（7）凝胶图象分析
将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。（具体方法参照凝胶成像仪说明）
（8）电泳干胶的制作过程
实验内容：
制作电泳干胶，以便长期保存实验结果，将来也可对干胶进行回收，用于质谱分析。 实验材料：
玻璃纸，玻璃板（使用配电泳胶的短板即可），夹子，甘油（丙三醇），电泳胶，玻璃试管，培养皿。 实验步骤：
1. 玻璃板洗干净，裁两张比玻璃板稍大一些的玻璃纸。 2. 配制10%甘油溶液100 mL，置于培养皿中。
3. 将脱色后的电泳胶和两张玻璃纸都浸泡在甘油溶液中，10 min。 4. 将一张玻璃纸取出，平整地铺在玻璃板上，用试管赶尽气泡。
5. 将电泳胶铺于玻璃纸上，然后将玻璃板斜靠在培养皿上，使一端浸入液体中。（在胶上多浇些液体，不容易进气泡）
6. 将另一张玻璃纸铺于胶上，先将一端靠近底下那张玻璃纸，对齐，然后再慢慢地放下上面这张玻璃纸，其间可以用试管盛些液体浇于胶上。然后用试管压平玻璃纸，防止胶与两张玻璃纸之间有气泡。
7. 将四边多露出玻璃板的玻璃纸反折至玻璃板另一侧，用夹子夹上。 8. 60℃左右烘箱中放置1.5 h后取出，放室内自然风干一晚后拆下装置即可。 附录
10×TBS pH7.6
200mL 1M Tris-HCl(24.228 g Tris,HCl调pH7.6) 80～100 g NaCl
定容至1000mL,用时10倍稀释 TBST
1×TBS 1000mL
Tween-20 1mL
Transfer buffer pH9.2
Tris 5.82g Glycine 2.93g 0.375g SDS or 3.75mL of 10%SDS Methanol 200mL
定容至1000mL，不用调pH值 5×loading buffer（还原型）
1M Tris-HCl pH6.8 0.6mL 50% glycerol 5 mL 10% SDS 2 mL β-巯基乙醇 0.5mL 1% 溴酚蓝 1 mL 超纯水 0.9mL
10％SDS
SDS 10g 蒸馏水至 100mL
加热溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 10％过硫酸胺（AP）
过硫酸胺 0.1g
超纯水 0.9mL
溶解后，4℃保存，保存时间为1~2周。 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）
Tris (MW121.14) 45.43g 超纯水 200mL
溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250mL。 0.5mol/L Tris·HCl（pH6.8）
Tris (MW121.14) 15.14g
超纯水 200mL
溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250mL。 30％Acr/Bic
丙稀酰胺（Acr） 58g
甲叉双丙稀酰胺（Bic） 2g 超纯水至 200mL
加热溶解后，4℃保存。应先分别溶解。 G250考马斯亮蓝溶液（测蛋白含量专用） 考马斯亮蓝G250 100mg 乙醇 50mL 磷酸 100mL 蒸馏水至 1000mL
配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入水和磷酸，混匀后，用滤纸过滤
R250考马斯亮蓝溶液
考马斯亮蓝R250 625mg
甲醇 250mL 乙酸 50mL 蒸馏水至 500mL
配制时，先用甲醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入水和乙酸 脱色液（30%甲醇，10%乙酸）
甲醇 150mL 乙酸 50mL 蒸馏水至 500mL
10×电极缓冲液
Tris 30g Glycine 144g 10% SDS 100mL 蒸馏水至 1000mL
12％分离胶
（1块胶，5mL） （2块胶，10mL） （4块胶，15mL） 超纯水 1.6mL 3.3mL 4.9mL 30?r/Bic 2.0mL 4.0mL 6.0mL
1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）1.3mL
2.5mL 3.8mL
10%SDS 50?L 100?L 150?L
10%AP（过硫酸胺） 50?L 100?L 150?L
TEMED 2?L 4?L 6?L
5％浓缩胶
（1块胶，2mL） （2块胶，3mL） （4块胶，5mL） 超纯水 1.4mL 2.1mL 3.4mL 30?r/Bic 0.33mL 0.5mL 0.83mL
0.5 mol/L Tris·HCl（pH6.8）0.25mL
0.38mL 0.63mL
10%SDS 20?L 30?L 50?L
10%AP（过硫酸胺） 20?L 30?L 50?L
TEMED 2?L 3?L 5?L
三．酵母菌株筛选及其发酵技术与方法 1.教学目的与要求：
1）学会一般培养基的制备原理、方法。 2）掌握酵母菌种的复苏、筛选方法。 3）掌握酵母发酵工艺流程及具体操作方法。
2.教学内容：
毕赤酵母表达系统：30年前，Koichi Ogata报道，某些酵母菌能利用甲醇作为唯一碳源和能源。这些嗜甲醇酵母立刻引起人们极大关注，因为它可作为一种单细胞蛋白推向市场，成为高蛋白动物的饲料。90年代，Philips Petroleum公司对巴氏毕赤酵母的连续培养技术进行开发，使细胞产量高达130g干细胞/升。后来，Philips Petroleum公司和Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates，
Inc.(SIBIA)合作，将巴斯德毕赤酵母开发为一种蛋白表达系统，结果大获成功。由于此表达系统结合了为生产单细胞蛋白而开发的高密度发酵技术及醇氧化酶的可控型强启动子，外源蛋白的表达水平较高。
毕赤酵母发酵产物的累积不会对自身产生毒副作用，且毕赤酵母的表达菌株很容易从摇瓶培养扩大到大批量高密度发酵，不影响外源基因的表达水平。这注定了毕赤酵母具有可用于高密度发酵的巨大潜力。
（1）外界条件对酵母菌的影响：
营养：酵母菌同其它活的有机体一样需要相似的营养物质，像细菌一样，它有一套胞内和胞外酶系统，用以将大分子物质分解成细胞新陈代谢易利用的小分子物质。
水分：像细菌一样，酵母菌必须有水才能存活，但酵母需要的水分比细菌少，某些酵母能在水分极少的环境中生长，如蜂蜜和果酱，这表明它们对渗透压有相当高的耐受性。
酸度：酵母菌能在pH为3～7.5 的范围内生长，最适pH为4.5～5.0。 温度：在低于水的冰点或者高于47 ℃的温度下, 酵母细胞一般不能生长，最适生长温度一般在20～30 ℃之间。酵母在低温0 ℃休眠。
氧气：酵母菌在有氧和无氧的环境中都能生长，即酵母菌是兼性厌氧菌，在缺氧的情况下，酵母菌把糖分解成酒精和水。在有氧的情况下，它把糖分解成二氧化碳和水，在有氧存在时，酵母菌生长较快。
（2）培养基配方：
1．YPD液体培养基: 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 甘油 10mL
加入去离子水500mL，高压灭菌。 2．YPD固体培养基: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 琼脂粉 10g