湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-603 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 21 页 共 62 页 血琼脂平板 巧克力平板 中国蓝
必要时可增加 CO2环境下培养
厌氧培养 需氧培养
35℃,18-24h
观察菌落和涂片染色镜检
各种鉴定试验 药物敏感性试验
报告
7参考文献：
《全国临床检验操作规程》（第3版）
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：穿刺液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-604 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 22 页 共 62 页 1. 目的
规范穿刺液标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围
穿刺液标本培养。 3. 标本
3.1 标本类型 胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。 3.2 标本采集
采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约2ml，注入无菌试管，或抽取穿刺液1～2ml注入多功能体液培养瓶，或抽取穿刺液2～5ml注入血培养瓶，混匀，立即送检。如怀疑厌氧菌感染，应做床边接种或接种运送培养基。 3.3 标本拒收标准
3.3.1 标本标识与化验申请单不符。 3.3.2 标本不是无菌留取，容器不符合要求。 3.4 标本保存
采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，放置时间不应超过2h。 4. 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试剂等。
4.2全自动血培养系统、ATB Expression鉴定系统和TDR系统鉴定卡及药敏板、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2 培养箱等。 5. 细菌鉴定和药敏质控
参见质量管理。 6. 检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查 脓性标本直接涂片。浆液性标本先离心（3000r／min，15min），取沉淀物涂片作革兰染色，观察有无细菌，以及细菌的形态。
6.2 分离培养
6.2.1 一般细菌培养 接种血琼脂平板、巧克力琼脂平板和中国蓝琼脂平板（或EMB及中国蓝琼脂平板），5％～10％CO2 条件下，35℃培养18～24 h，根据菌落及染色形态特点，作出初步判断。
6.2.2 增菌-分离培养法 将多功能体液培养瓶颠倒混匀使液体覆盖整个固体面，然后置35℃孵育箱培养（固体面在上，液体在下）。次日观察固体表面菌苔生长及瓶中液体是否混
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：穿刺液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-604 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 23 页 共 62 页 浊。如发现有菌生长，立即涂片镜检、生化鉴定和药敏试验。此法可提高阳性检出率。 6.2.3 厌氧菌培养 床边接种或从厌氧运送培养基转种后，立即置厌氧环境中，35℃培养24～48h；挑取可疑菌落作耐氧试验，确定为厌氧菌。 操作流程
7. 结果报告
培养48h无细菌生长，报告“培养2日无细菌生长”。 查见细菌，报告菌名和药敏结果。 8. 注意事项
9.1 标本的采集一定要严格履行无菌操作技术，避免污染。
9.2 加入抗凝剂的标本（如胸腹水）采集后要与抗凝剂充分混匀并及时送检。 9.3 体液均需做厌氧培养，故输送过程严格厌氧环境。 9. 临床意义
各个部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）的细菌学检查对于确定该部位是否有细菌感染具有重要的诊断价值。正常穿刺液是无菌的，若从患者穿刺液中查见致病菌或条件致病菌则提示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见，其次是金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等；腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠埃希菌、粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等多见。
厌氧血 平板生长 发出报告 耐氧试验 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 厌氧血琼脂平板35℃沉淀物涂片、染色 厌氧环境培养24～48h 涂片、染色 有菌生长 培养2日或5日无细菌生长可发出报厌氧培养 离心 穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液 多功能体液培养瓶 或血培养瓶 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：穿刺液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-604 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 24 页 共 62 页 参考文献
1 CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》, 2013
2周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 2007 3 叶应妩, 王毓三, 申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第3版 .南京: 东南大学出版社, 2006
4 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 2007 5 ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》, 2007
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-605 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 25 页 共 62 页 1. 目的
规范尿液标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围
尿液。 3. 标本
3.1 标本类型 尿液。 3.2 标本采集
3.2.1 中段尿标本采集法
3.2.1.1 女性 先以肥皂水清洗外阴部，再以无菌水冲洗，用无菌纱布擦拭，以手指将阴唇
分开排尿，弃去前段尿，留取中段尿5～7ml于无菌试管内。
3.2.1.2 男性 翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水冲洗，留取中段尿。
3.2.1.3 儿童、婴儿 先以无菌生理盐水棉球洗净其外阴部或外生殖器，将无菌试管或瓶口
对准尿道口，以胶布固定于皮肤上，待尿排出后送检。
3.2.2 两侧肾盂尿 由专科医生采集，左右侧标本必须标明，避免混淆而误诊。
3.2.3 膀胱穿刺 此法用于厌氧菌培养。耻骨上皮肤经碘酒消毒后，再以75％乙醇擦拭，
用无菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器内的空气，针头插于无菌橡皮塞上送检。
3.2.4 尿标本采集应及时送检，2h内进行接种。 3.3 标本拒收标准
3.3.1 申请单项目与标本不符。 3.3.2 尿标本不是用无菌容器留取。 3.3.3 送标本的时间在采集标本后超过2h。 3.4 标本保存
采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置冰箱。 4. 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试剂等。
4.2全自动血培养系统、ATB Expression鉴定系统和TDR系统鉴定卡及药敏板、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2 培养箱等。 5. 细菌鉴定和药敏质控
参见质量管理。 6. 检验步骤