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定容至100mL。
D5.6 羧甲基纤维素钠溶液，浓度为8mg/mL
称取羧甲基纤维素钠（Sigma C5678)0.80g，再加入90mL水,加热，磁力搅拌至羧甲基纤维素钠完全溶解。用乙酸乙酸钠缓冲溶液（5.4）定容至100mL。如果pH 偏离5.50，再用乙酸溶液（5.1）或乙酸钠溶液（5.2）调节pH 至5.50，然后再用乙酸乙酸钠缓冲溶液（5.4）定容至100mL。使用前，适当摇匀。4℃避光保存，有效期为36h。 D5.7DNS 试剂
称取3,5-二硝基水杨酸3.15g（化学纯），加水500mL，搅拌5s，水浴至45℃。然后逐步加入100mL氢氧化钠溶液（5.3），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g 和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300mL，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000mL。用烧结玻璃过滤器过滤（孔径为0.45μm）。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7天后可以使用，有效期为180d。 D6.仪器与设备
D6.1 分析天平：感量0.001g。 D6.2 pH 计：精确至0.01。 D6.3 离心机：2000r/min 以上。
D6.4 恒温水浴锅：温度控制范围在30-60℃之间，精度为0.1℃。 D6.5 分光光度计：能检测350-800nm 的吸光度范围。 D6.6 移液器：精度为μL。 D7 标准曲线的绘制
D7.1 吸取贮备液（5.5）按下表配制成葡萄糖标准溶液 管号 1 2 3 4 5 6 7
取葡萄糖糖储备液体积(mL)
1 2 3 4 5 6 7
取乙酸—乙酸钠缓冲液体积(mL)
99 98 97 96 95 94 93
葡萄糖浓度(mg/mL)
0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70
D7.2 吸取乙酸-乙酸钠缓冲液（5.4）4.0mL，加入DNS 试剂（5.7）5.0mL，沸水浴加热5 分钟，用
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自来水冷却至室温，用水定容至25.0mL，制成标准空白样。
D7.3 分别吸取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各2.00mL（做两个平行），分别加入到刻度试管中，再分别加入2mL 缓冲液（5.4）和5mLDNS 试剂（5.7）。电磁振荡3s，沸水浴加热5min。然后用自来水冷却到室温，再用水定容至25mL。吸取缓冲液（5.4）4.0mL，加入DNS 试剂（5.7）5.0mL，沸水浴加热5min，用自来水冷却至室温，再用水定容至25mL，以标准空白样为对照调零，在540nm 处测定吸光度A 值。
D7.4 以葡萄糖浓度为Y 轴、吸光度A 值为X 轴，绘制标准曲线。新配制或超时的DNS 试剂均需要重新绘制标准曲线。 D8 试样溶液的制备
D8.1 固体样品的反应用酶液制备
称样量称取试样两份，精确至0.0001g。加入40mL 乙酸—乙酸钠缓冲溶液（5.4）。磁力搅拌30min，再用缓冲溶液（5.4）定容至100mL，在4℃条件下避光保存1-2h，然后以1000r/min 离心3-5min，取上清液，再用缓冲液（5.4）做适当稀释。（稀释后的待测酶液中纤维素酶酶的活力最好能控制在0.04—0.08U/mL 之间）。 D8.2 液体样品的反应用酶液制备
液体样品可以直接用缓冲溶液（5.4）进行稀释、定容。如果稀释后酶液的pH 偏离5.50，需要用乙酸溶液（5.1）或乙酸钠溶液（5.2）调节至5.50，然后再用缓冲溶液（5.4）做适当稀释定容。 D9 测定步骤，按下表操作。
反应顺序
1．加入待测酶液于25mL 比色管中预热10 分钟 2．反应底物37℃预热10 分钟 3．加入底物溶液 4．电磁振荡3-5s 5．37℃水解30min 6．加入DNS 终止液 7．电磁振荡3-5s 8．沸水浴5 分钟 9．自来水冷却至室温 10．加水定容至25mL 后摇匀 总体积
取反应液于540nm 波长下以空白为对照测定其吸光度。
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样品管 2.0 mL — 2.0 mL √ √ 5.0mL √ √ √ √ 25.0mL
空白管 2.0 mL — 2.0 mL(第二步)
√ √ 5.0mL(第一步)
√ √ √ √ 25.0mL
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D10. 试样酶活力的计算
XD??(AE?AB)?K?C0??1000
M?t式（1）中：
XD — 试样稀释液中的甘露聚糖酶活力，U/mL； AE — 酶反应液的吸光度； AB — 酶空白样的吸光度； K — 标准曲线的斜率； CO — 标准曲线的截距；
M — 葡萄糖摩尔质量，M(C6H12O6)=180.2g/mol t— 酶解反应时间，min；
1000—转化因子，1mmol=1000umol
XD 值应在0.04—0.08U/mL 之间。如果不在这个范围内，应重新选择酶液的稀释度，再进行分析测定。
X?XD?DF （2） m式（2）中：
X — 试样纤维素酶的活力，U/g或者U/mL； Df — 试样的总稀释倍数。 m— 称样量
酶活力的计算值保留三位有效数字。 D11. 重复性
同一样品两个平行测定值的相对误差不超过8.0%，二者的平均值为最终的酶活力测定值（保留三位有效数字）。
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附录E 果胶酶活力的测定 （QB1502-1992)
E1 应用范围
本标准适用于以黑曲霉菌(Aspergillus niger)发酵法生产，经提纯制取而得的果胶酶制剂，可供食品工业生产作添加剂用.
