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E7试样酶活力计算
X?(A?B)?c?0.51?194.14?n??(A?B)?c?n?396.05式（1）中
X一样品的酶活力，U/g(U/mL)；
105?1?0.5 （1）
A一空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL； B —样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL； c一硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L ;；
0. 51一1毫摩尔硫代硫酸钠相当于0.51毫摩尔的游离半乳搪醛酸； 194.14一半乳糖醛酸的毫摩尔质量,mg； n 一酶液稀释倍数； 10—反应液总体积，mL；
5—滴定时取反应混合物的体积,m L；; 1—反应时加人稀释酶液的体积,mL; 0. 5—反应时间，h。 所得结果应表示至整数。
注: 果胶暂定用Sigma公司产品为标准底物。若购不到，使用其他厂产品时，必须做对照试验。 E8 结果允许误差
平行试验，滴定时消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积（毫升）不得超过0.05mL.
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附录F
α-淀粉酶活性测定方法 (GB/T24401-2009)
F 1 淀粉酶活力单位定义 中温α-淀粉酶
1g 固体酶粉（或1mL 液体酶），于60℃、pH =6.0 条件下，1h 液化1g 可溶性淀粉，即为一个酶活单位，以u/g(u/mL)表示。 耐高温α-淀粉酶
1g固体酶粉（或1mL液体酶），于70℃、pH=6.0条件下，1h液化1g可溶性淀粉，即为一个酶活单位，以u/g(u/mL)表示。 F 2 测定原理
α-淀粉酶能将淀粉分子链中的α-1，4 葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活性有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。 F 3 应用范围
本法适用于各种含有α-淀粉酶的复合酶和液体酶及单酶的测定。 F 4 测定条件
F4.1 底物： 可溶性淀粉 F4.2 pH： 6.00
F4.3 温度： 60℃±0.2℃/70℃±0.2℃ F4.4 保温时间： 5min F 5 仪器 F 5.1 分光光度计 F 5.2 恒温水浴 60±0.2℃ F 5.3 秒表
F 5.4 试管 25mm×200mm F 5.5 分析天平：感量0.0001g F 6 试剂
F 6.1 原碘液称取碘11g、碘化钾22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500mL，于棕色瓶中。 F 6.2 稀碘液吸取原碘液（6.1）2.00 mL，加碘化钾20g 用水溶解并定容至500mL，贮于棕色瓶中。
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F 6.3 20g/L 可溶性淀粉溶液 称取可溶性淀粉（以决干计）2.000g，精确至0.001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入70mL 沸水中，然后，以30mL 水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容100mL。此溶液需要当天配制。 注：可溶性淀粉采用酶制剂专用可溶性淀粉。
F 6.4 磷酸缓冲液（pH=6.0）称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）45.23g、一水柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.07g，用水溶解并定容至1000 mL。配好后用pH 计校正。 F 7 样品制备
称取酶粉1~2g，精确至0.0002g（或吸取液体酶1.00mL），先用少量的磷酸缓冲液（6.4）溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾入容量瓶中，沉渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研3~4 次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，摇匀。通过四层纱布过滤，滤液供测定用。（（待测中温α-淀粉酶酶液酶活力浓度控制在3.4 u/mL—4.5 u/mL范围内。；待测耐高温α-淀粉酶活力控制酶浓度在60u/mL—65 u/mL范围内。） F 8 测定步骤，按下表操作：
反应顺序
1．加入底物溶液于比色管 2．加入缓冲液
3．混合，60±0.2℃预热8 分钟 （耐高温α淀粉酶70±0.2℃） 4．加入底物溶液 5．混匀
6．60℃水解5min （耐高温α淀粉酶70±0.2℃） 7．取反应液1mL 于盛有5mL 稀碘液比色管 8．混匀
反应管 20.0 mL 5.0mL √ 1.0mL √ √ √ √
以稀碘液做空白对照，在660nm 波长下测定其上述反应液的吸光度，根据吸光度查表A1，求得测试酶液的浓度（c）。 F 9 计算
中温α-淀粉酶酶活力 X=(c×n)/m （1） 式（1）中：
X——样品的酶活力，U/g（U/mL）； c——测试酶液的浓度，U/mL； n——样品的稀释倍数。
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m——试样质量，g。 所得结果表示至整数。 耐高温α-淀粉酶酶活力 X=(c×n×16.67)/m （2） 式（2）中：
X——样品的酶活力，U/g（U/mL）； c——测试酶液的浓度，U/mL； n——样品的稀释倍数。
16.67—根据酶活力定义计算的换算系数 m——试样质量，g。 所得结果表示至整数。 F10 结果的允许差
平行试验相对误差不得超过5%。
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表1 吸光度与测试α-淀粉酶酶浓度对照表 吸光度(A) 0. 100 0. 101 0.102 0. 103 0.104 0. 105 0. 106 0. 107 0. 108 0. 109 0. 110 0. 111 0. 112 0. 113 0. 114 0. 115 0. 116 0. 117 0. 118 0. 119 0. 120 0. 121 0. 122 0. 123 0. 124 0. 125 0. 126 0. 127 0. 128 0. 129 0. 130
酶浓度(c)／( u/mL) 吸光度(A) 酶浓度(c)/(u/mL) 吸光度(A) 酶浓度( c)/( u/mL) 4. 694 4. 689 4. 684 4. 679 4. 674 4. 669 4. 664 4. 659 4. 654 4. 649 4. 644 4. 639 4. 634 4. 629 4. 624 4. 619 4. 614 4. 609 4. 604 4. 599 4. 594 4. 589 4. 584 4. 579 4. 574 4. 569 4. 564 4. 559 4. 554 4. 549 4. 544 0. 131 0. 132 0. 133 0. 134 0. 135 0. 136 0. 137 0. 138 0. 139 0. 140 0. 141 0. 142 0. 143 0. 144 0. 145 0. 146 0. 147 0. 148 0. 149 0. 150 0. 151 0. 152 0. 153 0. 154 0. 155 0. 156 0. 157 0. 158 0. 159 0. 160 0. 161 4. 539 4. 534 4. 529 4. 524 4. 518 4. 513 4. 507 4. 502 4. 497 4. 492 4. 487 4. 482 4. 477 4. 472 4. 467 4. 462 4. 457 4. 452 4. 447 4. 442 4. 438 4. 433 4. 428 4. 423 4. 418 4. 413 4. 408 4. 404 4. 399 4. 394 4. 389 0. 162 0. 163 0. 164 0. 165 0. 166 0. 167 0. 168 0. 169 0. 170 0. 171 0. 172 0. 173 0. 174 0. 175 0. 176 0. 177 0. 178 0. 179 0. 180 0. 181 0. 182 0. 183 0. 184 0. 185 0. 186 0. 187 0. 188 0. 189 0. 190 0. 191 0. 192 4. 385 4. 380 4. 375 4. 370 4. 366 4. 361 4. 356 4. 352 4. 347 4. 342 4. 338 4. 333 4. 329 4. 324 4. 319 4. 315 4. 310 4. 306 4. 301 4. 297 4. 292 4. 288 4. 283 4. 279 4. 275 4. 270 4. 266 4. 261 4. 257 4. 253 4. 248
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