生物化学实验报告
5.2【酶最适温度】
表4-11最适温度
管号 温度（℃） 测活缓冲液（ml） 酶液（ml） 底物溶液（ml） OD650
1 20 2 30 3 40 4 50 2.5 5 60 6 70 7 80 8 90 20uL 2.5 0.058 0.066 0.069 0.056 0.051 0.020 0.044 0.022 OD最适温度0.080.070.060.050.040.030.020.0100
1020304050图4-4
60708090T100
由图示所知，最适温度为70度
5.3【酶最适pH】
31
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表4-12 pH值的测定
pH 缓冲液体积/ml 样品体积/ml 底物体积/ml OD值△OD
4 2 0.01 0.05 5 2 0.01 0.05 0.062 0.009 0.053 6 2 0.01 0.05 0.169 0.141 0.028 7 2 0.01 0.05 0.12 0.106 0.014 8 2 0.01 0.05 0.167 0.005 9 2 0.01 0.05 0.07 0.086 10 2 0.01 0.05 0.035 0.072 始 0.063 0.042 （650nm） 末 0.021 0.162 -0.016 -0.037 △OD0.10.080.060.040.020-0.02
pH影响pH0246图4-6
81012
根据图中所示，最适pH为8左右
5.4【Km测定】
3min
表4-13 底物浓度的影响
测活缓冲液一号 1.8 二号 2.4 三号 2.7 四号 2.85 五号 2.92 六号 2.96 32
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体积/ml 底物体积/ml 样品体积/ml OD值
1.19 0.01 0.59 0.01 0.381 0.361 0.29 0.01 0.193 0.177 0.14 0.01 0.099 0.078 0.07 0.01 0.054 0.043 0.03 0.01 0.026 0.018 始 0.726 （650nm） 末 0.697 标准蛋白3mg/ml
表4-14
S v 1/s 1/v
一号 1.19 二号 0.59 三号 0.29 四号 0.14 五号 0.07 六号 0.03 0.00267 33.33 375 0.00967 0.00667 0.00533 0.00700 0.00367 0.84 103 1.69 150 3.45 188 7.14 143 14.29 273 1/v4504003503002502001501881501001435010300.005.0010.00双倒数曲线y = 7.7423x + 126.87R2 = 0.90133752731/S15.00
33
20.00图4-7
25.0030.0035.00
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图4-8
1/Vm = 7.7423x1/[S] + 126.87 1/Km=16.39 Km=0.061
5.5【脲的抑制作用】
表4-15 脲的抑制
测活缓冲液体积/ml 底物体积/ml 10mol/脲 样品体积/ml OD值始 （650nm） 末 一号 0 1.2 1.8 0.01 0.233 0.165 二号 0.6 0.6 1,8 0.01 0.333 0.258 三号 0.9 0.3 1.8 0.01 0.168 0.108 四号 1.05 0.15 1.8 0.01 0.629 0.511 五号 1.11 0.08 1.8 0.01 0.054 0.027 六号 1.16 0.04 1.8 0.01 0.019 -0.002 34
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表4-16 数据
一号 △OD 0.068 [S] 1.2 V 0.022667 1/[S] 0.83 1/V 44
二号 三号 四号 0.075 0.06 0.118 0.6 0.3 0.15 0.025 0.02 0.039333 1.67 3.33 6.67 40 50 25 五号 0.027 0.08 0.009 12.50 111 六号 0.021 0.04 0.007 25.00 143 1/V1601401201008060405044204025005
脲抑制倒数曲线y = 4.6127x + 30.479R2 = 0.82331431111015图4-9
20251/[S]30
35