湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-605 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 26 页 共 62 页 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查
6.1.1 一般细菌涂片 以无菌操作吸取尿液5～10ml，3000r／min离心沉淀15min，取沉淀物作涂片及革兰染色，镜检，可提示有无细菌及细菌种类。
6.1.2 真菌涂片 取尿液沉淀物放于清洁玻片上，覆以盖玻片，略加压力，制成涂片，用高倍镜检查。如发现发亮的芽生孢子和假菌丝，就可报告“找到酵母样细胞，形似念珠菌”。
6.2 一般细菌培养
取中段尿，用定量接种环取尿液10ul接种于血琼脂平板和中国蓝（或EMB）营养琼脂平板上，5%~10%CO2 ,35℃培养18～24 h，观察有无菌落生长，并进行菌落计数。平板生长菌落数乘以100即每毫升尿液的菌落数。根据菌落特征和涂片、染色结果，选择相应的方法作进一步鉴定。 6.3 特殊菌培养
6.3.1 淋病奈瑟菌培养 选用淋球菌琼脂平板等，放入5%~10%CO2 环境中培养。 6.3.2 厌氧菌培养 必须用膀胱穿刺尿进行培养，接种厌氧琼脂平板，并在厌氧环境培养。 操作流程
手工或仪器细菌鉴定及药敏 观察菌落特征及涂片、染色 一般细菌涂片、 染色、镜检 菌落计数 血琼脂和中国蓝平板35℃ 培养18-24 h GC琼脂平板定量培养 淋球菌培养 尿液 5%~10% CO2 35℃培养18-24 h 发出报告 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-605 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 27 页 共 62 页 7. 结果报告
8.1 尿液细菌培养检查必须报告细菌的种属、菌落计数及药敏结果。 8.2 阳性结果报告
8.2.1 无明确意义的阳性结果报告——纯培养：革兰X性X菌生长，菌落数XX CFU/ml；混
合菌生长：革兰X性X菌生长，菌落数XX CFU/ml，注明是混合菌。 8.2.2 有意义的阳性结果报告：报告细菌种名、药敏结果及菌落数。 8.3 阴性结果报告：培养48h无菌落生长，即为阴性。
8.4 若尿液培养同时有≥3种细菌生长时，可视为污染标本，建议重留送检。 8. 注意事项
9.1 尿液标本不可置肉汤中进行增菌培养。 9.2 中段尿标本不可做厌氧菌培养。
9.3 收集尿液过程中，请勿将手伸入容器中，且避免尿液勿溢出容器，以免污染（以无菌导
管技术收集尿液的方法已被淘汰）。 9. 临床意义
尿液的细菌学检查（中段尿培养加计数）对于泌尿道感染的诊断有重要价值。正常尿液是无菌的，而外尿道有正常菌群寄生，标本的采集必须无菌操作。另外，细菌培养必须结合菌落
计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105 CFU /ml，提示感染（膀胱炎、肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、肠球菌等。 10. 危急值报告
如查出抗酸杆菌阳性，则应及时向临床报告并报作传染病报告。 参考文献
1 CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》, 2008 2周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 2007 3 叶应妩, 王毓三, 申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第3版 .南京: 东南大学出版社, 2006
4 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 2007 5 ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》, 2007 操作规程： 1．概述
尿液的细菌学检查（中段尿培养加菌落计数）对于泌尿道感染的诊断有重要价值。正常
