实证。一是正虚（如气虚、阳虚和阴虚，以心气虚或肾气虚为主，一是邪实（如血癖、痰湿、寒凝、气滞，血癖是重要病理特点）。多以心阳虚为本，痰浊阻络为标。 1 VEGF基因SNP与ROP发病的关联分析
视网膜新生血管的生成涉及多种血管调节因子，VEGF是目前发现的功能最强的血管源性及血管通透性因子，在视网膜病变中起着中心调控的作用，其它血管因子的作用都是通过VEGF的表达及生成作用而实现的。VEGF广泛分布于人和动物体内的脑、肾、肝、脾、肺、眼等多种器官中，正常眼视网膜色素上皮、血管内皮和周细胞均可产生较低水平的VEGF。VEGF属糖蛋白家族，分子量约为40kDa，包括胎盘生长因子(PIGF)与VEGF-A、B、C、D、E、F七种成员。VEGF对血管内皮细胞有高度的选择性，作为活性的内皮细胞丝裂原诱导血管生成，为血管内皮的强促分裂素，它可以在多种生物环境中影响细胞的增生、迁移、酶解、存活，从而刺激血管内皮的增生、迁移和毛细血管腔形成，最后生成新生血管。新生大鼠的视网膜在高氧环境培养，然后回到室内空气中，内核层中Miiller细胞(视网膜内最主要的神经胶质细胞)局部VEGF的mRNA表达增高。通过注射VEGF受体蛋白质溶液阻断VEGF活性，血管生长被抑制。证实了VEGF表达和新生血管形成之间有关联。VEGF的基因表达受到氧分压的调控，这一特点有助于组织根据需氧量调节血管数量。在正常氧分压条件下，视网膜细胞产生一定水平的VEGF供已有的血管生长。而在高氧情况下，VEGF表达下降，这在ROP发病的第一阶段中起了重要作用。相反，相对缺氧有上调VEGF基因表达的作用，增强转录水平的和VEGFmRNA的稳定性。短时间缺氧3h可使VEGF表达量增加3、4倍，而持续性缺氧15h可使VEGF表达量增加8、10倍。Young TL等对一例光凝手术后的3期ROP死亡患儿进行了尸检，在一只激光光凝手术
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后的眼中，视网膜的手术区域内没有发现VEGF mRNA，激光疱痕区之间存在增高的VEGF mRNA，而在另一只尚未达到手术标准的眼中，发现VEGFmRNA在视网膜的无血管区域内明显升高。 2 PEDF基因SNP与ROP发病的关联分析
PEDF是一种分子量约为50KD的分泌性糖蛋白，含418个氨基酸[45]。属于丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor，Serpin)超基因家族的产物，但不具备抗蛋白酶活性。主要来源于视网膜色素上皮、角膜和虹膜上皮以及大脑、肝、肾脏、胰腺以及肿瘤组织等身体其他组织细胞，生物功能主要为保护神经元、抑制血管生成和控制肿瘤生长和转移作用。PEDF在视网膜基质中以较高的浓度存在，有营养神经的作用，是视网膜正常发育所必需的营养因子;视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium， RPE)分泌的PEDF进入感光细胞的细胞间质，不仅能够影响视网膜的分化、发育和成熟，还对视网膜的机械损伤、光损伤和缺血性损伤有神经元保护作用。作为一种“天然新生血管抑制物”，近年来其作用机制和治疗潜力得到了广泛研究。正常玻璃体及房水中可以检测出高浓度的PEDF，房水中的PEDF含量的下降预示着糖尿病视网膜病变的进展，而VEGF的含量则没有这种预示价值。Gao等发现在氧诱导的视网膜新生血管大鼠模型中，视网膜组织VEGF含量较正常对照组升高了5倍，PEDF含量下降了2倍，而VEGF:PEDF的比值升高了10倍。VEGF：PEDF比值的改变程度与视网膜新生血管增生的程度呈正相关，这一发现充分证明PEDF作为血管抑制剂参与了视网膜新生血管形成的调节。Ogata等也在研究中发现PEDF与发挥血管刺激作用的VEGF协同，在生理性和病理性血管形成过程中起着关键作用。IH常情况下，两者的表达水平处于动态平衡，在病理损伤环境下，二者的平衡被破坏，可致血管异常生成[5?]。PEDF与血管内皮生长因子(VEGF)同样都受氧浓度的调节，但二者的调控方向相反。在低氧条件下，视网膜VEGF的表达水平会增高，PEDF表达水平下降，视网膜新生血管增加;反之，氧浓度过高时将导致视网膜低血管化。Dawson等报道，低氧使PEDF水平下降，促进血管生成;高氧使PEDF水平升高，抑制血管生长。Duh等研究也显示，PEDF浓度的升高可抑制VEGF诱导的视网膜内皮细胞生长和游走，从而抑制视网膜的新生血管形成。PEDF编码基因为位于染色体17pl3.1的单个基因，长约16kb，含有8个外显子和7个内含子。
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