湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 修改号：0 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-601 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 发行部门：质量管理小组 审核人：肖平 页码：第 6 页 共 62 页 4．检验步骤.(血液培养仪BACTEC 9050操作规程) 4.1 放入培养瓶
4.2 开门前按复位键，打开机箱门。 4.3 按放瓶键
4.4 拿瓶子上的条形码在机器右下角发红光处扫描，听到叫声后扫描完毕。 4.5 根据屏幕显示的位置放入培养瓶。 4.6 按OK键
4.7 按关门键退出，关门。 4.8 取出阴/阳性瓶
4.9 开机前按复位键，开门。
4.10 按阴性瓶键/阳性瓶键指定位置选择取出阴/阳性瓶 4.11 将阴/阳性瓶上的条形码扫描。 4.12 按关门键退出，关门。
4.13 若有阳性瓶，仪器将会自动报警，按以上方法取出阳性瓶，直接涂片镜检，并转种相
关培养基。 5．分级报告
5.1 紧急口头（电话）报告：血培养仪在血液出现阳性时会自动报警，接到报警，将仪器
上培育瓶取出，立即进行转种血平板；涂片革兰染色；镜检。并在最短时间内将结果向临床主管医生进行紧急口头（电话）报告。报告内容应包含以下内容： 5.1.1 报告者全名（或工号）；
5.1.2 报告的时间（无论成功或不成功）； 5.1.3 所联系医生的全名（或工号）； 5.1.4 报告镜检结果,并强调其紧急价值； 5.1.5 确认临床医生收到报告并复述结果。 5.2 做直接药敏试验，第二天报告结果。
5.3 按涂片、染色、纯分血平板菌落形态，选择相应的方法作进一步鉴定及药敏试验。
阳性培养报告最终鉴定结果、最终药敏结果。 6．其他报告和记录
如血液培养仪没有报警，每天必须观察一次，作好记录。五天阴性者，可报告：血液培养五天无细菌生长。
6.1 标本被拒收时，应立即通知临床医生，立即重新采血，并记录在案。
6.2 最终结果与紧急报告结果不符，需变更时，应立即与临床医生沟通，做紧急口头报告。
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 修改号：0 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-601 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 发行部门：质量管理小组 审核人：肖平 页码：第 7 页 共 62 页 同时必须在书面报告上提供正确的结果，同时注明变更的内容。
6.3 其他需要临床医生注意的事项如：本次采血量不足；标本转运时间过长；标本采集份
数不够等信息。 7．检验结果的判断与分析
7.1 急性败血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎、急性未处理的细菌性肺炎和肾盂肾炎，应该
在治疗前从不同部位采集血液标本，分别接种于需氧、厌氧血培养瓶内。 7.2 可疑为心内膜炎，体温不太高的持续菌血症，应增加采血次数。 7.3 急性病例：治疗前在1-3h内在3个不同部位取3份标本。
7.4 亚急性病例：第1天取3个标本，24h后，若全阴性再取3个标本。 7.5 若已用了抗生素的心内膜炎患者，连续3天每天取2个标本。
7.6 已用抗生素治疗的其他患者，在48h内取6个血标本，每次在使用抗生素前采标本。 8．血液培养中常见的病原菌
革兰阳性菌: 革兰阴性菌: 葡萄球菌属 脑膜炎奈瑟菌 链球菌属 卡他莫拉菌 肠球菌属 伤寒及副伤寒沙门菌 厌氧链球菌 肠杆菌科细菌 李斯特菌属（产单核） 假单胞菌属 产气荚膜梭菌 不动杆菌属 丙酸杆菌 流感嗜血杆菌 念珠菌 弯曲菌属 拟杆菌属 梭杆菌属 9．操作流程
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 修改号：0 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-601 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 发行部门：质量管理小组 审核人：肖平 页码：第 8 页 共 62 页
血液、骨髓
（需氧及厌氧）
涂片、染色、镜检 分离培养 直接药敏试验
需氧培养 真菌培养 厌氧培养 35℃ 及CO环境培养 （血琼脂平板 4—6h （血琼脂平板和 等分离培养基）
巧克力琼脂平板） 初步报告 菌落观察
涂片、革兰染色、镜检 纯培养
血清学检查 确定报告 生化反应试验、药敏试验
最终报告 参考文献
《全国临床检验操作规程》（第3版） 《BACT9050血培养仪使用说书》
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：脑脊液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-602 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 9 页 共 62 页 1. 目的
规范脑脊液标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围 脑脊液培养。 3. 标本
3.1 标本类型 脑脊液。 3.2 标本采集
由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2ml～3ml，盛于无菌容器中送检。脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。 3.3 标本拒收标准
3.3.1 标本标识与化验申请单不符。 3.3.2 标本未用无菌试管留取。 3.4 标本保存
采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，放置时间不应超过2h，切勿放冰箱，否则影响检出率。 4. 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试剂等。
4.2药敏纸片、ATB板条/TDR系统鉴定卡及药敏板等，有效期及储存条件参见试剂说明书。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2 培养箱等。 5. 细菌鉴定和药敏质控
参见质量管理。 6. 检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查
6.1.1 一般细菌涂片检查 外观混浊或脓样脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min 10min～15min离心后取沉淀物涂片、革兰染色、镜检。根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。
6.1.2 新生隐球菌涂片检查 取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基上，置于35℃培养2日～5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。必要时可作生化反应进一步鉴定。 6.2 分离培养
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：脑脊液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-602 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 10 页 共 62 页 6.2.1 用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和中国蓝平板，置于5%~10%CO2 环境中35℃培养18～24 h，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。 7. 操作流程
8. 结果报告
无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通知临床医师。查见细菌，报告菌名和药敏结果。经培养48h，仍无细菌生长者，报告“培养2日无细菌生长”。 9. 注意事项
9.1 抽取的脑脊液分置于无菌试管中，迅速送至实验室，病毒、霉菌、分支杆菌培养样本置4 ℃
保存待送。
9.2 流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡，脑膜炎奈瑟菌对寒冷和干燥均很敏感，在体外容易
自溶，故不论是涂片镜检还是进行培养均应及时送检。 10. 临床意义
正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性化脓性或结核性等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌居第二位。5岁以下儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血杆菌，结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。85%脑脓肿患者脑脊液培养可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。 11. 危急值报告
直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。
离心 脑脊液 血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板5% CO2 35℃培观察菌落特征 及涂片、染色 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 发出报告 沉淀物涂片、染色