本法适用于各种含有果胶酶的复合酶和液体酶及单酶的测定。 E2 活性单位定义
在50℃，pH3.5条件下，1h分解果胶产生1mg半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活单位，单位为U/g或U/mL。 E3方法原理
果胶酶水解果胶，生成半乳糖醛酸。 半乳糖醛酸具有还原性糖醛基，可用次亚碘酸法定量测定，以此来表示果胶酶的活性 E4试剂和溶液
E4.1. 果胶粉(Sigma公司出品):10mg/mL水溶液
称取果胶粉1.000g，精确至0.0002 g，加水溶解，煮沸，冷却。如有不溶物则需进行过滤。调pH3.5 用水定容至100 mL，在冰箱中贮存备用。使用时间不超过3d；
E4.2. 硫代硫酸钠标准溶液c(Na2S2O3)= 0.05 mol/L:按GB601配制与标定0.1mol/L溶液。使用时准确稀释一倍；
E4.3 碳酸钠溶液c(1/2Na2CO3)=lmol/LI按GB601配制;
E4.4碘标准溶液c(1/2 I2)=0.lmol/L:按GB601配制与标定，贮存于棕色瓶中;
E4.5硫酸溶液c(1/2H2S04)=2mol/I:取浓硫酸(d=1.84 )5.6mL,缓慢加人适量水中,冷却后用水定容至100mL，摇匀；
E4.6 可溶性淀粉指示液(10g/L):按GB 603配制； E4.7 0.1mol/L柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液(pH=3.5)
甲液 : 称取柠檬酸(C6H8O7.H2O)21.01g，用水溶解并定容至1000mL；
乙液 : 称取柠檬酸三钠((C6H5Na3O7.2H2O)29.41 g，用水溶解并定容至1000mL； 取甲液 140mL、乙液60mL，混匀，缓冲液的pH应为3.5(用pH计调试) E5 仪器与设备 E5.1. 比色管 25mL；
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E5.2. 恒温水浴50±0.2℃
E5.3 容量瓶 25mL、50 mL、100mL、200mL、,250m1； E5.4 碘量瓶 250mL； E5.5 吸管1mL、5mL； E5.6 滴定管 25mL。 E5 试样溶液制备
E5.1 固体样品的反应用酶液制备
用已知质量的50mL小烧杯，称取样品1.000g,精确至0.0002g，以少量柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液(pH=3.5)溶解，并用玻璃棒捣研，将上清液小心倾人适当的容量瓶中，沉渣再加少量缓冲液，反复捣研3~4次，最后全部移人容量瓶，用缓冲液定容，摇匀，以四层纱布过滤，滤液供测试用； E5.2 液体酶样品反应用酶液制备
准确吸取浓缩酶液1.00mL于一定体积的容量瓶中，用柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液(pH=3. 5)稀释定容; 注：固体酶或浓缩酶液均需准确稀释至一定倍数，酶液浓度应控制在消耗0.05mol/l硫代硫酸钠标准溶液（A-B）之差在0.5-1.0ml范围内。必要时可先做预备试验。 E6 测定步骤，按下表操作 反应顺序
1．加入反应底物于25mL比色管中 2．加入PH=3.5柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 3．反应底物50±0.2℃预热10 分钟 4．电磁振荡3-5s 5．50±0.2℃水解30min
6．立即取出，加热煮沸5min终止反应 7．冷却
8．取反应液于碘量瓶中 9．加入1mol/L碳酸钠溶液 10．加入0.1mol/L碘液 11.电磁振荡3-5s 12.放置暗处20min
13.取出，加入2mol/L硫酸溶液
样品管 5 mL 4mL √ 1 mL √ √ √ 5mL 1mL 5mL √ √ 2mL
空白管 5mL 5mL √ 0 mL √ √ √ 5mL 1mL 5mL √ √
2mL
14.用0.05mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至浅黄色，加淀粉指示剂3滴，继续滴定至蓝色消失为其终点。
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