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-605 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 28 页 共 62 页 尿液是无菌的，而外尿道有正常菌群寄生，标本的采集必须无菌操作。另外，细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105cfu/ml,提示泌尿道感染，膀胱炎、肾盂肾炎等。 2．标本采集
一般原则：先用水和中性肥皂清洁阴部，特别是会阴部应前后擦拭干净（男性则清洁阴茎前端，特别是包皮附近）。将阴唇用手指向两旁拨开，先排弃前段尿液。 2.1在应用抗菌药物前采集晨起第一次尿液，不加防腐剂及消毒剂。 2.2以无菌容器收集，小心打开容器盖子后，接取中段尿液5ml—10ml。
2.3盖上容器盖子,送至微生物实验室。若不能马上送检或检验人员不能立刻接种于适当培
养基时，应将样本置于冰箱（4～8℃）内保存，最好不要超过2小时。若培养基长出多种细菌混合生长，可能由于采样本时受到污染所致，应退回重新采集。 2.4沙门氏菌感染：病后2周采集。
2.5结核分枝杆菌感染：留取晨尿或24小时尿沉渣部分10ml－15ml送检。若培养，患者
应停药1－2天后采集尿液送检。 3．标本拒收标准
3.1申请单项目与标本不符。 3.2尿液标本不是无菌容器留取。 3.3送标本时间已明显拖延。 4．检验步骤
留检的尿液标本应立即送检，否则尿中细菌迅速繁殖，使菌落计数不可靠而影响诊断。 实验室接到标本后，须立即进行涂片和培养。 4.1涂片检查：
4.1.1一般细菌涂片：以无菌操作吸取尿5-10ml，放入无菌试管内，经3 000r/min离心15min
后，倾去上清液，取其沉淀，制成涂片，革兰染色，镜检。如发现有革兰阴性或阳性细菌，即可做出报告。
4.1.2淋球菌涂片：尿标本如(1)处理后另制一张涂片以革兰氏染色，镜检。如查见细菌并为
革兰阴性双球菌，肾形，存在于细胞内或细胞外，经培养证实后方可做出报告。 4.1.3念珠菌涂片：将尿液离心沉淀后，取沉淀物放于洁净玻片上，覆以盖玻片，略加压力，
使成薄片，直接用高倍镜观察。发现有卵圆形的芽生孢子和管状的假菌丝，且革兰染色为阳性，就可报告检出念珠菌。
4.2一般细菌培养：
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-605 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 29 页 共 62 页 4.2.1尿液定量培养
用定量接种环取尿液10μl，垂直划线在血平板、中国蓝培养基上，35℃18-24小时培养，计数生长的菌落数，乘以100，求出每ml的细菌数。根据菌落形态特征和涂片染色结果，选择相应的方法作进一步鉴定。
4.2.2对怀疑有苛养菌感染者应加种巧克力平板，置5%CO2环境中培养48小时。 4.3特殊菌培养
4.3.1淋病奈瑟菌培养：接到标本后立即接种于巧克力平板，置35℃，5%-10%CO2环境下
培养24h，若无菌生长，则继续培养至48h。若有小而隆起、湿润、透明的菌落，涂片镜检为革兰阴性肾形双球菌，则按淋病奈瑟进行鉴定。
4.3.2厌氧菌培养：必须用膀胱穿刺尿进行培养，接种厌氧琼脂平板。 5．检验结果的判断与分析
5.1尿液细菌培养检查必须报告细菌的种属、菌落计数及药敏结果。
5.2阳性结果报告：XXX细菌生长，菌落计数>105cfu/ml及药敏结果。混合菌感染：XXX
细菌生长，菌落计数>105cfu/ml(阴性杆菌)及药敏结果。XXX细菌生长，菌落计数>104cfu/ml（阳性球菌）及药敏结果。 5.3阴性报告结果：48小时培养无细菌生长。 6．尿液培养常见病原菌
尿培养常见病原菌
革兰阳性菌 革兰阴性菌 葡萄球菌属 淋病奈瑟菌 链球菌属 大肠埃希菌属 肠球菌属 变形杆菌属 结核分枝杆菌 克雷伯菌属 真菌 肠杆菌属 沙门菌属 沙雷菌属 假单胞菌属等 7．操作流程
湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：版本号：2 HNZLYY/LAB-SOP-WSW-605 生效日期：2013-07-01 编制人：陈建国 批准人：吴白平 审核人：肖平 修改号：0 发行部门：质量管理小组 页码：第 30 页 共 62 页 尿液
涂片 定量培养 分离培养 淋病奈瑟菌培养
直 离 计数菌落 血琼脂平板 专用巧克力琼脂平板
接 心 中国蓝琼脂 涂 沉 CO2 5%-105℃18-24h 片 淀 35℃,18-24h 、 涂 革 片 兰 、
染 特 观察菌落 色 殊
、 细 涂片、染色 鉴定 药物敏感性 镜 菌 镜 检 试验 试 验 检 检
查 报告 8．参考文献
《全国临床检验操作规程》（第3版）