湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：生殖道标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-606 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 31 页 共 62 页 1. 目的
规范生殖道标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围
生殖道标本培养或涂片检查。 3. 标本
3.1 标本类型 生殖道标本。 3.2 标本采集
3.2.1 女性 由临床医师用无菌棉拭采集阴道、宫颈分泌物。怀疑盆腔厌氧菌感染时，由医
师用注射器从阴道后穹窿处穿刺抽取标本，立即床边接种于厌氧菌平板。
3.2.2 男性 翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，清水冲洗，采集尿道口分泌物。采集前列腺
液时，先冲洗尿道和膀胱，用手指从肛门内按摩前列腺，使前列腺液溢出。
3.2.3 梅毒螺旋体标本 从外生殖器的硬下疳处蘸取渗出液，置于载玻片上，加盖玻片后立
即送检。 3.3 标本拒收标准
3.3.1 申请单项目与标本不符。 3.3.2 标本不是用无菌容器留取. 4. 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试
剂等。
4.2全自动血培养系统、ATB Expression鉴定系统和TDR系统鉴定卡及药敏板、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2 培养箱等。 5. 细菌鉴定和药敏质控
参见质量管理。 6. 检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查
6.1.1 革兰染色镜检 观察有无细菌，以及细菌形态和染色性，尤其注意观察有无白细胞内
外的革兰阴性双球菌（淋病奈瑟菌）；阴道分泌物中有无覆盖大量革兰阴性菌的上皮细胞（线索细胞，提示可能有阴道加特纳菌感染）。 6.2 分离培养
6.2.1 一般细菌培养 接种血琼脂平板和中国蓝琼脂平板，置5%~10%CO2环境条件下， 35℃
培养18～24 h。
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：生殖道标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-606 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 32 页 共 62 页 6.2.2 淋病奈瑟菌培养 接种于GC琼脂平板，置5%～10％CO2 条件下，35℃培养18～24 h，
观察有无较小、灰白色、露滴状菌落形成，进一步生化鉴定。6.2.3 阴道加特纳菌培养 接种于含5％羊血琼脂平板，在5％～10％CO2 环境培养48h，观察有无形成针尖大小（0.3～0.5mm）、圆形、光滑、不透明、不溶血（在人血或兔血琼脂平板上可出现β溶血）的菌落。 7. 操作流程
8. 结果报告
报告菌名和抗菌药物药敏试验结果。 9. 注意事项
取阴道分泌物之前避免性生活、阴道冲洗和用药。 10. 临床意义
正常的内生殖道是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细菌寄生，如尿道口常见有葡萄球菌、类白喉棒杆菌和非结核分枝杆菌等，阴道常见有乳杆菌、双歧杆菌、消化球菌等。查见病原菌提示有细菌感染，如急、慢性前列腺炎，睾丸炎，精
发出报告 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 观察菌落特征 及涂片、染色 厌氧血 平板生长 耐氧试验 涂片染色 生殖道标本 需氧培养 厌氧培养 淋球菌平板35℃5%~10% CO2培养18～24ｈ 血琼脂平板、中国蓝平板35 ℃培养18～24 h 厌氧血琼脂平板35℃厌氧环境培养24～48 h 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：生殖道标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-606 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 33 页 共 62 页 囊炎，附睾炎，阴道炎，急、慢性淋病等。常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、变形杆菌等。 10.参考文献
1 CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》, 2008
2周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 2007
3 叶应妩, 王毓三, 申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第3版 .南京: 东南大学出版社, 2006 4 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 8th ed. Washington: ASM Press, 2007 5 ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》, 2007
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：粪便标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-607 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 34 页 共 62 页 1. 目的
规范粪便标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围
粪便培养。 3. 标本
3.1 标本类型 粪便，直肠拭子。 3.2 标本采集
3.2.1 自然排便采集 自然排便后，挑取其脓血、黏液部分2～3g，液体粪便取絮状物2～
3ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液（运送培养基）、增菌培养基中送检。 3.2.2 直肠拭子 如不易获得粪便时，或排便困难患者及婴儿，可用直肠拭子采取，即以
无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm(幼儿2～3cm)轻轻转动取出，插入卡-布（Cary-Blair）运送培养基内或无菌容器内送检。
3.2.3 粪便标本应该立即送检，室温保存不能超过2h，如不能及时送检可以放入磷酸盐甘
油（PH7.0）或转运培养基，但不能超过24h。培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100mg/L)试剂。 3.3 标本拒收标准
3.3.1 粪便标本放置时间超过2h。 3.3.2 送检的粪便标本混有尿液。 3.3.3 直肠拭子未置于运送培养基中。 4. 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、中国蓝平板、SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。 4. 全自动血培养系统、ATB Expression鉴定系统和TDR系统鉴定卡及药敏板、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2 培养箱等。 4.4 诊断血清。
5. 细菌鉴定和药敏质控
参见质量管理。 6. 检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查 粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病
原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查（观察动力和菌群比例）。
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：粪便标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-607 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 35 页 共 62 页 6.2 培养
6.2.1 沙门-志贺菌培养 参见《沙门菌属检验操作规程》、《志贺菌属检验操作规程》。 6.2.2 致病性大肠埃希菌培养 参见《致病性大肠埃希菌检验操作规程》。 6.2.3 霍乱弧菌培养 参见《霍乱弧菌检验操作规程》 。 6.2.4 副溶血弧菌培养 参见《副溶血弧菌检验操作规程》。
6.2.5 小肠结肠炎耶尔森菌培养 参见《耶尔森菌属检验操作规程》。 6.2.6 金黄色葡萄球菌培养 参见《葡萄球菌属检验操作规程》。 6.2.7 真菌培养 参见《真菌检验操作规程》。
6.2.10 气单胞菌和邻单胞菌的培养 参见《气单胞菌属检验操作规程》和《邻单胞菌属检
验操作规程》。 7. 操作流程
发出报告 发出报告 发出报告 血清学鉴定 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 双糖铁或 三糖铁试验 观察菌落特征 及涂片、染色 血清学鉴定 TCBS平板 观察菌落特征 及涂片、染色 Campy-BA平板35℃微需氧培养48 h 观察菌落特征 及涂片、染色 山梨醇麦 康凯平板 需氧培养 粪便或肛拭 根据临床要求 SS、XLD或 HE平板35℃ 培养18～24 h 分离弯曲菌 分离弧菌 分离致病性 大肠埃希菌O157 8. 结果报告
查出肠道致病菌，报告其菌名和药敏结果。 9. 注意事项